导读:本文包含了肌纤维转化类型论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:猪,肌纤维,生长发育,肌纤维类型
肌纤维转化类型论文文献综述
欧秀琼,李星[1]（2019）在《猪肌肉肌纤维生长发育与类型转化及营养调控》一文中研究指出肌纤维生长发育与类型转化受遗传、生理阶段、环境、营养、运动及激素等很多因素影响,本文主要综述了猪肌肉肌纤维生长发育与类型转化及营养调控方面的科学研究,旨在为通过营养调控改善猪肌肉品质提供参考。(本文来源于《上海农业学报》期刊2019年05期）
夏琴[2]（2019）在《基于脂联素信号通路研究白藜芦醇调控猪肉品质和骨骼肌肌纤维类型转化的作用机制》一文中研究指出猪肉品质及其调控是动物营养研究领域的热点。肌纤维类型是构成不同品种间肉质差异的关键因素之一。本论文旨在通过饲养试验研究日粮中添加白藜芦醇(Resveratrol,RES)对生长肥育猪肉质性状指标、背最长肌肌纤维类型以及脂联素(AdipoQ)信号通路关键基因表达的影响,并在细胞水平上探讨RES通过AdipoQ信号通路调控猪骨骼肌肌纤维类型转化的机制,为开发RES作为一种通过调控肌纤维类型进而改善猪肉品质的饲料添加剂提供科学理论依据。主要研究结果如下1、日粮中添加RES对生长肥育猪生长性能、胴体性状和肉质指标的影响本试验选用24头65kg左右的杜×长×大叁元杂交猪作为试验动物,设四个处理组:对照组(饲喂基础日粮)、200mg/kg组(饲喂基础日粮+200mg/kg RES)、400mg/kg组(饲喂基础日粮+400mg/kg RES)、600mg/kg组(饲喂基础日粮+600mg/kg RES),每组6头猪,在猪体重到110kg时屠宰取样。结果表明:(1)与对照组相比,日粮中添加RES对生长肥育期杜长大猪的生长性能、胴体性状以及血液指标方面没有显着性影响。(2)在肉质方面,叁个试验组的肉色评分均显着上升;400mg/kg和600mg/kg组的肌肉电导率以及剪切力指标均显着低于对照组和200mg/kg组;400mg/kg和600mg/kg组的肌内脂肪含量显着高于对照组和200mg/kg组。由此可见,日粮中添加适量的RES能够明显改善猪背最长肌的颜色,降低肌肉剪切力和电导率,提高肌内脂肪含量,这说明RES具有改善猪肉品质的作用。其中,400mg/kg和600mg/kg添加量能达到改善肉质的最佳效果。2、日粮中添加RES对猪骨骼肌肌纤维类型转化调控作用的研究本试验采用上述饲养试验猪的背最长肌组织样品进行检测,旨在探讨日粮中添加RES对肥育猪背最长肌肌纤维类型、能量代谢酶活的影响,以及RES是否通过AdipoQ信号通路调控骨骼肌肌纤维类型转化的作用机制。结果表明:(1)400mg/kg和600mg/kg组的MyHCl基因表达量极显着高于对照组和200mg/kg组;200mg/kg组MyHC2a基因表达量显着高于对照组,400mg/kg和600mg/kg组极显着高于对照组;与对照组相比,200mg/kg和600mg/kg组MyHC2b的mRNA表达量显着降低,400mg/kg组极显着降低。(2)与肌纤维类型相关的能量代谢酶活(苹果酸脱氢酶MDH、乳酸脱氢酶LDH和琥珀酸脱氢酶SDH)方面:与对照组相比,200mg/kg组的MDH酶活无明显变化,400mg/kg和600mg/kg组极显着升高;对照组和200mg/kg组之间的SDH酶活无显着差异,400mg/kg和600mg/kg组的SDH酶活均极显着高于对照组和200mg/kg组;与对照组相比,日粮中添加RES能够显着降低背最长肌LDH的活性。由此可见,日粮中添加适量的RES能够调控猪骨骼肌肌纤维类型从酵解型向氧化型转化,其中,400mg/kg和600mg/kg组能达到最佳效果。(3)AdipoQ信号通路关键基因表达的检测方面,400mg/kg和600mg/kg组猪的背最长肌中AdipoQ、AdipoR1、AdipoR2、AMPKα1、SIRT1基因的表达量均极显着高于对照组和200mg/kg组;与对照组相比,RES组背最长肌中AMPKα2的mRNA表达量极显着升高,且400mg/kg组的表达量极显着高于200mg/kg和600mg/kg组;400mg/kg和600mg/kg组PGC-11α基因的表达量极显著高于对照组和200mg/kg组,200mg/kg组显着高于对照组,400mg/kg和600mg/kg组无显着差异。同时,检测关键蛋白的表达量发现:试验组的蛋白表达量都高于对照组,其中AdipoQ蛋白表达量是随着RES添加量的增加而升高,400mg/kg组和600mg/kg组的AdipoR1、AMPKα、PGC-1α的蛋白表达量均显著高于对照组,与上述荧光定量结果一致。由此可看出,RES能够上调AdipoQ信号通路上关键基因的表达,其中,400mg/kg和600mg/kg组调控效果最为明显。3、细胞水平研究RES通过AdipoQ信号通路调控肌纤维类型基因表达的作用机制(1)利用pLV-AdipoQ重组慢病毒质粒转染猪骨骼肌卫星细胞,结果显示,过表达AdipoQ基因后,AdipoR1、AdipoR2、AMPKα1、AMPKα2、PGC-1α、SIRT1基因的表达均显着上升。(2)用AdipoR1-shRNA慢病毒感染猪骨骼肌卫星细胞,结果显示,干扰AdipoR1基因后,AdipoR1、AMPKα1、AMPKα2、PGC-1α、SIRT1均具有下降趋势,AdipoQ、AdipoR2无明显变化。以上结果说明,AdipoQ是与其受体1结合,调控下游基因AMPKα1、AMPKα2、SIRT1、PGC-1α的表达。(3)RES干预猪骨骼肌卫星细胞并诱导分化的试验结果显示,RES干预后,AdipoR1、AdipoR2、AMPKα1、AMPKα2、PGC-1α、SIRT1、MyHC1、MyHC2α 基因的表达水平均显着上升,MyHC2b基因表达水平显着下降。由此说明,RES具有通过上调AdipoQ信号通路调控肌纤维类型从酵解型向氧化型转化的作用。综合体内和体外实验结果表明,RES激活AdipoQ-AdipoR1-AMPK-SIRT1-PGC-1α信号通路,调控猪骨骼肌肌纤维类型从酵解型向氧化型转变,达到改善猪肉品质的作用。在杜长大猪肥育期65kg-110kg体重阶段,综合考虑改善猪肉品质的最佳效果及最低饲养成本,日粮中RES的适宜添加量为400mg/kg。(本文来源于《广西大学》期刊2019-06-01）
赵丹丹,唐成林,黄思琴,罗翱,张安宁[3]（2019）在《电针干预对失神经肌萎缩大鼠肌卫星细胞分化及肌纤维类型转化的影响》一文中研究指出目的:观察电针干预对失神经肌萎缩大鼠腓肠肌中配对盒转录因子7(Pax7)、成肌分化抗原(Myod1)、肌细胞生成素(Myog)、肌球蛋白重链-Ⅱa(Myh2)、肌球蛋白重链-Ⅱx(Myh1)及肌球蛋白重链-Ⅰ(Myh7)表达的影响,探讨电针延缓失神经肌萎缩发展的可能机制。方法:将66只雄性SD大鼠随机分为假手术组24只、模型组24只和电针组18只。采用慢性坐骨神经压迫损伤制备大鼠右后肢失神经肌萎缩模型。造模1周后电针组取大鼠术侧"足叁里""环跳"穴予电针治疗,每次10min,每日1次,每周6次,分别连续干预1、2、4周。称重计算各组大鼠的腓肠肌湿重比,HE染色测定腓肠肌纤维截面积及直径;实时荧光定量PCR检测造模第3周各组大鼠腓肠肌中Pax7、Myod1、Myog、Myh2、Myh1和Myh7mRNA的相对表达量。结果:与假手术组相比,造模1周后各时间点模型组大鼠腓肠肌湿重比显着降低(P<0.05)。模型组和电针组腓肠肌湿重比差异无统计学意义(P>0.05)。与假手术组相比,各时间点模型组大鼠术侧腓肠肌纤维截面积及直径显着减小(P<0.05);与模型组比较,各时间点电针组大鼠术侧腓肠肌纤维截面积及直径显着升高(P<0.05)。造模3周时,与假手术组相比,模型组大鼠术侧腓肠肌中Myod1和Myog mRNA表达量明显升高(P<0.01),而Myh2、Myh1和Myh7mRNA表达量明显降低(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,电针干预则能有效上调Myod1、Myog和Myh7mRNA表达量(P<0.05,P<0.01);3组间Pax7mRNA表达量差异无统计学意义(P>0.05)。结论:电针干预大鼠"足叁里""环跳"穴可能通过调控Myod1、Myog、Myh7mRNA的表达,影响肌卫星细胞的成肌分化水平及肌纤维类型的转换,延缓腓肠肌失神经肌萎缩的发展。(本文来源于《针刺研究》期刊2019年01期）
侯普馨,侯艳茹,白艳苹,苏琳,赵丽华[4]（2019）在《Ca~(2+)信号通路调控肌纤维类型转化的研究进展》一文中研究指出Ca~(2+)信号通路包括钙调神经磷酸酶(calcineurin,CaN)和钙调蛋白激酶(calmodulin kinase,CaMK)两条Ca~(2+)依赖性信号传导途径,其被激活都会促进快肌纤维向慢肌纤维转化。本文综述了CaN和CaMK的组成结构、作用机理、影响Ca~(2+)信号通路调控的主要因素、Ca~(2+)信号通路在肌纤维类型转化中的作用以及与肉品品质的关系,并对其研究方向作出展望,以期为今后通过遗传、营养等措施改善肉品品质提供理论依据。(本文来源于《食品科学》期刊2019年11期）
梁婷玉,吴建平,刘婷,柏妍,张瑞[5]（2018）在《肌纤维类型分类及转化机理研究进展》一文中研究指出肌纤维作为骨骼肌的基本组成单位,其类型组成的差异与产肉动物的产肉量及其肉品的质量密切相关,故肌纤维成为近年来国内外的研究热点。本文先对肌纤维ATP酶染色法、免疫组化染色法等肌纤维类型的分类方法进行综述,进一步对肌纤维特性进行简要概述,最后回顾了肌纤维类型转化的外界因素及分子调控通路研究进展。以期为今后的肌纤维类型及转化机理研究提供参考。(本文来源于《肉类研究》期刊2018年09期）
许海洋[6]（2018）在《FHL3基因调控肌肉生长和肌纤维类型转化的功能研究》一文中研究指出FHL3(Four and a half LIM domain protein 3)属于LIM蛋白质超家族,主要在骨骼肌中表达,能够通过LIM结构域与肌分化因子MyoD、肌动蛋白、细胞周期调节因子等多种蛋白的互作,调控成肌细胞分化、细胞骨架结构、肌细胞的形成以及下游基因的表达。本研究利用实验室前期建立的转FHL3基因小鼠模型,研究了过表达FHL3基因对肌纤维类型转化和肌肉生长的作用,具体研究结果如下:1.对实验室前期获得的F1代转基因小鼠进行了鉴定,完成了3个家系的转FHL3基因小鼠的建系工作,扩繁至第5代。转基因小鼠的后代性别比例均衡,阳性率随传代增加逐步升高,至第5代达到90%以上,外源基因能够稳定遗传。同时,转基因小鼠的产仔能力,与野生型小鼠无显着差异。利用实时定量PCR和Western Blot技术,分析2月龄转基因小鼠的心脏、肝脏、肾脏、肌肉和睾丸组织中FHL3基因的表达变化,结果表明FHL3基因在转基因小鼠的肌肉组织中特异性高表达。2.对转基因鼠的体重增长进行检测,结果显示转基因鼠的初生重与野生型小鼠无显着差异,出生后1~8周的生长速度和肌肉比例极显着高于野生鼠。HE染色和免疫荧光结果显示股四头肌、胫骨前肌、腓肠肌的肌纤维数目增多,横截面积增大、密度减小。ATP酶染色和免疫组化的结果表明腓肠肌中II型快肌纤维增多,I型慢肌纤维减少。对转基因小鼠进行力学测试,结果显示其肌肉拉力增强,耐疲劳能力下降。转基因小鼠心脏大小和重量与野生鼠无异,HE染色显示,转基因小鼠心肌发育正常,心肌尺寸与野生鼠无明显差异,同时发现转基因小鼠心脏中FHL3基因的mRNA水平显着上调表达,但蛋白水平无显着变化。3.对转基因小鼠腓肠肌中FHL3和肌纤维类型相关基因进行了转录水平和蛋白水平的分析。结果显示:在mRNA水平,1、2和3月龄转基因小鼠腓肠肌中FHL3基因极显着上调表达,I型肌纤维相关基因MyHC I/slow的表达极显着下调,II型肌纤维相关基因MyHC IIa、IIb、IIx显着上调表达。在蛋白水平,2月龄转基因小鼠腓肠肌中FHL3、MyHC、MyHC IIa和IIb蛋白极显着上调表达,MyHC I/slow和Myoglobin显着下调表达。同时对线粒体功能相关基因PGC1-α、COX2、COX4、AMPK和CS,糖酵解相关基因PDK4,介导蛋白质降解的泛素连接酶Atrogin-1,Murf1和Musa1以及肌肉生长发育相关基因Myf5、Myf6、MSTN、MEF2c的表达变化进行检测,PGC1-α、COX4、PDK4、Myf5、Myf6、MEF2c的表达显着上调,MSTN极显着下调表达。这些结果证明了转基因小鼠的肌纤维类型的转化,线粒体功能增强,能量转化和利用率提高。4.分离鉴定了转FHL3基因小鼠骨骼肌卫星细胞,通过实时定量PCR、Western Blot、流式细胞术和RTCAxCELLigence系统对肌卫星细胞的增殖能力进行了分析,结果表明过表达FHL3基因促进肌卫星细胞增殖,促进转基因小鼠的肌纤维数目和肌肉量增多。综上所述,本研究在活体水平上验证了FHL3基因具有促进肌纤维类型转化以及提高肌肉生长和重量的功能,为深入研究FHL3基因调控肌纤维类型转化的机制提供了新的思路。(本文来源于《华中农业大学》期刊2018-06-01）
刘馨怡[7]（2017）在《成纤维生长因子FGF21基因对成肌分化及肌纤维类型转化的调控》一文中研究指出成纤维生长因子21(Fibroblast Growth Factor 21,FGF21)属于成纤维生长因子(Fibroblast Growth Factor,FGF)大家族中的内分泌成纤维生长因子亚家族(Endocrine FGF subfamily),该基因编码的蛋白具有分泌特性,肝脏是该蛋白的主要合成器官。不同于传统的成纤维生长因子家族成员,FGF21基因所编码蛋白的分泌特性使得它在主要脏器合成分泌后可以随着血液循环到达全身各个组织器官,通过和相应的受体以及共因子结合而发挥重要作用,因此该基因在机体的生长、发育、能量代谢、繁殖等诸多方面均具有重要作用。多年来,关于FGF21基因功能的研究主要集中在脂肪代谢、葡萄糖利用、胰岛素抵抗、肥胖等方面,由于FGF21基因不具有促进有丝分裂的作用,结合该基因在能量代谢方面的突出表现,FGF21被提名作为代谢综合征的一个潜在治疗药物而备受关注。肌肉组织在机体组成中占有重要比例,肌肉和脂肪是机体能量输出的两个最主要组织,在机体葡萄糖利用,胰岛素抵抗等方面发挥着重要作用。此外,肌肉是家畜的主要经济性状之一,长期以来,畜牧工作者致力于提高家畜的肌肉产量和肌肉质量。FGF21基因作为一个重要的能量调节因子,虽然关于该基因的研究报道大量涌现,研究成果也日新月异,但是这些研究的重点是该基因在脂肪代谢,胰岛素抵抗等方面的作用,关于FGF21基因在肌肉的发育形成过程以及肌细胞的代谢过程中是否也占有一席之地仍然不清楚。本研究主要利用实时定量PCR、蛋白质免疫印迹、酶联免疫吸附测定实验、细胞免疫荧光、免疫组织化学等实验技术,着重探讨了FGF21基因在肌肉形成过程中的作用以及该基因发挥作用的可能机制,主要结果如下所述:1.通过检测FGF21基因在细胞成肌分化过程中的表达变化情况发现,该基因的表达在细胞成肌分化过程中整体升高,其中该基因的mRNA水平在分化第2天的时候达到峰值,在分化第4天有一定回落,但是仍然高于分化前的表达水平。在蛋白质水平,FGF21胞内蛋白表达水平从分化开始至分化第6天整个过程中持续升高,分泌到培养基中的胞外蛋白在分化第2天急剧升高后一直保持在较高水平。2.分别通过超表达和干扰FGF21基因,检测了该基因在细胞成肌分化、肌纤维类型转变和能量代谢方面的作用。实验结果表明超表达FGF21能够显着或极显着(P<0.05为显着,P<0.01为极显着)增加成肌分化关键基因(如MyoD,MyoG)、氧化型肌纤维代表基因(如MyHCΙ)以及线粒体有氧氧化相关基因(如COX 6c,COX 8b)的表达,而干扰FGF21基因能够降低这些基因的mRNA表达水平;同样,FGF21蛋白质表达量的增加引起细胞成肌分化关键蛋白MyoD、MyoG和氧化型肌纤维中高表达的蛋白MyHCΙ、Myoglobin以及线粒体生成和功能相关蛋白PGC1α、Cox4表达上调,而FGF21蛋白表达量的降低能够下调上述蛋白的表达;此外,超表达FGF21基因促进成肌分化过程中细胞融合和肌管形成,而干扰FGF21基因后细胞的成肌分化过程受到抑制,细胞融合率下降,肌管形成受阻。3.借助肌肉特异超表达小鼠FGF21基因的转基因小鼠,在个体水平探索了FGF21基因对肌肉发育的影响,通过表型观察发现与同窝对照小鼠相比,转基因小鼠个体更小,腓肠肌肌肉组织颜色更红。通过检测基因表达变化发现转基因小鼠腓肠肌组织中的氧化型肌纤维相关基因(MyHCΙ、MyHCΠa)的表达显着高于同窝对照小鼠(P<0.05),同时,转基因小鼠的腓肠肌组织中氧化型肌纤维相关蛋白表达量高于对照组小鼠。4.通过分析FGF21基因启动子区发现了转录因子MyoD的几个潜在结合位点,通过实验鉴定了转录因子MyoD能够结合FGF21基因启动子从而调控该基因的转录。5.在超表达和干扰FGF21基因后检测细胞周期相关基因的表达发现,超表达FGF21基因增加细胞周期退出基因的表达,细胞被阻滞在细胞周期的G0期,而进入S期的细胞总数显着减少(P<0.05),干扰FGF21基因后细胞中细胞周期退出基因的表达量降低而细胞周期促进基因的表达量升高。6.超表达FGF21基因发现FGF21超表达细胞中AMPK被磷酸化激活,Sirt 1和PGC1α蛋白表达量升高;随后运用AMPK激活剂和抑制剂分别处理FGF21超表达细胞或对照细胞发现,用AMPK激活剂处理后FGF21超表达细胞中成肌分化相关基因和氧化型肌纤维相关基因mRNA和蛋白表达水平升高,AMPK抑制剂处理细胞中成肌分化相关基因和氧化型肌纤维相关基因mRNA和蛋白表达水平降低。综上所述,本研究发现FGF21基因具有促进成肌分化的作用,该作用受到成肌转录因子MyoD的调控,同时,FGF21基因能够促进细胞周期退出从而增强成肌分化。此外,FGF21基因能够促进氧化型肌纤维的形成,可能是通过FGF21-SIRT1-AMPK-PGC1α通路发挥作用的。该研究为FGF21在肌肉发育过程中的作用和调控机理提供了新的依据和思路。(本文来源于《华中农业大学》期刊2017-06-01）
程晓芳[8]（2017）在《白藜芦醇通过脂联素信号通路调控肌纤维类型转化的研究》一文中研究指出白藜芦醇对肌肉的pH值、肉色及系水力具有改善作用,并能提高肌肉嫩度,有效改善肉质。脂联素(AdipoQ)作为脂肪细胞因子中唯一的负性调节激素,在骨骼肌氧化代谢方面也发挥着重要作用。为探究白藜芦醇通过脂联素信号通路调控肌纤维转化的分子机制,本研究运用过表达及干扰沉默等多种实验方法,在细胞水平及小鼠有机整体水平探究白藜芦醇通过脂联素信号通路,对肌纤维类型变化的影响,获得的主要研究结果如下:1.根据GenBank公布的猪AdipoQ基因CDS序列设计引物,扩增广西陆川猪AdipoQ基因CDS序列,进行生物信息学分析。结果显示陆川猪AdipoQ基因CDS区长为732 bp,可编码242个氨基酸,分子量为26400.7 Da;核酸序列分析发现,不同物种间AdipoQ基因的同源性较高;蛋白预测发现,AdipoQ具有很强的亲水性,有高含量的无规则卷曲和延伸链,较低含量的α-螺旋及β-折迭,含有信号肽,是一种分泌蛋白。成功构建了 pLV-AdipoQ慢病毒表达载体,为后续试验奠定基础。2.将pLV-AdipoQ重组慢病毒载体质粒转染C2C12细胞后成功过表达AdipoQ基因。重组gAcrp30处理组和pLV-AdipoQ过表达组细胞诱导分化结果显示,AdipoR1、AdipoR2、AMPK、PGC-1a、MyHC1、MyHC2a的表达水平在两个不同处理组中均较对照组显着上调。以上结果说明AdipoQ具有调控肌纤维类型转化的作用。3.C2C12细胞诱导分化过程中,不同处理组(Res处理组、重组gAcrp30处理组、Res+gAcrp30处理组)与对照组结果比较显示,gAcrp30与Res 均具有上调 AdipoQ、AdipoR1、AdipoR2、AMPK、PGC-1 α、MyHC1基因表达量,下调MyHC2b基因表达量的作用,Res+gAcrp30处理组定量结果显示,在肌纤维类型转化调控作用中二者具有协同迭加效应。结合白黎芦醇对选择性干扰AdipoR1、AdipoR2、AdipoR1/2基因的C2C12细胞作用结果显示,当AdipoR1基因受到干扰表达下调后,AMPK、PGC-1α基因表达量呈相同趋势,均显着下调,在白藜芦醇的作用下,AdipoR2基因的表达量显着升高,但AMPK、PGC-1α基因表达变化差异不显著;当AdipoR2基因受到干扰表达下调后,AdipoR1、AMPK、PGC-1α基因的表达量变化并不受到影响,在白藜芦醇的作用下,AdipoR1、AdipoR2、AMPK、PGC-1α基因的表达水平均呈上调趋势;当AdipoR1、AdipoR2基因均受到干扰表达下调后,在白藜芦醇的作用下AdipoR1、AdipoR2、AMPK、PGC-1α基因的表达水平均显著增加。综合细胞水平验证结果提示白藜芦醇主要通过AdipoR1调控AMPK磷酸化激活作用下上调下游通路蛋白PGC-1α的表达,进而调控肌纤维的类型。4.白藜芦醇饲喂小鼠12周,白藜芦醇饲喂组与对照组相比,体重和采食量,及生化指标均无明显差异,肝脏、脂肪组织以及血清中AdipoQ表达水平较对照组显着升高,趾长伸肌和比目鱼肌中AdipoQ、AdipoR1、AdipoR2、AMPK、PGC-1α、MyHC1,MyHC2a,MyHC2x基因表达量均明显高于对照组,MyHC2b表达量低于对照组。综上所述,白藜芦醇通过脂联素信号通路上调AdipoR1基因表达,激活AMPK及其下游PGC-1α基因的表达,进而调控肌纤维向氧化型转化。(本文来源于《广西大学》期刊2017-06-01）
温万雪[9]（2016）在《猪Sox6的基因克隆、原核表达及其在调控肌纤维类型转化中的作用》一文中研究指出由于传统的饮食习惯,猪肉成为世界消费量最大的肉产品。随着国家经济的发展,人们的生活水平越来越高,消费者对猪肉品质的要求也越来越高。而猪肉品质与肌纤维类型密切相关。根据肌球蛋白(MyHC)亚型,肌纤维可分为Ⅰ、Ⅱa、Ⅱx和Ⅱb型,分别以表达MyHC Ⅰ、MyHC Ⅱa MyHC Ⅱx和MyHC Ⅱb为主。提高Ⅰ型肌纤维在肌肉中的比例可有效地改善猪肉品质。Sox6是转录因子Sox基因家族的重要成员,参与肌纤维类型转化的调节,影响肌肉中Ⅰ型肌纤维的比例。因此,Sox6在猪肉品质调控方面有潜在的应用。但有关猪Sox6的研究目前在国内外尚未见报道。本研究旨在克隆猪Sox6基因,构建猪Sox6原核和真核表达载体,制备重组猪Sox6蛋白,考察过表达猪Sox6和外源添加重组猪Sox6蛋白对肌纤维类型转化的影响。主要研究内容及结果如下：试验一猪Sox6基因编码区全序列克隆及组织表达规律分析Sox6属于转录因子Sox基因家族的一员,参与肌纤维类型转化的调节,是慢肌特异基因的抑制子,影响肌肉中Ⅰ型肌纤维的含量。但猪Sox6基因序列目前尚不清楚。为此,本研究以3日龄DLY (DurocxLandracexYorkshire)仔猪为试验材料,取500mmg背最长肌用于总RNA提取并反转录成cDNA。根据已知的小鼠、大鼠和人的Sox6编码区序列,设计一对简并引物用于扩增猪Sox6基因目的片段。DNA测序结果显示,猪Sox6基因编码区全序列大小为2406bp,编码801个氨基酸。将该序列提交至GenBank,获得的序列登录号为KF933861。序列分析结果表明,猪Sox6基因核苷酸序列与已知的人、小鼠、大鼠和牛的Sox6基因核苷酸序列同源性分别为87.7%、86.71%、90.91%、89.49%。序列分析结果同时表明,猪Sox6蛋白的氨基酸序列与已知的人、小鼠、大鼠和牛的Sox6蛋白的氨基酸序列同源性分别为89.9%、90.74%、95.26%、90.53%,含有Sox6蛋白保守(100%同源)的HMG box、N端和C端的Q-box、亮氨酸拉链结构,暗示猪Sox6可能具有与已报道的其他物种Sox6相类似的功能。接下来,以10周龄DLY猪(母)为研究对象,采用实时荧光定量PCR检测猪Sox6基因在心、肝、肾、脂肪、背最长肌、趾长伸肌、比目鱼肌、腰大肌、胫骨前肌组织中的表达水平。结果表明,猪Sox6 mRNA在猪心脏和骨骼肌中表达最丰富,在肾脏、脂肪、肝脏、脾脏和肺组织中也可检测到,且在不同类型骨骼肌组织中存在表达差异(背最长肌>趾长伸肌>比目鱼肌)试验二猪Sox6基因在大肠杆菌中的表达和纯化以pET-30a(+)为载体,成功构建了用于表达C端融合6 X His-Tag的重组猪Sox6的原核表达载体pET-30a(+)-pSox6。以大肠杆菌Rosetta (DE3)为宿主菌,实现了猪Sox6基因的表达,目的蛋白分子量约为90 kDa。为获得最佳蛋白表达条件,分别设置了0mmol/L、0.25 mmol/L、0.5mmol/L、0.75 mmol/L、1.0 mmol/L、2.0 mmol/L、3.0 mmol/LIPTG诱导浓度和分别设置了1h、3h、4h、5h、6h、8h表达时间点,SDS-PAGE结果表明,重组蛋白最佳表达条件为在30℃下用1mM IPTG诱导表达5h。溶解性分析结果表明,重组蛋白以可溶性方式存在。表达产物采用亲和层析法进行纯化,最终重组蛋白浓度约为5μg/mL。对纯化后的重组蛋白进行Western blot和蛋白质串联质谱(MALDI-TOF/TOF)鉴定,结果表明,纯化的重组蛋白为猪Sox6蛋白。试验叁猪Sox6在调控肌纤维类型转化中的作用在成功构建重组真核表达载体pcDNA3.1(+)-pSox6、获得重组猪Sox6蛋白和分离原代猪骨骼肌卫星细胞的基础上,本研究考察了猪Sox6对肌纤维类型转化的影响。首先,采用肌肉注射方法将pcDNA3.1(+)-pSox6质粒注射到小鼠胫骨前肌中,在动物水平探讨过表达猪Sox6对MyHC各亚型表达的影响。实时荧光定量PCR结果表明,过表达猪Sox6显着下调了MyHC Ⅰ mRNA的表达,同时显着上调了 MyHC Ⅱa、MyHC Ⅱx和MyHC Ⅱb mRNA的表达。Western Blot结果表明,过表达猪Sox6下调了MyHC Ⅰ蛋白的表达,同时上调了MyHC Ⅱb蛋白的表达。其次,以C2C12细胞为对象,从体外水平探讨了过表达猪Sox6对MyHC Ⅰ和MyHC Ⅱb蛋白表达的影响,结果表明,过表达猪Sox6下调了C2C12细胞中MyHC Ⅰ蛋白的表达,同时上调了C2C12细胞中MyHC Ⅱb蛋白的表达。最后,在体外水平探讨了外源添加重组猪Sox6蛋白对原代猪骨骼肌卫星细胞中慢肌纤维相关基因表达的影响,结果表明,外源添加重组猪Sox6蛋白显着下调了猪骨骼肌卫星细胞中MyHC I、Tnnt1、Tnnc1、Tnni1 mRNA的表达。上述结果表明,猪Sox6在调控肌纤维类型转化中发挥了重要的作用。总之,本研究成功克隆了猪Sox6基因编码区全序列并发现其主要表达于猪心脏和骨骼肌中,首次用大肠杆菌表达系统、亲和层析纯化以及稀释复性的方法获得了具有生物学活性的重组猪Sox6蛋白,证实了猪Sox6在调控肌纤维类型转化中发挥了重要的作用。本研究结果填补了猪Sox6基因的空白,同时为改善猪肉品质提供了重要理论依据和新的思路。(本文来源于《四川农业大学》期刊2016-06-01）
徐孟,陈小玲,陈代文,余冰,罗钧秋[10]（2016）在《Six1对骨骼肌发育和肌纤维类型转化的调控》一文中研究指出Sixl(sine oculis homoeobox 1)是近年来发现的骨骼肌发育和肌纤维类型转化的关键调控因子。Six1基因广泛表达于各动物不同组织中,尤其在骨骼肌巾表达最丰富。Six1对骨骼肌的调控贯穿于动物胚胎期到出生后整个过程,调控着骨骼肌的发育、肌肉损伤修复和肌纤维类型转化。本文概述了Six1基因的发现、Six1蛋白的结构、Six1在不同动物中的表达谱以及Six1在骨骼肌发育、肌肉损伤修复、肌纤维类型转化中的作用。(本文来源于《第七届中国畜牧科技论坛论文集》期刊2016-05-25）
肌纤维转化类型论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
猪肉品质及其调控是动物营养研究领域的热点。肌纤维类型是构成不同品种间肉质差异的关键因素之一。本论文旨在通过饲养试验研究日粮中添加白藜芦醇(Resveratrol,RES)对生长肥育猪肉质性状指标、背最长肌肌纤维类型以及脂联素(AdipoQ)信号通路关键基因表达的影响,并在细胞水平上探讨RES通过AdipoQ信号通路调控猪骨骼肌肌纤维类型转化的机制,为开发RES作为一种通过调控肌纤维类型进而改善猪肉品质的饲料添加剂提供科学理论依据。主要研究结果如下1、日粮中添加RES对生长肥育猪生长性能、胴体性状和肉质指标的影响本试验选用24头65kg左右的杜×长×大叁元杂交猪作为试验动物,设四个处理组:对照组(饲喂基础日粮)、200mg/kg组(饲喂基础日粮+200mg/kg RES)、400mg/kg组(饲喂基础日粮+400mg/kg RES)、600mg/kg组(饲喂基础日粮+600mg/kg RES),每组6头猪,在猪体重到110kg时屠宰取样。结果表明:(1)与对照组相比,日粮中添加RES对生长肥育期杜长大猪的生长性能、胴体性状以及血液指标方面没有显着性影响。(2)在肉质方面,叁个试验组的肉色评分均显着上升;400mg/kg和600mg/kg组的肌肉电导率以及剪切力指标均显着低于对照组和200mg/kg组;400mg/kg和600mg/kg组的肌内脂肪含量显着高于对照组和200mg/kg组。由此可见,日粮中添加适量的RES能够明显改善猪背最长肌的颜色,降低肌肉剪切力和电导率,提高肌内脂肪含量,这说明RES具有改善猪肉品质的作用。其中,400mg/kg和600mg/kg添加量能达到改善肉质的最佳效果。2、日粮中添加RES对猪骨骼肌肌纤维类型转化调控作用的研究本试验采用上述饲养试验猪的背最长肌组织样品进行检测,旨在探讨日粮中添加RES对肥育猪背最长肌肌纤维类型、能量代谢酶活的影响,以及RES是否通过AdipoQ信号通路调控骨骼肌肌纤维类型转化的作用机制。结果表明:(1)400mg/kg和600mg/kg组的MyHCl基因表达量极显着高于对照组和200mg/kg组;200mg/kg组MyHC2a基因表达量显着高于对照组,400mg/kg和600mg/kg组极显着高于对照组;与对照组相比,200mg/kg和600mg/kg组MyHC2b的mRNA表达量显着降低,400mg/kg组极显着降低。(2)与肌纤维类型相关的能量代谢酶活(苹果酸脱氢酶MDH、乳酸脱氢酶LDH和琥珀酸脱氢酶SDH)方面:与对照组相比,200mg/kg组的MDH酶活无明显变化,400mg/kg和600mg/kg组极显着升高;对照组和200mg/kg组之间的SDH酶活无显着差异,400mg/kg和600mg/kg组的SDH酶活均极显着高于对照组和200mg/kg组;与对照组相比,日粮中添加RES能够显着降低背最长肌LDH的活性。由此可见,日粮中添加适量的RES能够调控猪骨骼肌肌纤维类型从酵解型向氧化型转化,其中,400mg/kg和600mg/kg组能达到最佳效果。(3)AdipoQ信号通路关键基因表达的检测方面,400mg/kg和600mg/kg组猪的背最长肌中AdipoQ、AdipoR1、AdipoR2、AMPKα1、SIRT1基因的表达量均极显着高于对照组和200mg/kg组;与对照组相比,RES组背最长肌中AMPKα2的mRNA表达量极显着升高,且400mg/kg组的表达量极显着高于200mg/kg和600mg/kg组;400mg/kg和600mg/kg组PGC-11α基因的表达量极显著高于对照组和200mg/kg组,200mg/kg组显着高于对照组,400mg/kg和600mg/kg组无显着差异。同时,检测关键蛋白的表达量发现:试验组的蛋白表达量都高于对照组,其中AdipoQ蛋白表达量是随着RES添加量的增加而升高,400mg/kg组和600mg/kg组的AdipoR1、AMPKα、PGC-1α的蛋白表达量均显著高于对照组,与上述荧光定量结果一致。由此可看出,RES能够上调AdipoQ信号通路上关键基因的表达,其中,400mg/kg和600mg/kg组调控效果最为明显。3、细胞水平研究RES通过AdipoQ信号通路调控肌纤维类型基因表达的作用机制(1)利用pLV-AdipoQ重组慢病毒质粒转染猪骨骼肌卫星细胞,结果显示,过表达AdipoQ基因后,AdipoR1、AdipoR2、AMPKα1、AMPKα2、PGC-1α、SIRT1基因的表达均显着上升。(2)用AdipoR1-shRNA慢病毒感染猪骨骼肌卫星细胞,结果显示,干扰AdipoR1基因后,AdipoR1、AMPKα1、AMPKα2、PGC-1α、SIRT1均具有下降趋势,AdipoQ、AdipoR2无明显变化。以上结果说明,AdipoQ是与其受体1结合,调控下游基因AMPKα1、AMPKα2、SIRT1、PGC-1α的表达。(3)RES干预猪骨骼肌卫星细胞并诱导分化的试验结果显示,RES干预后,AdipoR1、AdipoR2、AMPKα1、AMPKα2、PGC-1α、SIRT1、MyHC1、MyHC2α 基因的表达水平均显着上升,MyHC2b基因表达水平显着下降。由此说明,RES具有通过上调AdipoQ信号通路调控肌纤维类型从酵解型向氧化型转化的作用。综合体内和体外实验结果表明,RES激活AdipoQ-AdipoR1-AMPK-SIRT1-PGC-1α信号通路,调控猪骨骼肌肌纤维类型从酵解型向氧化型转变,达到改善猪肉品质的作用。在杜长大猪肥育期65kg-110kg体重阶段,综合考虑改善猪肉品质的最佳效果及最低饲养成本,日粮中RES的适宜添加量为400mg/kg。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
肌纤维转化类型论文参考文献
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