导读:本文包含了培育致弱论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:病毒,细小,基因组,序列,免疫,鉴定,细胞。
培育致弱论文文献综述
张青山,李晨曦,刘明,邵周伍林,张云[1]（2016）在《鹅细小病毒弱毒株的培育及其致弱前后全基因组中核酸变异的分析》一文中研究指出为制备鹅细小病毒(GPV)弱毒株并研究其传代致弱前后的基因变化情况,本研究将GPV YG株病毒在鹅胚成纤维细胞(GEF)和鸭胚成纤维细胞(DEF)中交替传代培养至72代次,并且对F0、F24、F48和F72代次病毒进行PCR全基因组扩增,测序,序列比对结果显示,F72代与F0代相比,5'和3'非编码区存在163个核苷酸差异,多数集中于反向终端重复序列(ITR)中,5'和3'两端均有6段碱基插入;编码区氨基酸序列比对结果显示,与F0代次病毒相比,F72代次病毒共有23个氨基酸位点突变,18个位于VP蛋白,5个位于非结构蛋白。病毒致病性试验表明,随着传代次数的增加,其毒力呈减弱趋势,并且F72代次病毒已完全致弱。本研究对GPV致弱后基因变化情况的分析及动物致病性试验结果将为研究GPV毒力致弱机制的研究奠定了基础。(本文来源于《中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第五次学术研讨会论文集》期刊2016-07-20）
张青山,李晨曦,刘明,邵周伍林,张云[2]（2016）在《鹅细小病毒弱毒株的培育及其致弱前后全基因组中核酸变异的分析》一文中研究指出为制备鹅细小病毒(GPV)弱毒株并研究其传代致弱前后的基因变化情况,本研究将GPV YG株在鹅胚成纤维细胞(GEF)和鸭胚成纤维细胞(DEF)中交替传代培养至72代次,并且对F0、F24、F48和F72代次病毒进行PCR全基因组扩增和测序。序列比对结果显示,F72代与F0代相比,5'和3'非编码区存在163个核苷酸差异,多数集中于反向终端重复序列(ITR)中,5'和3'两端均有6段碱基插入;编码区氨基酸序列比对结果显示,与F0代次病毒相比,F72代次病毒共有23个氨基酸位点突变,18个位于VP蛋白,5个位于非结构蛋白。病毒致病性试验表明,随着传代次数的增加,其毒力呈减弱趋势,并且F72代次病毒进一步致弱。本研究对GPV致弱后基因变化情况的分析及动物致病性试验结果为GPV毒力致弱机制的研究奠定了基础。(本文来源于《中国预防兽医学报》期刊2016年06期）
杨达[3]（2016）在《H9N2亚型禽流感病毒冷适应致弱活疫苗候选株的培育及冷适应表型相关基因确定》一文中研究指出H9N2亚型禽流感病毒(Avian influenza virus, AIV)属于低致病性,但能引起家禽较为严重的疫病,特别是混合感染,导致较高的死亡率。该病毒又可作为其它亚型的流感病毒的供体,形成新的重组病毒。目前国内主要采取的预防和控制措施是接种疫苗,而在病毒流行与进化过程中,很容易产生抗原变异,导致疫苗的研制速度跟不上抗原变异的速度,因此有必要研制更加有效的疫苗。冷适应是一种较安全的致弱方法,既保留好的抗原性,又刺激机体产生细胞免疫和体液免疫。本研究利用H9N2亚型AIV流行株培育了一株冷适应毒株,构建了反向遗传操作系统,鉴定出冷适应表型相关基因,评价了冷适应毒株的免疫效力,为流感病毒疫苗的研制奠定基础。1.H9N2亚型禽流感病毒冷适应毒株的培育及其生物学特性选取H9N2亚型AIVA/chicken/TaiXing/1/2008 (TX株),在鸡胚上从37℃进行连续梯度降温传代,每个温度传代8-10次,最终使病毒能够在25℃下稳定的复制,病毒血凝(hemagglutination,HA)效价达到10 1og2。冷适应性(Ca)和温度敏感性(Ts)试验证实,冷适应毒株具备Ca特性,最适培养温度为33℃。为分析冷适应过程中的氨基酸位点变化,通过PCR扩增了冷适应毒株的8个片段基因,并进行测序,与母本毒株的序列对比结果表明,各个片段都发生不同程度的突变,位点主要位于HA、PB2、PB1、PA、NP片段。体外增殖实验表明,冷适应毒株在CEF细胞中能复制,但在MDCK细胞中不能够正常复制。同时,在小鼠致病性试验中发现TX毒株在冷适应过后不能够引起小鼠的体重下降,试验表明冷适应过程使病毒的毒力显着降低。2.H9N2亚型禽流感病毒冷适应减毒株的免疫效力评价为了评价H9N2亚型AIV冷适毒株作为疫苗候选株的潜力。1 06EID50的病毒经人工滴鼻、点眼感染SPF鸡,试验表明冷适应毒株失去了接触传播能力,但是在气管组织中能够低水平复制。冷适应毒株和NS缺失毒株以106EID50剂量滴鼻、点眼途径免疫4周龄SPF (specific pathogen free)鸡,TX毒株经过灭活以相同剂量肌肉注射免疫。NS缺失毒株rTX-NS1-128在一次免疫后能够诱导鸡产生较高的血凝抑制价(8.45 log2),能较好抵御同源(TX株)或异源(F98株)H9N2亚型禽流感病毒的攻击,保护率达到80%以上。而冷适应毒株及TX灭活疫苗一次免疫产生的血凝抑制价只有7.0log2上下,保护率约60%。与NS缺失疫苗株相比都较低,需要加强免疫才能获得较好的免疫效果。3.H9N2亚型禽流感病毒冷适应株冷适应表型相关基因测定为了鉴定所培育的H9N2亚型AIV冷适应毒株与冷适应相关的关键基因,PCR扩增TX-25-CE30毒株的8个基因,并与pHW2000表达载体相连,构建出8个基因的表达质粒。利用PR8骨架,将冷适应毒株各基因的表达质粒逐一替换或组合替换PR8的相应基因,转染MDCK和293T细胞,共获得12个重组病毒。对重组病毒进行的冷适应特性试验表明NP、PB1和PB2片段中氨基酸的突变会引起冷适应特性,其中NP片段起关键作用。对NP片段进行进一步定位,发现NP片段中18位甘氨酸突变为谷氨酸能够使病毒在低温下复制。(本文来源于《扬州大学》期刊2016-05-01）
邵周伍林[4]（2015）在《鹅细小病毒传代致弱毒株的培育及胶体金免疫层析检测方法的建立》一文中研究指出鹅细小病毒病是由鹅细小病毒(Goose parvovirus,GPV)引起的,该病是一种主要侵害4~20日龄雏鹅和雏番鸭的急性或亚急性败血症,具有高度传染性,以发生渗出性肠炎为主要特征。该病传播快,病死率高,5日龄以内雏鹅感染,死亡率高达95%以上。鹅细小病毒病的传播和流行对我国养鹅业造成了重大经济损失,严重制约着我国养鹅业的健康发展。本研究从小鹅瘟疑似病例中分离到一病原,经过PCR鉴定、IFA鉴定和动物回归试验,确定该病原为GPV并将其命名为GPV YG株。通过将GPV YG株在鹅胚成纤维细胞(GEF)和鸭胚成纤维细胞(DEF)上进行交替传代培养,当病毒在GEF上传至第12代时,开始出现细胞病变;IFA检测发现,随着病毒感染时间的延长,感染细胞数量呈现先增加随后减少的变化趋势,感染后第96 h阳性细胞数量最多;病毒的滴度随着传代次数的增加而逐渐升高,当病毒在GEF上传至第50代时,GPV YG株细胞适应毒毒价为106.5 TCID50/m L。雏鹅致病性试验结果显示,第50代病毒毒力明显减弱,表现为感染雏鹅死亡和发病率降低,且死亡雏鹅无鹅细小病毒病的特征性病变及临床表现。对接种了第50代病毒的雏鹅粪便进行PCR检测后发现,接种后的第3天至第21天,雏鹅所排粪便内均能检测到GPV抗原,这表明GPV传代致弱毒株能够在雏鹅体内持续增殖,并向外界环境排毒。易感雏鹅在接种GPV传代致弱毒株后,体内开始产生中和抗体,并且抗体滴度随着时间的增长而逐渐升高,在接种后第4周,中和抗体滴度可达10-2.55/0.2m L,之后抗体滴度有所下降。对F0代和F50代病毒的全基因组序列和推导氨基酸序列进行比对,结果显示与F0代相比,F50代病毒共有89个核苷酸突变位点,主要位于VP基因;以及19个氨基酸突变位点,其中5个位于NS蛋白,14个位于VP蛋白。在F50代基因组5’端和3’端非编码区,分别有一段碱基的插入,大小都为9nt。此外,为建立一种快速、简便、灵敏的GPV胶体金免疫层析检测方法,本研究采用柠檬酸叁钠还原法制备胶体金,将其标记于纯化的抗GPV VP3蛋白的单克隆抗体(m Ab)2D5,在硝酸纤维素膜上喷涂纯化的抗GPV VP3蛋白m Ab 4A8和羊抗鼠Ig G抗体,分别作为检测线和质控线,制成检测GPV的胶体金免疫层析试纸条。结果表明,所制备的GPV检测试纸条的最低检测限度为104.15TCID50/m L;用制备的试纸条检测GPV为阳性,而检测其他主要水禽病病原均为阴性;同一批次和不同批次的试纸条对GPV阳性样品的检测结果均无差异;使用试纸条对已知的80份粪便样品进行检测,阳性及阴性样品的检测符合率分别为96.49%和100%。本研究成功分离到了一株GPV,并将其命名为YG株。通过将YG株在GEF与DEF上交替传代培养,得到了毒力明显减弱的YG株细胞适应毒,这为今后GPV弱毒苗的研制奠定了基础。此外,本研究所制备的GPV胶体金免疫层析检测试纸条具有良好的特异性、敏感性和重复性,为“小鹅瘟”的快速诊断提供了新的方法。(本文来源于《中国农业科学院》期刊2015-05-01）
王春媛[5]（2012）在《鹅细小病毒98E鸭胚致弱株的培育及生物学特性研究》一文中研究指出小鹅瘟又称鹅细小病毒病(Goose Parvovirus, GPV)是雏鹅烈性传染病,主要侵害4～20日龄雏鹅和雏番鸭,该病的特点是传播快、致死率和发病率高,随着雏鹅日龄增长发病率和致死率下降。该病造成的经济损失十分严重,是目前养鹅业最主要的传染病之一。天然被动免疫是预防小鹅瘟的有效手段,主要是利用小鹅瘟弱毒疫苗和灭活疫苗免疫产卵母鹅使雏鹅获得母源抗体。本研究首次将鹅细小病毒黑龙江分离株98E株适应SPF鸭胚,采用鸭胚连续传代致弱的方法,培育出小鹅瘟鸭胚致弱株98D15株(简称GPV-98D15株),并评价其生物学特性,安全性及免疫原性。鹅细小病毒98E株在鸭胚上盲传至F10代仍没有死亡鸭胚,从F11代鸭胚逐渐死亡,F14代开始鸭胚全部死亡,随着传代次数增加,致死鸭胚的时间呈现规律性缩短。死亡鸭胚胚体有明显的充血、出血等病变,与GPV的病变特征相符；利用PCR技术成功地克隆了GPV-98D15株的NSl基因和VP1基因；其中VP1基因中,GPV-98D15鸭胚致弱株较GPV-98E亲本病毒有部分核苷酸序列突变；GPV-98D15株的鸭胚半数致死量、对鹅胚的致病力试验、安全性试验,说明GPV-98D15株的弱毒性稳定、安全性良好；鸭胚成纤维细胞半数感染量与间接免疫荧光(IFA)测定GPV-98D15株病毒能够感染鸭胚成纤维细胞；该致弱株与SYG(41～50)商品化疫苗进行免疫原性比较。通过间接ELISA、琼扩试验以及中和试验检测抗体的变化规律,结果发现免疫GPV-98D15株和SYG(41～50)株商品化疫苗的20日龄雏鹅抗体水平均不断上升,并在第5周达到最高峰,随后缓慢下降,但是GPV-98D15株免疫组的免疫效果与商品化SYG(41～50)疫苗株免疫组相比抗体水平略低,但并无显着差异(P>0.05)。中和试验检测到免疫GPV-98D15株能够使雏鹅产生不低于商品化SYG(41～50)株弱毒疫苗的GPV特异性中和抗体,使雏鹅获得免疫保护。本研究为小鹅瘟疫苗的生产提供一种安全、有效、不受季节限制的候选毒株,为小鹅瘟病毒的致弱机理研究提供物质基础。(本文来源于《东北农业大学》期刊2012-04-06）
侯广玉[6]（2010）在《马立克氏病病毒致弱毒株的培育及其特性分析》一文中研究指出人工致弱流行强毒株是获得弱毒疫苗株的有效方法。本研究将4株马立克氏病病毒(MDV)现地流行强毒株(L-ZY、L-CZ、L-MS和L-SY株),在体外连续传代至110代,获得相应的4株高代次毒株(L-ZYp110C、L-CZp110C、L-MSp110C和L-SYp110C株)。分析了高代次毒株对SPF鸡的致病性和体内、体外生长特性。同时对其基因组中与致病相关基因-Meq、132bpr、RLORF4、RLORF12等基因进行了遗传变异分析。结果显示:以不同剂量的L-SYp110C株和L-MSp110C株病毒感染SPF鸡,在试验期(12周内)没有马立克氏病(MD)发生,且与空白对照组鸡只体重均值差异不显着;采用双重荧光定量PCR法分析病毒在体内外增殖能力的实验结果表明,高代次毒株在体外繁殖能力增强,在体内繁殖能力显着低于亲本毒株。同亲本毒株基因序列比对发现:⑴L-ZYp110C株Meq基因第528-531位碱基cccc插入,使ORF发生移码突变;RLORF4基因第171～239位缺失69bp;RLORF12基因第168-174位缺失独特的TGTTGGG序列,使基因移码突变;⑵L-MSp110C株Meq基因637位碱基T插入,导致ORF发生移码突变;RLORF12基因第67位缺失碱基T,使ORF发生移码突变,推导编码产生33个氨基酸或启用下游启动子编码产生76个氨基酸;⑶L-CZp110C细胞毒株RLORF4基因第165～233位缺失69bp;⑷L-SYp110C株RLORF4基因第215-265位碱基缺失51bp;⑸4株110代毒株132bpr基因组拷贝数均显着增加。以上结果表明:4株MDV流行强毒株体外传代至110代后,病毒增殖能力和主要致瘤相关基因的遗传特性都发生了改变。从而导致强毒株的弱化。该研究为进一步筛选MDV弱毒疫苗提供了实验依据。(本文来源于《黑龙江八一农垦大学》期刊2010-04-01）
罗薇,张金灵,刘内生,裴超信,岳华[7]（2010）在《Ⅰ型鸭肝炎病毒鸡胚致弱毒MY株的培育及实验研究》一文中研究指出将Ⅰ型鸭肝炎分离株XC-1适应鸡胚,培育成1株毒力弱而稳定、免疫原性良好的鸭肝炎鸡胚化MY弱毒株。该毒株毒力为1011.40ELD50/0.1mL,1013.62TCID50/0.1mL;对雏鸭无致病性;在雏鸭体内连续盲传5代未见毒力返强;1日龄雏鸭用8,000 ELD50/0.1mL的MY株致弱毒腿部肌注0.2ml免疫后3d强毒原液0.5mL/只攻击,可产生2/5的保护,第6d-21d产生完全保护,免疫后第3d、5d、6d、7d、9d、14d、21d抗DHVⅠ的中和抗体滴度分别为10-1.38、10-1.55、10-1.64、10-1.65、10-1.68、10-1.8、10-1.89,表明MY是1株理想的鸡胚弱毒疫苗后备株;通过MY株的鸡胚的繁殖规律观察,确定该病毒的最佳收毒时间为接胚后的72h~84h,为疫苗生产条件的建立提供了依据。(本文来源于《内蒙古农业大学学报(自然科学版)》期刊2010年01期）
赵宝华,王文成[8]（2008）在《嗜肾型传染性支气管炎病毒X株的分离和致弱培育》一文中研究指出利用鸡胚分离法从发生肾变病型传染性支气管炎的病鸡分离嗜肾型传染性支气管炎病毒X株,该病毒株能引起鸡胚发育受阻,鸡胚和雏鸡肾脏肿大、输尿管尿酸盐沉积,能被传染性支气管炎病毒M型血清部分中和,初步研究表明是一个新的毒株。通过SPF鸡胚连续传代,获得了嗜肾型传染性支气管炎弱毒疫苗毒株X 93。结果显示,X株经过鸡胚传代,对鸡胚的致死率由原代的0上升到90代的82%;在每0.1 mL鸡胚中的病毒含量由原代的105.0E ID50上升到90代的107.8E ID50;对3日龄SPF雏鸡的致病率和致死率分别由40代时的70.0%和40.0%下降到90代时的0值;与X 93接种鸡一同饲养的实验鸡全部健康存活;X 93回归雏鸡连传5代,未见毒力返强现象。(本文来源于《中国兽医学报》期刊2008年02期）
孙秋艳,刘红芹,朱瑞良[9]（2006）在《传染性法氏囊病病毒致弱毒株的培育及其遗传稳定性检测》一文中研究指出隆化病毒株GX-IBDVE10C25Cl5为研究对象,将此毒株通过鸡胚成纤维细胞(CEF)连传25代。通过对克隆化毒株1、5、10、15、20、25代次传代毒TCID50(0.1ml)的测定及对41日龄的SPF鸡的致病性试验,结果表明克隆化毒株不同代次传代毒致病力逐代降低,从15代毒开始免疫器官指数、病理组织学变化与健康对照鸡相比差异不显着,由此证明此毒株已经被驯化为弱毒株,并且随着传代代次的增加遗传性能稳定。该弱毒株有望为控制vvIBDV的感染提供一条新的途径。(本文来源于《家畜生态学报》期刊2006年02期）
孙秋艳[10]（2005）在《超强毒IBDV细胞克隆化毒致弱株的培育及其免疫原性的研究》一文中研究指出鸡传染性法氏囊病(IBD)是由传染性法氏囊病病毒(IBDV)引起的高度接触性、杀淋巴细胞的免疫抑制性疾病。20世纪80年代末期由于超强毒株和变异毒株的出现,IBD免疫失败时有发生。为了更好地控制vvIBDV的感染,国内外许多学者先后利用超强毒株和变异株进行了弱毒株的培育(Rosenberger等,Kibenge等,Tsai等,Hassan等),此外De1-A、MD、GLS等变异株在BGM-70、Vero、CEF等细胞上都已获得弱毒株,但获得的弱毒株免疫效果均不理想,为了探讨预防鸡群vvIBDV的感染,我们利用地方vvIBDV进行了致弱,并对其致弱株的免疫原性做了研究。 本试验分为两部分: 1.超强毒IBDV细胞克隆化毒致弱株的培育及其遗传稳定性的检测: 本试验以超强毒传染性法氏囊病病毒(vvIBDV)国内分离株GX8/99株筛选得到的克隆化毒株GX-IBDVE_(10)C_(25)Cl_5为研究对象,将此毒株通过鸡胚成纤维细胞(CEF)连传25代。通过对克隆化毒株1、5、10、15、20、25代次传代毒TCID_(50)(0.1ml)的测定,结果1～15代TCID_(50)在逐渐降低(10~(5.40)、10~(4.80)、10~(4.67)、10~(3.76)),15～25代TCID_(50)变化不大(10~(3.76)、10~(3.80)、10~(3.76)),由此说明细胞克隆化病毒的细胞传代毒的毒力已趋于稳定。通过对41日龄的SPF鸡的致病性试验,结果表明接种克隆化细胞传代毒第1、5代毒鸡的法氏囊指数、胸腺指数和脾脏指数与健康对照同批鸡相比差异显着(P<0.05),克隆化细胞毒第5代毒仍有一定的致病性,对41日龄SPF鸡的致死率为10%,而10、15、20、25代与健康对照同批鸡相比差异不显着(P>0.05),从15代开始,此克隆化细胞毒株对41日龄的SPF鸡已经失去致病性,由此说明此毒株已变成了弱毒株。(本文来源于《山东农业大学》期刊2005-05-20）
培育致弱论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
为制备鹅细小病毒(GPV)弱毒株并研究其传代致弱前后的基因变化情况,本研究将GPV YG株在鹅胚成纤维细胞(GEF)和鸭胚成纤维细胞(DEF)中交替传代培养至72代次,并且对F0、F24、F48和F72代次病毒进行PCR全基因组扩增和测序。序列比对结果显示,F72代与F0代相比,5'和3'非编码区存在163个核苷酸差异,多数集中于反向终端重复序列(ITR)中,5'和3'两端均有6段碱基插入;编码区氨基酸序列比对结果显示,与F0代次病毒相比,F72代次病毒共有23个氨基酸位点突变,18个位于VP蛋白,5个位于非结构蛋白。病毒致病性试验表明,随着传代次数的增加,其毒力呈减弱趋势,并且F72代次病毒进一步致弱。本研究对GPV致弱后基因变化情况的分析及动物致病性试验结果为GPV毒力致弱机制的研究奠定了基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
培育致弱论文参考文献
[1].张青山,李晨曦,刘明,邵周伍林,张云.鹅细小病毒弱毒株的培育及其致弱前后全基因组中核酸变异的分析[C].中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第五次学术研讨会论文集.2016
[2].张青山,李晨曦,刘明,邵周伍林,张云.鹅细小病毒弱毒株的培育及其致弱前后全基因组中核酸变异的分析[J].中国预防兽医学报.2016
[3].杨达.H9N2亚型禽流感病毒冷适应致弱活疫苗候选株的培育及冷适应表型相关基因确定[D].扬州大学.2016
[4].邵周伍林.鹅细小病毒传代致弱毒株的培育及胶体金免疫层析检测方法的建立[D].中国农业科学院.2015
[5].王春媛.鹅细小病毒98E鸭胚致弱株的培育及生物学特性研究[D].东北农业大学.2012
[6].侯广玉.马立克氏病病毒致弱毒株的培育及其特性分析[D].黑龙江八一农垦大学.2010
[7].罗薇,张金灵,刘内生,裴超信,岳华.Ⅰ型鸭肝炎病毒鸡胚致弱毒MY株的培育及实验研究[J].内蒙古农业大学学报(自然科学版).2010
[8].赵宝华,王文成.嗜肾型传染性支气管炎病毒X株的分离和致弱培育[J].中国兽医学报.2008
[9].孙秋艳,刘红芹,朱瑞良.传染性法氏囊病病毒致弱毒株的培育及其遗传稳定性检测[J].家畜生态学报.2006
[10].孙秋艳.超强毒IBDV细胞克隆化毒致弱株的培育及其免疫原性的研究[D].山东农业大学.2005
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