导读:本文包含了毁脑脊髓大鼠论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:实验性,免疫性,脑脊髓,多发性,干细胞,骨髓,烟草。
毁脑脊髓大鼠论文文献综述
于欢,郝飞,刘美辰,梁战华[1]（2019）在《CM-DiI标记的BMSCs在实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠的体内示踪分布》一文中研究指出目的观察并探讨CM-DiI标记骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植到实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠体内的示踪分布。方法全骨髓培养法分离培养大鼠BMSCs;用CM-DiI荧光染料进行体外标记;将标记后的BMSCs移植到EAE大鼠体内,观察移植后细胞的形态及分布。结果荧光显微镜下可在移植BMSCs的EAE大鼠大脑、小脑和脊髓切片内检测到发出红色荧光的细胞,疾病高峰期数量较多,主要位于软膜下和血管周围,形状为圆形或椭圆形;疾病缓解期大部分细胞仍存在,荧光强度略有减弱。结论 CM-DiI是一种短中期标记、示踪BMSCs的良好染料,CM-DiI标记的BMSCs在EAE大鼠体内主要分布在血管周围,少量向脑实质内迁移。(本文来源于《基础医学与临床》期刊2019年09期）
刘芳,高小青[2]（2019）在《NSCs移植对实验性变态反应性脑脊髓炎大鼠的神经保护作用》一文中研究指出观察神经干细胞(NSCs)移植对实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)大鼠的神经保护作用。体外培养新生大鼠NSCs。用豚鼠脊髓匀浆诱导慢性EAE大鼠模型。在免疫后10d,脑立体定位仪分别移植NSCs和注射生理盐水入EAE大鼠侧脑室。实验分为NSCs组和对照组。每日对大鼠进行临床症状评分。大鼠在免疫60 d后处死。NSCs移植组,其临床功能评分、脑内炎症细胞浸润和髓鞘丢失(本文来源于《中国解剖学会2019年年会论文文摘汇编》期刊2019-08-18）
谢建平,王赵伟,吴承龙,历莎[3]（2019）在《烟草烟雾对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠发病的影响》一文中研究指出目的探讨烟草烟雾对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠发病的影响。方法将38只SD大鼠分为3组,其中空气组与烟草烟雾组(各16只)采用豚鼠脊髓匀浆与完全弗氏佐剂混合乳液足垫注射免疫诱导EAE模型成功后分别暴露于压缩空气和烟草烟雾。空白对照组(6只)采用0.9%氯化钠溶液与完全弗氏佐剂混合的乳液足垫注射后暴露于压缩空气。动态观察3组大鼠行为学改变并进行评分。建模成功后第20天处死大鼠,分离脑脊髓组织后进行免疫组织化学染色观察星形胶质细胞形态变化。采用流式细胞术检测脾脏树突状细胞比例、CD86+树突状细胞比例和MHC-Ⅱ+树突状细胞比例。结果与空气对照组比较,烟草烟雾组大鼠发病潜伏期更短[(13.88±1.10)d vs(10.75±0.67)d],最高行为学评分[3.00(0.00,4.00)分vs 4.00(4.00,4.00)分]、观察期内累积行为学评分[21.00(0.00,27.75)分vs 28.00(24.75,32.00)分]更高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。烟草烟雾组大鼠MHC-Ⅱ+树突状细胞比例为(22.34±2.92)%,高于空气组的(16.06±0.57)%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论烟草烟雾暴露可能对EAE具有促发效应,并与树突状细胞MHC-II表达上调有密切关系。(本文来源于《浙江医学》期刊2019年14期）
李子建[4]（2019）在《骨髓间充质干细胞来源的外泌体对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠的免疫调节作用的实验研究》一文中研究指出目的:多发性硬化(multiple sclerosis,MS)是一种慢性脱髓鞘疾病,多由中枢神经系统(central nervous system,CNS)炎症和自身免疫功能障碍引起,通常导致患者严重的终身残疾。目前没有可以治愈MS的方法,治疗主要依靠疾病修饰药物和对症治疗药物,减慢疾病进展从而减少疾病复发和严重程度。干细胞治疗在临床研究和多种疾病模型中均被证实能有效减轻神经系统损伤,减缓疾病的进展。最近的研究表明,外泌体参与的旁分泌作用可能是干细胞发挥效应的主要途径,骨髓间充质干细胞的外泌体在许多自身免疫性疾病和组织损伤中发挥着治疗作用。小胶质细胞作为CNS的免疫监视细胞,其M1/M2表型相互转化的比例失衡,参与MS的发生发展,影响疾病进程。本研究采用骨髓间充质干细胞的外泌体治疗MS动物模型——实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)模型,探讨外泌体治疗对疾病大鼠行为学评分和CNS病理改变的影响,以及治疗前后脊髓内小胶质细胞M1/M2两种表型比例的数量变化,明确外泌体是否影响小胶质细胞极化进而减轻MS的严重程度。探讨小胶质细胞极化在外泌体治疗EAE模型中的作用及分子机制,为改善自身免疫性疾病和治疗炎性疾病提供一种极具前景的方法。研究方法:本研究首先采用全骨髓贴壁法分离提取原代大鼠骨髓间充质干细胞,并进行干细胞性质的鉴定。采用超速离心法从骨髓间充质干细胞的培养上清中提取外泌体并鉴定,用于后续的功能实验。在此基础上在EAE大鼠疾病模型中采用尾静脉注射外泌体治疗,评估外泌体对疾病模型的在体治疗效果。此后,本研究采用体外细胞实验,分别将骨髓间充质干细胞和干细胞的外泌体与小胶质细胞进行共培养,应用免疫荧光和实时定量PCR的方法检测小胶质细胞表型转化相关蛋白和mRNA的表达情况,判断干细胞外泌体是否通过调节小胶质细胞免疫炎症反应,参与多发性硬化发病的病理过程。最后,采用蛋白质组学labelfree的方法检测外泌体治疗影响小胶质细胞表型转化过程的分子机制,并通过平行反应监测(parallel reaction monitoring,PRM)对蛋白组学的结果进行初步验证。结果:1、成功分离提取大鼠骨髓间充质干细胞,其形态和表面标志物表达符合间充质干细胞特征,并具有多向分化能力。在此基础上成功提取骨髓间充质干细胞的外泌体,直径在30-100nm之间,其表面表达CD9、CD63、Alix特异性分子标志物。2、骨髓间充质干细胞外泌体对EAE大鼠的疗效评估,与EAE组大鼠相比,外泌体处理显着降低神经行为评分,减轻体重下降程度;HE染色结果提示外泌体治疗组脑组织炎性细胞浸润减少,LFB染色结果提示外泌体治疗组脊髓脱髓鞘情况减轻;治疗后,大鼠血浆中抗炎性细胞因子表达升高,促炎性细胞因子表达降低。与EAE组相比,外泌体处理组M2表型标志物的蛋白表达水平和mRNA水平显着增加,而M1相关标志物蛋白水平和mRNA水平降低。说明干细胞外泌体不仅可以减轻CNS炎症和脱髓鞘情况,还可以对中枢和外周免疫环境产生调节作用。3、体外实验结果显示,干细胞外泌体处理后的小胶质细胞M2相关标志物的mRNA表达水平升高,M1相关标志物的mRNA表达水平降低,促炎性细胞因子分泌减少,抗炎性细胞因子分泌增加。经干细胞外泌体处理后,小胶质细胞倾向于向M2表型转化。4、经过label-free蛋白质组学检测,外泌体处理后的小胶质细胞与处理前存在7个差异蛋白(在任意一组不为空值,差异倍数>1.5,P<0.05),用PRM方法对label-free的结果进行靶向验证,证实有5个目标差异蛋白(Acadv1、Aarsd1、Acad9、RT1.a1(f)、Ehd1)蛋白质,在外泌体处理前后LPS激活的小胶质细胞中确实存在表达的差异。结论:1、本研究成功提取大鼠骨髓间充质干细胞并分离出其培养上清中的外泌体,同时对外泌体进行了蛋白定量。2、骨髓间充质干细胞来源的外泌体可以缓解EAE大鼠的疾病进展,改善大鼠体内的免疫环境,减轻脑组织炎性细胞浸润和脊髓的髓鞘脱失。3、骨髓间充质干细胞外泌体在体内外可以诱导小胶质细胞向M2表型极化,发挥免疫调节作用。4、骨髓间充质干细胞外泌体通过影响5个差异蛋白的表达,诱导小胶质细胞向M2表型转化,改善EAE大鼠发病的严重程度。(本文来源于《中国医科大学》期刊2019-03-01）
厉莎,王赵伟,吴承龙[5]（2019）在《大鼠哺乳期环境烟草烟雾暴露对实验性自身免疫性脑脊髓炎发病的远期影响》一文中研究指出目的探讨大鼠哺乳期环境烟草烟雾(environmental tobacco smoking,ETS)暴露对实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)发病的远期影响。方法将36只SD乳鼠随机分成ETS-EAE(n=12)、ETS-假手术组(n=6)、空气-EAE组(n=12)和空气-假手术组(n=6)。于SD乳鼠出生后第2～21天,ETS-EAE组和ETS-假手术组给予ETS暴露,空气-EAE组(n=12)和空气-假手术组给予空气暴露。于SD乳鼠出生第11周时,采用豚鼠脊髓匀浆与完全福氏佐剂(CFA)混合乳液免疫诱导制备EAE模型,假手术组给予无菌生理盐水与CFA混合乳剂。从造模当天开始每天对大鼠进行神经系统行为学评分;于造模后第10、15、20天进行血浆γ干扰素(IFN-γ)水平测定;第20天时处死大鼠,通过HE染色和LFB染色定性分析脊髓中枢病理学改变。结果 ETS-EAE组大鼠神经系统行为学最高评分(3.58±0.37)、累积评分(27.25±3.41)及中枢病理HE评分(2.67±0.41)均高于其余组(均P<0.05);中枢神经系统炎性反应细胞数及脱髓鞘程度经定性分析较其他组升高;ETS-EAE组第10、15、20天血浆IFN-γ水平高于ETS-假手术组(均P<0.05);ETSEAE组第15天血浆IFN-γ水平高于空气-EAE组(P<0.05)。结论大鼠哺乳期ETS暴露可增加血浆IFN-γ水平,加重脊髓脱髓鞘程度及中枢炎性反应细胞浸润程度,加重成年后大鼠EAE发病。(本文来源于《中国神经免疫学和神经病学杂志》期刊2019年01期）
张志红,华冰,谭燕,田佳颖,周翔鱼[6]（2018）在《醋酸格拉默别构抑制抗原提呈细胞活化对实验性变态反应性脑脊髓炎大鼠的作用》一文中研究指出目的通过对MOG35-55肽段诱导的实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)大鼠模型的研究,探讨醋酸格拉默对别构抑制抗原提呈细胞活化而起到治疗作用的机制。方法利用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55(MOG35-55)肽段诱导SD大鼠制作慢性非缓解型EAE模型成功后,随机抽取部分发病模型大鼠,利用醋酸格拉默别构抑制抗原提呈细胞(APC)活化,观察临床体征及组织病理变化情况,同时检测APC重要的免疫相关指标白细胞介素-12(IL-12)、主要组织相容性复合体-1(MHC-Ⅰ)、主要组织相容性复合体-2(MHC-Ⅱ)在大鼠脑内的表达并加以分析评估。结果醋酸格拉默可以抑制EAE大鼠脑内APC活化,下调提呈功能相关的MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ类分子及细胞因子IL-12的表达水平(P <0. 05)。通过大鼠血-脑屏障通透性变化,经醋酸格拉默治疗后未观察到明显变化,较发病高峰期和慢性维持期差异无统计学意义;甲泼尼龙组血-脑屏障通透性有所降低,较与EAE组比较有统计学意义(P <0. 05)。结论醋酸格拉默对大鼠慢性EAE的治疗作用与通过别构抑制APC抗原提呈功能而缓解慢性大鼠EAE神经功能损伤症状有关。(本文来源于《宁夏医学杂志》期刊2018年12期）
张俊梅[7]（2018）在《骨髓间充质干细胞移植对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠治疗作用的研究》一文中研究指出目的:急性播散性脑脊髓炎(acute disseminated encephalomyelitis,ADEM)是儿童时期比较常见的发生在中枢神经系统中的以髓鞘脱失为主要表现的疾病,目前,确切的发病原因和机制还不完全明了,易留有永久的神经系统后遗症。在ADEM的病灶中,受累的细胞主要是少突胶质细胞,呈现不同程度的丢失。少突胶质细胞的主要功能是形成神经髓鞘,因此,髓鞘损伤的修复从根本上说是少突胶质细胞的修复。怎样将少突胶质细胞的损伤降到最低点,如何促进内源性的胶质前体细胞分化成有功能的少突胶质细胞以及通过外源性细胞移植的手段来促使中枢神经系统损伤的修复,一直是国内外学者的致力研究的热点之一。目前,临床上对于急性播散性脑脊髓炎的治疗主要采用免疫疗法,尽管收到了一些临床疗效,但不令人十分满意。近十余年来,随着神经干细胞的研究的深入,细胞移植受到了人们越来越多的重视。以往多采用胚胎神经干细胞,以及成体神经干细胞来进行,但由于受到取材困难、组织来源缺乏、移植过程中的免疫排斥反应、移植技术问题、伦理学争端及法律限制等问题导致其临床应用受限。近年来由于骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)具有来源广泛,取材容易,便于自体移植,长期体外培养过程中始终保持自我复制和多向分化的潜能,免疫原性弱,不论是通过局部还是通过静脉途径进行移植都能产生积极作用的特性,使得BM-MSCs成为人类中枢神经系统损伤修复最有前途的治疗策略之一。MSCs分布于不同的组织中并且分布极广,以骨髓中为最多。MSCs在不同的微环境下可向不同的谱系分化,如神经元、神经胶质细胞、成骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞、基质细胞、骨骼肌细胞、血管内皮细胞及内胚层的牙细胞等。在没有诱导因子存在的情况下,MSCs可分裂70次以后形态和表型保持不变,仍具有向多个方向分化的潜能。MSCs来源充足,易获得,易于体外扩增,不表达主要组织相容性复合体(MHC)Ⅱ类分子,能够被受体很好的耐受,而且可取自自体,避免了免疫排斥反应,使得MSCs成为干细胞研究领域的热点,是一种理想的组织工程干细胞。MSCs移植对心肌损伤、软骨及骨损伤等许多领域的治疗中已经发挥了巨大的作用。在脊髓损伤、脑梗塞等神经系统疾病的实验治疗中发现实验大鼠临床症状改善,MSCs可促进轴突生长、具有神经发生的潜能并分化成神经样细胞,增强了内源性神经前体细胞的增殖和神经分化等作用。在对实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)的治疗中发现治疗组大鼠的临床症状明显改善,但具体机制不明。本实验采用ADEM经典的动物模型—实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE),在阐述正常及EAE大鼠鼠脑少突胶质细胞分布、髓鞘形成的基础上,通过体外培养骨髓间充质干细胞并经侧脑室注射的方法移植到EAE大鼠脑内,从形态、病理、少突胶质细胞谱系的变化、髓鞘转录因子以及髓鞘蛋白的表达水平的变化来阐述骨髓间充质干细胞对EAE的治疗机制。研究方法:本研究采用EAE模型,用于制备抗原的豚鼠雌雄不限,体重为180~250克;Wistar雌性大鼠,6~8周龄,体重160~180克。豚鼠称重,10%水合氯醛麻醉,活体状态下取全脊髓,制备匀浆+等体积完全福氏佐剂(CFA)制备抗原。Wistar大鼠称重麻醉,四个足垫分别注射已经乳化好的抗原0.1ml,并辅以左足背注射百日咳(BPV)疫苗0.1ml/只。将雄性100克左右的Wistar大鼠麻醉,在无菌的条件中取出股骨,除去骨表面的组织。利用注射器吸取含10%胎牛血清的DMEM-F12培养液冲洗骨髓腔,得到细胞悬液。接种到培养瓶中,于37℃、5%CO_2环境中的培养箱培养。24小时弃去未贴壁细胞,每隔2-3天更换培养液,弃去悬浮的细胞。当细胞达到80%融合时传代。将传代3次的细胞用0.25%的胰蛋白酶消化后应用流式细胞仪进行鉴定所提取的细胞是否为骨髓间充质干细胞。实验动物共218只,共分4组,分别为正常对照组、EAE组、假性治疗组、MSCs治疗组。正常对照组是指整个实验过程中不加任何刺激及干预因素,EAE组共分六个时间点,分别为造模后1d、3d、7d、14d、21d、28d,每个时间点8只Wistar大鼠。MSCs治疗组于发病当天双侧侧脑室注射MSCs,总剂量为2×10~5/20ul,每侧各10ul,取材时间同EAE组。假性治疗组在发病当天双侧侧脑室注射等量的MSCs细胞培养液,取材时间同EAE模型组。取材时采用左心室灌注固定后4%多聚甲醛保存用于石蜡切片;左心室灌注固定后4%多聚甲醛放置24小时,20%蔗糖放置24小时后,-80℃冰箱保存用于免疫荧光;经左心室灌注生理盐水后取材,经液氮快速冷冻后置-80℃冰箱保存用于western-blot及real-time PCR测定。应用行为学评分观察大鼠临床行为改变;Bielschowsky镀银染色观察脑组织髓鞘病理变化;应用免疫荧光观察大鼠少突胶质细胞谱系的改变;Real-time PCR法检测髓鞘碱性蛋白(MBP)mRNA、髓鞘转录因子1(MyT1)mRNA的表达;Western-Blot印迹分析检测MBP、MyT1蛋白的表达。采用SPSS13.0软件包进行统计学处理。结果:1、临床行为学改变:EAE组的临床行为学评分在1d、3d、7d最高,14d时有所降低,21d、28d最低。假性治疗组与EAE组改变基本相同。MSCs治疗组临床行为学评分1d时最高,自3d起明显降低,7d时恢复正常(评分降为0)。2、髓鞘的病理改变:正常组大鼠鼠脑髓鞘结构完整;EAE组1d时髓鞘破坏较重,3d、7d时最重,14d、21d、28d较前有所恢复,但未达到正常组水平;假性治疗组髓鞘损害变化趋势与正常组相同;MSCs治疗组1d时髓鞘有较严重破坏,3d起逐渐恢复,以后各时间点均较EAE组明显改善(p<0.05)。3、少突胶质细胞谱系的变化:少突胶质细胞祖细胞(A2B5)、不成熟的少突胶质细胞(O4)可见于大脑皮层、白质和小脑,以白质最多,尤其是海马部位,成熟的少突胶质细胞(CNPase)主要见于白质,生后少突胶质前体细胞逐渐随着时间的延长而减少;EAE组1d时大鼠A2B5和O4阳性细胞数无明显变化,CNPase阳性细胞明显减少;3d和7d时A2B5、O4、CNPase阳性细胞数较1d组明显减少;EAE14d、21d、28d时A2B5、O4、CNPase阳性细胞数逐渐增多;假性治疗组变化趋势与EAE组相同(p>0.05);MSCs治疗组1d时大鼠A2B5、O4、CNPase阳性细胞数无明显变化,3d后A2B5、O4、CNPase阳性细胞数逐渐增多,14d时达高峰。4、MBP mRNA、MyT1 mRNA表达水平的变化:EAE组1d时大鼠MBP和MyT1 mRNA表达与正常组相比无明显变化,3d和7d时MBP和MyT1 mRNA表达较1d组增多,EAE 14d、21d、28d时MBP和MyT1 mRNA表达逐渐增多;假性治疗组MBP和MyT1 mRNA表达的变化与EAE组相比无显着差异(p>0.05);MSCs治疗组1d时大鼠MBP和MyT1 mRNA表达较EAE组增多,治疗后3d、7d、14d、21d、28d时MBP和MyT1 mRNA表达明显较前增多(p<0.05)。5、MBP和MyT1蛋白表达水平的变化:EAE组1d时大鼠MBP和MyT1蛋白表达与正常组相比无明显差异,3d和7d时MBP和MyT1蛋白表达较1d组渐增多;EAE14d、21d、28d时MBP和MyT1表达逐渐增多;假性治疗组MBP和MyT1蛋白表达与EAE组相比无显着差异(p>0.05);MSCs治疗组1d时大鼠MBP和MyT1蛋白表达较EAE组增多;治疗3d、7d、14d、21d、28d时MBP和MyT1表达明显较前增多(p<0.05)。结论:1、正常6~8周大鼠脑内髓鞘结构完整,较多的少突胶质前体细胞多于脑内分布,正常状态下MBP mRNA,MyT1 mRNA表达较少,MBP含量较高,MyT1表达较少;2、EAE模型制备较稳定,在EAE早期阶段脑内髓鞘破坏较重,在病程的中晚期损伤髓鞘有一定程度的恢复,脑内的少突胶质前体细胞有不同程度的增殖,分化,MyT1 mRNA,MBP mRNA表达增多,MyT1,MBP蛋白表达增多;3、骨髓间充质干细胞移植对EAE大鼠的临床行为学有显着的改善,对EAE大鼠的髓鞘损伤有显着的修复作用,骨髓间充质干细胞移植后,少突胶质前体细胞明显增多,骨髓间充质干细胞移植促进了MBP mRNA、MyT1 mRNA的表达,骨髓间充质干细胞移植促进了MBP、MyT1蛋白的表达。(本文来源于《中国医科大学》期刊2018-11-01）
杨斌[8]（2018）在《西维来司钠对实验性自身免疫性脑脊髓炎模型大鼠的影响研究》一文中研究指出目的研究西维来司钠对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型大鼠的保护作用及机制。方法将40只大鼠随机分为正常组、模型组和低、中、高剂量实验组,每组8只。模型组和实验组注射豚鼠脊髓免疫抗原构建EAE模型,正常组注射等量生理盐水;建模成功后,低、中、高剂量实验组灌胃给予4,8,12mg·kg~(-1)西维来司钠,模型组和正常组灌胃等量生理盐水,每日1次,连续干预14 d。观察各组大鼠的神经功能,用苏木精-伊红(HE)染色法观察大鼠脊髓组织病理变化,以酶联免疫吸附(ELISA)法及反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测各组大鼠JAKs/SATAs通路活化情况。结果干预后第12～14天实验组大鼠神经功能评分低于模型组(P<0.05)。正常组、模型组和低、中、高剂量实验组大鼠脑组织中STAT3蛋白表达量分别为(8.24±0.68),(15.49±1.21),(13.23±0.78),(11.26±0.56),(9.52±0.36)pg·mL~(-1),脊髓组织中JAK2 mRNA相对表达量分别为0.11±0.02,0.66±0.05,0.46±0.03,0.37±0.03,0.22±0.01;随着西维来司钠干预浓度的升高,低、中、高剂量实验组大鼠神经功能评分、脊髓组织病理学评分及脑组织中STAT3蛋白表达量和脊髓组织中JAK2 mRNA相对表达量逐渐降低(P<0.05)。结论西维来司钠可减轻EAE模型大鼠的神经损伤程度,可能与抑制JAKs/SATAs通路活化有关。(本文来源于《中国临床药理学杂志》期刊2018年19期）
王赵伟,吴承龙,谢建平,肖桂荣,钟芳芳[9]（2018）在《沙利度胺对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠CD4~+ T细胞凋亡的影响》一文中研究指出目的探讨沙利度胺对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠髓鞘、轴突的保护作用以及CD4~+ T细胞凋亡的影响。方法将30只雌性SD大鼠随机分为空白对照组、模型组和药物组,每组10只。利用豚鼠脊髓匀浆皮下注射方法制作EAE模型,自造模日起SD大鼠腹腔注射60mg/kg沙利度胺或无菌溶剂,共15d;至免疫诱导的第20天统一处死。坚牢蓝(LFB)染色、甘氨酸银染色分别观察髓鞘、轴突的损伤情况,免疫组化法检测星形胶质细胞、CD4~+ T细胞变化,流式细胞术检测外周血CD4~+ T细胞凋亡情况。结果与模型组比较,药物组髓鞘脱失、轴突丢失均有所缓解,星形胶质细胞增生反应明显减轻;而外周血凋亡CD4~+ T细胞比例明显升高,CD4~+ T细胞比例及中枢浸润CD4~+ T细胞水平均较低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论沙利度胺可减轻EAE大鼠髓鞘及轴突损伤,可能与促进CD4~+ T细胞凋亡有关。(本文来源于《浙江医学》期刊2018年18期）
袁晓露[10]（2018）在《Kv1.3通道阻断剂ImKTx88对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠的作用和机制研究》一文中研究指出背景:多发性硬化(multiple sclersosis,MS)是一种以中枢神经系统(central nervous system,CNS)脱髓鞘为特点的自身免疫性疾病,特征性病理改变包括炎性细胞浸润、髓鞘结构破坏、轴索损伤和胶质细胞增生。近年来临床上主要采用免疫抑制剂治疗MS,已取得一定短期疗效,但长期治疗效果仍然不佳。尽管大部分免疫抑制剂能够抑制免疫系统对CNS的攻击,但对已发生的神经损伤却未能有效修复,导致病情进行性加重。研究表明,钾离子Kv1.3通道在MS中的表达大量增加,Kv1.3通道已成为治疗MS的潜在靶点。Kv1.3电压门控钾通道是Kv1.x亚家族中的一员,存在于免疫细胞和神经细胞胞膜上,对调节免疫细胞和神经细胞的生理功能起着重要作用。T细胞受到自身抗原的反复激活后,穿过血脑屏障,引起CNS炎症反应,是MS形成的重要原因之一。在此过程中,T细胞Kv1.3通道的表达大量增加。虽然已有研究证实Kv1.3通道阻断剂可以缓解MS大鼠模型的发病症状,但是Kv1.3通道阻断剂的研究大多集中在抑制T细胞介导的炎性反应上,对其参与中枢神经保护和调节其它免疫细胞功能方面的研究较少。小胶质细胞作为CNS固有免疫细胞也参与了 MS的发生发展,在MS中,小胶质细胞被激活并伴随Kv1.3通道表达显着增加,但小胶质细胞炎性活化与Kv1.3通道表达变化的关联和具体机制仍不明确。前期工作中,我们筛选出了一种高效特异性的Kv1.3通道阻断剂ImKTx88,本课题将研究其在MS的动物模型实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)大鼠中的神经保护作用,并进一步探讨ImKTx88抑制小胶质细胞炎性活化,减轻神经细胞损伤的效应和分子机制,为MS的治疗提供理论与实验依据。目的:研究Kv1.3阻断剂ImKTx88在EAE大鼠中的神经保护作用,并揭示ImKTx88是如何通过抑制小胶质细胞炎性活化,进而减轻其损伤神经细胞的潜在机制。方法:(1)将脑脊髓匀浆于第0天和第7天两次免疫SD大鼠建立EAE模型。大鼠被随机分为对照组、EAE组和ImKTx88治疗组。第12天,按照100 μg/kg的剂量每天皮下注射ImKTx88(治疗组)或同等体积的PBS(对照组和EAE组)。采用双盲法观察并记录各组大鼠行为学评分。第23天处死动物收集脊髓组织。(2)取腰骶部脊髓组织制成石蜡组织切片,采用免疫组化染色观察白质区域少突胶质细胞丢失、神经轴索损伤和炎性细胞浸润情况。对早期分化阶段少突胶质细胞(NG2)、中晚期分化阶段少突胶质细胞(CC-1)和成熟少突胶质细胞(MBP)进行免疫组化染色观察髓鞘细胞丢失情况;对神经轴索进行神经丝蛋白NF200和β-淀粉样前体蛋白APP染色观察神经轴索损伤情况;对T淋巴细胞、星形胶质细胞、中性粒细胞和小胶质细胞分别进行CD3、GFAP、MPO、CD68/Iba-1免疫组化染色观察它们在脊髓中的浸润情况。双重免疫荧光标记CD68和Kv1.3检测各组大鼠脊髓组织中活化的小胶质细胞Kv1.3通道的表达。(3)对各组大鼠脊髓组织进行LFB染色,观察脊髓白质脱髓鞘程度;透射电镜超微结构分析各组大鼠脊髓白质中的髓鞘和神经轴索结构。(4)通过ELISA方法检测各组大鼠脊髓组织匀浆中促炎细胞因子(IL-2、IFN-y、TNF-α和IL-6)的含量。采用LPS、LPS+不同浓度ImKTx88处理BV2小胶质细胞,ELISA检测细胞培养上清中TNF-α和IL-6的含量。(5)采用LPS、LPS+不同浓度的ImKTx88分别处理BV2小胶质细胞,取细胞培养上清分别与原代纯化培养的少突胶质细胞和神经元孵育24 h,CCK8检测少突胶质细胞和神经元的生存以及TUNEL染色检测少突胶质细胞和神经元的凋亡情况。(6)qPCR、Wetern blot和免疫细胞荧光检测对照组、LPS组和LPS+不同浓度ImKTx88组中BV2小胶质细胞Kv1.3通道的表达。Western blot检测各组BV2小胶质细胞中信号通路关键分子MyD88、TRAF6和p65蛋白的表达。结果:(1)对照组大鼠在整个实验过程中无发病症状,EAE组大鼠从第一次免疫后第12天开始出现肢体瘫痪症状,且进行性加重,而ImKTx88治疗显着缓解EAE大鼠发病症状,降低行为学评分。(2)免疫组化标记不同分化阶段的少突胶质细胞结果显示:EAE组中,NG2、CC-1和MBP阳性细胞数量较对照组显着降低,而ImKTx88治疗组中,上述阳性细胞数量较EAE组均明显增加。(3)免疫组化标记神经轴索和电镜超微结构分析神经纤维结果显示:EAE组NF200的表达较对照组明显降低,β-APP在病灶区表达显着提高。ImKTx88治疗组NF200的表达明显提高,β-APP在病灶区的表达显着降低。电镜观察神经纤维超微结构显示,EAE组中神经轴索密度、髓鞘厚度显着降低,而G-ratio值显着升高。ImKTx88治疗组中神经轴索密度、髓鞘厚度明显增加,G-ratio值显着降低。结果提示,ImKTx88减少EAE大鼠髓鞘细胞和神经轴索的丢失与破坏。(4)免疫组化标记脊髓中的炎性细胞和ELISA检测促炎细胞因子含量的结果显示:EAE组中浸润的CD3、GFAP、MPO和CD68/Iba-1阳性细胞的数量与对照组相比显着增加,而ImKTx88治疗组与EAE组相比,上述炎性细胞数量明显降低。ELISA结果显示:EAE组大鼠脊髓中促炎细胞炎性因子IL-6、TNF-α、IL-2和IFN-γ的含量与对照组相比显著升高,而ImKTx88治疗组与EAE组相比,上述促炎细胞因子的含量明显降低。结果提示,ImKTx88能够抑制EAE大鼠的CNS炎性反应。(5)双重免疫荧光标记显示:EAE组脊髓中活化的小胶质细胞Kv1.3通道表达明显升高,而ImKTx88治疗组中小胶质细胞的Kv1.3通道表达显着降低。在细胞学水平上,LPS激活的BV2小胶质细胞中Kv1.3的表达显着升高,给予ImKTx88处理后,Kv1.3通道的表达明显降低。此外,ELISA检测BV2小胶质细胞培养上清促炎细胞因子的结果显示:不同浓度的ImKTx88处理由LPS激活的BV2小胶质细胞24 h后,BV2小胶质细胞培养上清中IL-6和TNF-α的水平明显降低。qPCR结果表明,ImKTx88抑制活化的BV2小胶质细胞IL-6和TNF-α的转录。同时,CCK8和TUNEL染色的结果表明,ImKTx88抑制炎性上清损伤少突胶质细胞和神经元产生的凋亡。(6)Western blot检测BV2小胶质细胞中信号通路蛋白表达的结果显示:LPS组与对照组相比,MyD88、TRAF6和p-p65蛋白表达显着升高,而LPS+ImKTx88组与LPS组相比,上述蛋白的表达明显降低。结果提示,ImKTx88可能通过阻断MyD88/TRAF/NF-κB信号通路抑制小胶质细胞的活化。结论:本研究发现Kv1.3通道阻断剂ImKTx88能够缓解EAE大鼠发病症状,抑制炎性反应,减轻髓鞘丢失和神经轴索损伤。研究进一步证实,ImKTx88通过抑制Kv1.3通道降低BV2小胶质细胞的活化,减轻BV2小胶质细胞炎性活化导致的神经细胞损伤,其作用机制可能是通过下调小胶质细胞中的MyD88/TRAF6/NF-κB信号通路抑制其炎性活化。以上研究提示Kv1.3通道阻断剂ImKTx88对于MS的临床治疗具有潜在的应用前景。(本文来源于《武汉大学》期刊2018-05-01）
毁脑脊髓大鼠论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
观察神经干细胞(NSCs)移植对实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)大鼠的神经保护作用。体外培养新生大鼠NSCs。用豚鼠脊髓匀浆诱导慢性EAE大鼠模型。在免疫后10d,脑立体定位仪分别移植NSCs和注射生理盐水入EAE大鼠侧脑室。实验分为NSCs组和对照组。每日对大鼠进行临床症状评分。大鼠在免疫60 d后处死。NSCs移植组,其临床功能评分、脑内炎症细胞浸润和髓鞘丢失
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
毁脑脊髓大鼠论文参考文献
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