导读:本文包含了甲基营养菌论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:纸层析-分光光度法,L-丝氨酸,甲基营养菌,检测
甲基营养菌论文文献综述
张建云,谷立坤,崔芽芽,韩梦霞,彭更[1]（2019）在《利用纸层析-分光光度法检测甲基营养菌5222产L-丝氨酸》一文中研究指出该研究旨在建立一种准确、简便的检测L-丝氨酸含量的方法。当纸层析-分光光度法展开剂为丙酮∶正丁醇∶二乙胺∶水(10∶10∶2∶5,V/V),pH值为12.7,波长为510 nm,洗脱时间为30 min时,能很好的对L-丝氨酸进行定性、定量检测。当L-丝氨酸标准溶液质量浓度在1～6μg/mL时,L-丝氨酸的含量(x)与吸光度值(y)之间有良好的线性相关关系(回归方程y=0.008 8x+0.008 9,R~2=0.996 2);精密度实验结果显示相对标准偏差(RSD)为2.3%;回收率实验结果显示平均加标回收率95.3%,RSD为2.6%。说明该方法具有较高的精密度和准确度。以甲基营养型菌(Methylobacterium sp.)5222为出发菌株,以甘氨酸为前体物质发酵生产L-丝氨酸,应用该研究建立的纸层析-分光光度法,检测到发酵液中L-丝氨酸含量为0.90 g/L,说明菌株5222具有产L-丝氨酸的能力。(本文来源于《中国酿造》期刊2019年11期）
朱丽萍,刘聪聪,宋书真,刁斌[2]（2019）在《甲基营养菌Methylobacterium extorquens AM1中最适荧光蛋白报告基因的鉴定》一文中研究指出近年来荧光蛋白成为基因工程中常用的遗传标记,详尽解读不同荧光蛋白基因在甲基营养菌中的表达可以鉴定最适的荧光报告基因。克隆了常用的绿色荧光蛋白eGFP、红色荧光蛋白mCherry、黄色荧光蛋白YFP以及其他来源的绿色荧光蛋白wGFP和红色荧光蛋白RFP共5种荧光基因,构建相应的表达载体并在甲基营养菌Methylobacterium extorquens AM1中进行表达。通过荧光成像观察和SDS-PAGE蛋白凝胶电泳进行荧光蛋白表达鉴定。通过细菌生长曲线、荧光总量和相对荧光强度的测定,进行荧光稳定性和表达强度的鉴定。结果在转化子中均检测到目的荧光蛋白条带,但RFP荧光表达量痕量且未检测到荧光成像;稳定性最强和相对荧光强度最高的是YFP,是常用eGFP的1.6倍,mCherry的3.4倍。在M. extorquens AM1中最适荧光蛋白为YFP。(本文来源于《生物技术通报》期刊2019年04期）
邹琪琪,齐姗姗,谢录翰,辛琪,李俊乐[3]（2018）在《细菌单杂交方法在筛选甲基营养菌甲醇脱氢酶启动子结合蛋白中的应用》一文中研究指出为了构建甲基营养菌转录因子亚文库及筛选与甲醇脱氢酶启动子DNA相互作用的蛋白质,对甲基营养菌MP688的基因组和转录组数据进行分析,使用关键词对全基因注释信息和转录组结果进行搜索,找到相关基因的核苷酸序列,通过PCR获得目的片段并构建一系列转录因子亚文库,利用细菌单杂交系统筛选转录因子亚文库找到与甲醇脱氢酶启动子具有相互作用的调控因子。成功构建完成含有32个转录因子的亚文库,建立了甲基营养菌中细菌单杂交筛选方法,通过该方法筛选出2个与甲醇脱氢酶启动子具有强相互作用的转录因子基因。对于基因组已测序的细菌来说,构建转录因子亚文库筛选效率要优于构建基因组文库和c DNA文库,细菌单杂交系统能成功用于甲基营养菌,并能快速高效地筛选与启动子具有相互作用的转录因子。这一方法的建立,为阐明甲醇脱氢酶在甲基菌生长和代谢产物合成中的调控机制奠定了基础。(本文来源于《浙江农业学报》期刊2018年10期）
杨靖,陈文静,张敏,袁肖杰,杨益明[4]（2017）在《甲基营养菌代谢网络途径和代谢工程改造的研究进展》一文中研究指出一碳化合物(甲醇或甲烷)高值化转化是当前生物工程领域的重要研究热点。甲基营养菌是一类以甲醇为碳源和能源生长的革兰氏阴性菌,随着基因组测序的开展和各类组学技术的发展,以扭脱甲基杆菌为代表的甲基营养菌的中心代谢网络途径和相关功能基因逐渐明晰。近年来,甲基营养菌中包括基因过表达、基因敲除整合等遗传操作工具的完善以及各种基因调控元件的开发,为甲基营养菌的底盘改造和异源途径优化表达提供了重要基础,国内外的研究推动了甲醇转化成多种高附加值产品。此外,人们渴望利用传统基因工程菌作为底盘构建合成型甲基菌,以期更高效实现甲醇催化转化。本文中,笔者综述了目前甲基营养菌,尤其是扭脱甲基杆菌的代谢网络特点、代谢工程改造策略与应用以及构建合成型甲基细菌这3个方面的研究进展,以期为甲基微生物催化转化的研究提供借鉴。(本文来源于《生物加工过程》期刊2017年06期）
章芸,杨修亮,司振军,蔡谨,黄磊[5]（2015）在《海洋甲基营养菌产吡咯喹啉醌(PQQ)的发酵条件优化及产物分离》一文中研究指出从中国南海海泥中分离得到一株甲基营养菌ZJU414,能够用于生产辅酶PQQ。然后考察了4种碳源对其生长和产物合成的影响,结果表明甲醇作为其唯一碳源时PQQ产量最高。通过考察摇瓶装液量和优化甲醇浓度和甲醇补料方式,进一步提高PQQ产量,最高可达到1134μg/L。初步比较了7种不同阴离子交换树脂对PQQ的吸附和洗脱效率,发现树脂D316具有较高的吸附率和洗脱率,可以用于PQQ的离子交换分离,得率可达到86.5%。研究结果为进一步提高海洋甲基营养菌生产PQQ的工艺开发奠定了较好基础。(本文来源于《食品科技》期刊2015年08期）
李大攀,葛欣,魏静远,熊向华,汪建华[6]（2014）在《甲基营养菌MP688甲醇脱氢酶基因mpq1818的敲除及功能研究》一文中研究指出目的:研究甲醇脱氢酶基因mpq1818在甲基营养菌MP688生长代谢中的作用。方法:利用同源重组原理构建中间为庆大霉素抗性基因Gmr、两侧mpq1818基因上下游序列同源的敲除载体pAK0-up-Gmr-down,接合转移导入MP688,通过庆大霉素抗性和组合PCR方法筛选基因敲除菌,并检测其生长、甲醇脱氢酶活性、甲醇利用及吡咯喹啉醌(PQQ)生物合成能力等方面的差异。结果:抗性和PCR验证显示mpq1818缺失株构建成功;与野生菌相比,缺失株的甲醇脱氢酶活力及利用甲醇的能力降低,而且菌株的生长和PQQ产量也有显着下降。结论:基因mpq1818的缺失影响菌株前期生长与PQQ合成。(本文来源于《生物技术通讯》期刊2014年05期）
韩月梅,葛欣,王鹤,熊向华,汪建华[7]（2014）在《通过转座诱变筛选甲基营养菌吡咯喹啉醌合成缺陷突变株》一文中研究指出目的:对电转化等Tn5转座诱变条件进行优化,获得大量甲基营养菌MP688突变株,筛选吡咯喹啉醌(PQQ)合成缺陷突变株,并对失活基因进行鉴定。方法:通过电击方法对MP688株进行Tn5转座诱变;通过检测PQQ产量,选择不产或几乎不产PQQ的突变株,用质粒拯救的方法鉴定突变基因。结果和结论:确定了MP688株电击转化的最优条件,优化了质粒拯救法鉴定突变基因的实验方案,得到了1株PQQ合成明显降低的突变株RM16,并确定了转座子在染色体上的插入位点。(本文来源于《生物技术通讯》期刊2014年05期）
蒋琼,马晟,周侃,李献,唐咸来[8]（2014）在《甲基营养菌M.sp.MB200中serA基因功能初探》一文中研究指出serA基因编码3-磷酸甘油酸脱氢酶(PGDH),此酶在合成L-丝氨酸的第一步起催化作用。利用质粒pCM80分别与野生型基因serA、缺失了C末端ACT功能域的突变基因serA△77构建了重组体表达菌MB200/pCM80serA和MB200/pCM80serA△77。通过分析发现野生型基因重组表达菌的PGDH酶活受L-丝氨酸浓度影响较大,当反应体系中的L-丝氨酸浓度为40μmol/L时,酶活减少了约1/3;缺失了ACT功能域的基因表达菌的PGDH酶活基本不变,不受L-丝氨酸浓度的影响。进一步在静息细胞反应条件下,对重组菌和野生菌株MB200进行发酵产L-丝氨酸的研究,实验发现MB200/pCM80serA产L-丝氨酸的量为13.6mg/mL,MB200/pCM80serA△77产L-丝氨酸的量为16.8 mg/mL,而野生型菌株M.sp MB200的产量为6.4 mg/mL,重组菌的L-丝氨酸产量都有所提高,且MB200/pCM80serA△77的产量提高更多。结果证实了甲基营养菌MB200中serA基因与产L-丝氨酸具有反馈抑制关系,为进一步解除反馈抑制并发酵产L-丝氨酸奠定了基础。(本文来源于《基因组学与应用生物学》期刊2014年03期）
马晟[9]（2014）在《甲基营养菌MB200中与L-丝氨酸反馈抑制相关的serA基因研究》一文中研究指出甲基营养菌能够利用单碳化合物作为唯一碳源和能源进行生长代谢,已有相关研究报道该类细菌能够利用廉价的低碳化合物生产高价值的代谢产物,包括L-丝氨酸。L-丝氨酸的用途广泛,研究通过微生物发酵生产L-丝氨酸并提高其产量具有重要意义。在氨基酸发酵生产中,解除产物的反馈抑制是提高产物产量的重要手段之一。3-磷酸甘油酸脱氢酶(3-PGDH)催化L-丝氨酸生物合成的第一步反应,也是该合成途径的限速反应；其活性受到该途径终产物L-丝氨酸反馈抑制调控。通过分子改造得到解除反馈抑制效应的突变体酶有利于L-丝氨酸的积累。本实验室前期工作对L-丝氨酸耐受性突变体进行筛选并克隆到编码3-PGDH的serA基因。本研究利用生物信息学预测,并参考文献,预测3-PGDH碳端调控区的His360、Asn362、Asn380叁个氨基酸残基位点是L-丝氨酸结合关键位点。通过丙氨酸扫描法进行定点突变,研究突变酶的L-丝氨酸反馈抑制效应,以期鉴定出L-丝氨酸与3-PGDH结合关键位点。通过丙氨酸替换突变位点,构建了突变酶S1(H360A)、S2(N362A)、S3(N380A)、S4(H360A/N362A)、S5(N362A/N380A)、S6(H360A/N380A)、 S7(H360A/N362A/N380A)。在BL21(DE3)-pET-30a (+)表达系统中诱导表达,诱导条件为：温度20℃、IPTG终浓度0.25mM,时间20h,转速120rpm。在非变性条件下,利用NTA-镍离子螯合亲和层析柱纯化蛋白酶。发现蛋白酶S1(H360A)、S2(N362A)、S3(N380A)几乎完全解除了L-丝氨酸反馈抑制作用,且它们的酶活性降低(分别为野生型的52%,61%,62%)；蛋白酶S4(H360A/N362A)的L-丝氨酸反馈抑制作用无明显解除,但酶活性降低(为野生型的79%)；突变酶S5(N362A/N380A)、S6(H360A/N380A)及S7(H360A/N362A/N380A)则失去酶催化活性。结论：甲基营养菌MB200中3-磷酸甘油酸脱氢酶调控区His360、Asn362、Asn380叁个氨基酸残基与其L-丝氨酸反馈抑制作用相关,且与酶催化活性有关。(本文来源于《广西大学》期刊2014-05-01）
王文溪,葛欣,韩月梅,熊向华,汪建华[10]（2013）在《甲基营养菌MP688葡萄糖脱氢酶基因分离鉴定及性质研究》一文中研究指出目的:鉴定甲基营养菌MP688中的葡萄糖脱氢酶基因。方法:对甲基营养菌MP688基因组序列进行比对和分析,找到与已知细菌葡萄糖脱氢酶同源性最高的基因序列mpq_2164,且该基因所编码蛋白经分析具有跨膜结构域。设计引物扩增mpq_2164和缺失跨膜区域序列的s-mpq_2164,将PCR产物克隆到表达载体pET-15b上,在大肠杆菌BL21中完成异源重组表达,然后通过组氨酸标签镍柱亲和层析纯化,采用DCIP法测定葡萄糖脱氢酶的活力。结果:分离了甲基营养菌MP688中的葡糖糖脱氢酶基因,并实现了s-mpq_2164的高效异源重组表达;MPQ_2164的氨基酸序列与已知的葡萄糖脱氢酶相似性很低,但酶活测定结果表明S-MPQ_2164具有很高的葡糖糖脱氢酶活性。结论:MPQ_2164是一个依赖于吡咯喹啉醌的葡萄糖脱氢酶,去掉跨膜结构域有利于该蛋白的异源表达。(本文来源于《生物技术通讯》期刊2013年06期）
甲基营养菌论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
近年来荧光蛋白成为基因工程中常用的遗传标记,详尽解读不同荧光蛋白基因在甲基营养菌中的表达可以鉴定最适的荧光报告基因。克隆了常用的绿色荧光蛋白eGFP、红色荧光蛋白mCherry、黄色荧光蛋白YFP以及其他来源的绿色荧光蛋白wGFP和红色荧光蛋白RFP共5种荧光基因,构建相应的表达载体并在甲基营养菌Methylobacterium extorquens AM1中进行表达。通过荧光成像观察和SDS-PAGE蛋白凝胶电泳进行荧光蛋白表达鉴定。通过细菌生长曲线、荧光总量和相对荧光强度的测定,进行荧光稳定性和表达强度的鉴定。结果在转化子中均检测到目的荧光蛋白条带,但RFP荧光表达量痕量且未检测到荧光成像;稳定性最强和相对荧光强度最高的是YFP,是常用eGFP的1.6倍,mCherry的3.4倍。在M. extorquens AM1中最适荧光蛋白为YFP。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
甲基营养菌论文参考文献
[1].张建云,谷立坤,崔芽芽,韩梦霞,彭更.利用纸层析-分光光度法检测甲基营养菌5222产L-丝氨酸[J].中国酿造.2019
[2].朱丽萍,刘聪聪,宋书真,刁斌.甲基营养菌MethylobacteriumextorquensAM1中最适荧光蛋白报告基因的鉴定[J].生物技术通报.2019
[3].邹琪琪,齐姗姗,谢录翰,辛琪,李俊乐.细菌单杂交方法在筛选甲基营养菌甲醇脱氢酶启动子结合蛋白中的应用[J].浙江农业学报.2018
[4].杨靖,陈文静,张敏,袁肖杰,杨益明.甲基营养菌代谢网络途径和代谢工程改造的研究进展[J].生物加工过程.2017
[5].章芸,杨修亮,司振军,蔡谨,黄磊.海洋甲基营养菌产吡咯喹啉醌(PQQ)的发酵条件优化及产物分离[J].食品科技.2015
[6].李大攀,葛欣,魏静远,熊向华,汪建华.甲基营养菌MP688甲醇脱氢酶基因mpq1818的敲除及功能研究[J].生物技术通讯.2014
[7].韩月梅,葛欣,王鹤,熊向华,汪建华.通过转座诱变筛选甲基营养菌吡咯喹啉醌合成缺陷突变株[J].生物技术通讯.2014
[8].蒋琼,马晟,周侃,李献,唐咸来.甲基营养菌M.sp.MB200中serA基因功能初探[J].基因组学与应用生物学.2014
[9].马晟.甲基营养菌MB200中与L-丝氨酸反馈抑制相关的serA基因研究[D].广西大学.2014
[10].王文溪,葛欣,韩月梅,熊向华,汪建华.甲基营养菌MP688葡萄糖脱氢酶基因分离鉴定及性质研究[J].生物技术通讯.2013