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黑曲霉酸性果胶裂解酶的高效表达及其在果汁澄清中的应用

2020-12-12阅读(863)

黑曲霉酸性果胶裂解酶的高效表达及其在果汁澄清中的应用

论文摘要

利用黑曲霉自身强启动子（葡萄糖淀粉酶启动子,PglaA）实现了酸性果胶裂解酶PelD在黑曲霉中的过量表达,重组酸性果胶裂解酶经镍柱亲和层析纯化后进行Western blot鉴定及酶学性质研究。重组酸性果胶裂解酶在摇瓶发酵条件下最高酶活力达到8 822.6 U/mL;经一步纯化后,该重组酶的比活力为8 522.7 U/mg,回收率为79.4%;该重组酶的最适反应pH值为5.0,在pH 3.0～6.5范围内40℃保温2 h仍能保持50%以上的相对酶活力,在酸性pH值下稳定性良好;最适反应温度为50℃,该重组酶在30～50℃的范围内非常稳定;在1 mmol/L浓度下,Ca2+、Mg2+、Cu2+、Zn2+、Ni2+、Mn2+、Ba2+对该重组酶具有激活作用,其中Zn2+、Ni2+、Ba2+激活作用较为显著,而十二烷基硫酸钠表现为抑制作用;底物特异性分析表明该酶能够特异性地降解高度甲酯化果胶,其对柑橘果胶（酯化度≥85%）酶活力高达31 248.0 U/mL;此外,重组酶对橙汁、苹果汁和葡萄汁具有良好的澄清效果,其中橙汁的透光度提高了16.9倍,苹果汁的透光度提高了10.5倍,葡萄汁的透光度提高了4.7倍。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料与试剂
  •     1.1.1 菌株与质粒
  •     1.1.2 试剂
  •     1.1.3 培养基
  •   1.2 仪器与设备
  •   1.3 方法
  •     1.3.1 重组表达质粒的构建
  •     1.3.2 黑曲霉转化及发酵培养
  •     1.3.3 酸性果胶裂解酶活力测定
  •     1.3.4 重组酸性果胶裂解酶纯化
  •     1.3.5 Western blot鉴定表达产物
  •     1.3.6 重组酸性果胶裂解酶酶学特性分析
  •     1.3.7 重组酸性果胶裂解酶在果汁澄清中的应用
  • 2 结果与分析
  •   2.1 酸性果胶裂解酶基因克隆及序列分析
  •   2.2 重组酸性果胶裂解酶的表达
  •   2.3 重组酸性果胶裂解酶的纯化
  •   2.4 重组酸性果胶裂解酶酶学性质分析
  •     2.4.1 重组酸性果胶裂解酶的底物特异性
  •     2.4.2 最适反应pH值及pH值稳定性
  •     2.4.3 最适反应温度及热稳定性
  •     2.4.4 金属离子及化学试剂对重组酶的影响
  •   2.5 重组酸性果胶裂解酶在果汁澄清中的应用
  • 3 讨论

    • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 何玉兰,王斌,潘力

    关键词: 酸性果胶裂解酶,黑曲霉,高效表达,酶学性质,果汁澄清

    来源: 食品科学 2019年18期

    年度: 2019

    分类: 工程科技Ⅰ辑

    专业: 轻工业手工业

    单位: 华南理工大学生物科学与工程学院,广东省发酵与酶工程重点实验室

    基金: 国家自然科学基金面上项目（31871736,31870024）,广东省自然科学基金项目（2017A030313097）,广东省科技计划项目（2016A050503016,2016A010105004）

    分类号: TS255.44

    页码: 83-88

    总页数: 6

    文件大小: 1760K

    下载量: 189

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