黑龙江省牡丹江医学院第二附属医院157011
摘要：目的探讨肺炎患儿CD16﹢CD56﹢、CD16﹢NK细胞占淋巴细胞比例的动态变化及其意义。方法采用流式细胞仪动态监测急性肺炎患儿126例治疗第2,5,10天及60例健康对照组儿童外周血CD16﹢CD56﹢、CD16﹢NK细胞占淋巴细胞比例的变化。结果肺炎患儿CD16﹢CD56﹢、CD16﹢NK细胞占淋巴细胞比例在急性期、恢复期和康复期均显著低于健康对照组（Pa＜0.01）,急性期、恢复期和康复期3组比较，杀伤活性强的NK细胞逐渐增高，各组比较有显著差异。结论病毒性肺炎患儿免疫系统严重紊乱，动态监测肺炎患儿外周血CD16﹢CD56﹢、CD16﹢NK细胞占淋巴细胞比例对预测其病程及预后有重要意义。
关键词：肺炎；自然杀伤细胞；
人自然杀伤细胞（NK细胞）约占淋巴细胞的15％，能迅速产生细胞因子和趋化因子，且无需预先致敏即能杀伤靶细胞，是非特异性免疫系统的主要组分之一⑴。CD16﹢CD56﹢、CD16﹢NK细胞代表较成熟NK的细胞，杀伤功能强，监测CD16﹢CD56﹢、CD16﹢NK细胞占淋巴细胞比例,可反映患儿的免疫功能。现将检测本院肺炎患儿CD16﹢CD56﹢、CD16﹢NK细胞占淋巴细胞比例的动态变化报告如下。
1资料与方法
1.1一般资料我院2014年1月-2014年12月收治的126例病毒性肺炎患者为治疗组，诊断标准参
照第4版《儿科学》，根据ELISA方法监测病毒特异性IgM抗体阳性者确诊为病毒性肺炎。126例患儿其中男71例，女55例；年龄2-48个月，平均（14.3±10.5）个月；病毒感染类型：副流感病毒45例，流感病毒40例，呼吸道合胞病毒25例，腺病毒16例。对照组：同期门诊保健的健康儿童60例，男32例，女28例；年龄2-46个月，平均（14.3±10.5）个月。无器质性病变，近一个月内未患过呼吸道感染、发热或其他疾病者。
1.2方法
1.2.1试剂人CD16﹢、CD56﹢抗体购自BD公司。
1.2.2标本采集治疗组分别在肺炎第2,5，10天采血，健康对照组于体检当天采血，二组均空腹抽取静脉血4ml肝素抗凝。按照1：10加入红细胞裂解液，5min后1000rpm/min离心3in弃上清，沉淀用PBS洗涤两次，用于后续分析。
1.2.3流式细胞仪检测：分别取上述处理样本，细胞数量调整到1-2×106/管，均用PBS+1﹪BSA冰上封闭30min,离心弃上清，重悬于100ulPBS+1﹪BSA缓冲液中，加入小鼠抗人CD16﹢FITC和CD56﹢-PE各1ul,4℃避光孵育30min,结束后用PBS清洗3次，重悬于500ulPBS缓冲液用流式细胞仪进行检测。每个样本重复3次。在单个水平分析CD16﹢、CD56﹢表达。
1.3统计学处理采用SPSS11.0软件进行处理，计量资料用x±s表示，均数间比较采用t检验。
2.结果各组CD16﹢CD56﹢、CD16﹢NK细胞占淋巴细胞比例见表1
3.表1肺炎治疗组不同时间和健康对照组儿童血CD16﹢CD56﹢、CD16﹢NK细胞占淋巴细胞比例(±s)
组别nNK细胞占淋巴细胞比例
治疗组第2天1260.45±0.21﹡
第5天1260.86±0.19△
第10天1261.66±0.23○
健康对照组606.56±1.66﹟
﹡与△比较t=6.85,﹡与○比较t=19.58，﹡与﹟比较t=20.36,△与○比较t=14.62，△与﹟比较t=16.69Pa＜0.01
牡丹江市科学技术计划项目合同编号：Z2014s087
3.讨论
NK细胞是非特异性免疫系统的主要组分之一⑴。与T细胞表型差异主要是NK细胞表达CD56、CD16分子，而不表达CD3分子和T细胞受体。有关NK细胞识别受体研究的报道较多，但对亚群及其生物学特性报道少。NK细胞可分为3个主要亚群，即CD56﹢NK细胞（70.3﹪）、CD16﹢CD56﹢NK细胞(15.4﹪)和CD16﹢NK细胞（6.5﹪）⑶.CD56﹢表达逐渐减低，CD16﹢表达增加，NK细胞逐渐成熟，说明NK细胞杀伤活性的强度依次为CD16﹢细胞＞CD16﹢CD56﹢NK细胞＞CD56﹢NK细胞⑷。
本研究选用成熟、杀伤活性强的CD16﹢CD56﹢、CD16﹢NK细胞为观察指标，采用流式细胞仪检测CD16﹢CD56﹢、CD16﹢NK细胞占淋巴细胞比例进行动态监测，更加直接准确地监测NK细胞的杀伤功能，反应患儿的免疫情况。本研究结果发现病毒性肺炎患儿急性期CD16﹢CD56﹢、CD16﹢NK细胞占淋巴细胞比例显著降低⑸，此时NK细胞杀伤功能和免疫功能低下，不利于机体清除致病原和感染的细胞；恢复期CD16﹢CD56﹢、CD16﹢NK细胞占淋巴细胞比例回升，表明随着肺炎患儿的康复，机体NK细胞杀伤力恢复，提示肺炎治疗过程中应用提高CD16﹢CD56﹢、CD16﹢NK细胞占淋巴细胞比例的药物，可能会缩短肺炎病程。肺炎患儿康复后CD16﹢CD56﹢、CD16﹢NK细胞占淋巴细胞比例回升，但与健康对照组仍有差异，说明肺炎刚痊愈的患儿免疫功能与健康儿童仍有异常，应加强护理。
参考文献
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