导读:本文包含了自发放电论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:苍白球,生理学,丘脑,离子,神经肽,中缝,通道。
自发放电论文文献综述
李华,刘丽娜,魏华,许晴,薛奋勤[1]（2019）在《MED64平面微电极阵列技术记录小鼠海马脑片自发放电》一文中研究指出目的:验证MED64系统记录小鼠海马脑片自发放电方法可行性,以及观察平面微电极阵列技术应用于抑郁,帕金森,癫痫等研究的优势。方法:通过MED64系统对正常以及由低镁高钾加4-AP诱导的小鼠海马脑片进行记录,运用Mobius软件进行数据分析。结果:正常ACSF灌注记录到成年小鼠海马脑片神经元自发放电改用4-AP+低镁高钾ACSF灌注8min左右后小鼠海马脑片呈现癫痫样放电。换回正常ACSF洗脱30min后脑片放电恢复正常,癫痫样放电逐渐消失。结论:MED64平面微电极阵列技术可以记录小鼠海马脑片神经元自发放电,运用该技术成功建立了小鼠海马脑片癫痫模型。(本文来源于《中国医疗器械信息》期刊2019年19期）
王英姿[2]（2019）在《苯肾上腺素诱导中缝背核5-HT神经元自发放电的离子通道机制》一文中研究指出5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)能神经元胞体主要聚集于中缝背核(Dorsal raphe nucleus,DRN)区,其主要参与调节各种生理和行为功能,包括情绪及其相关行为。许多研究结果表明,DRN区5-HT神经元的异常活动与精神疾病有关,如重度抑郁症(MDD)和焦虑症等。长期处于压力环境中所引发的紧张、恐惧和焦虑情绪会导致5-HT神经元兴奋性的增加,且DRN附近的5-HT水平也随之增加。因此,调控DRN区5-HT神经元的兴奋性对维持神经系统的稳态至关重要。DRN区5-HT神经元活动受多种离子通道和膜受体的调控,如:G蛋白调控的内向整流钾通道(GIRK)、钙激活钾通道(如SK3)、双孔钾通道(如TREK1)、5-HT_(1A)受体、GABA_B受体及α1受体等。它们都可以调节5-HT能神经元的兴奋性,但对DRN区5-HT神经元放电模式的影响和调控机制尚未完全清楚。有研究发现钾离子通道,如SK通道、TREK1通道和GIRK通道,在控制神经元内在活动中起着重要作用,并且调节这些通道可以减轻情绪障碍。例如,社会隔离小鼠的5-HT神经元上SK3通道表达上调,导致5-HT神经元兴奋性降低,阻断SK3通道可以使5-HT神经元兴奋性恢复正常,同时缓解社会隔离小鼠的抑郁样行为。类似地,阻断TREK1通道会显着增加DRN区5-HT神经元的放电频率,并在抑郁症的大鼠模型中诱导显着的抗抑郁样反应。敲除或阻断DRN区GIRK2通道可促进抑郁症表型等等。在体记录结果显示,动物在清醒状态时,DRN区5-HT能神经元呈现两种放电模式:张力性放电和簇状放电;而在麻醉状态时,动物DRN区5-HT能神经元只表现为张力性放电,呈现缓慢且规律的放电模式,放电频率在0.5-3Hz,这被描述为类似心脏起搏的一种放电模式。虽然在在体记录模式下可以记录到DRN区5-HT神经元的自发放电活动,但其自发放电可能并不是源于5-HT神经元本身内在的起搏驱动,而是需要其它外源性神经元投射的兴奋性刺激,其中来自蓝斑(Locus coeruleus,LC)的去甲肾上腺素能输入可能发挥主要作用。与此一致,在离体脑片中,DRN区5-HT神经元是沉默的,但α1-肾上腺素能激动剂如苯肾上腺素(Phenylephrine,PE)可以触发5-HT神经元自发放电。目前,对苯肾上腺素/α1受体触发5-HT神经元自发放电的机制尚不很清楚,有文献表明,PE可以通过抑制A型钾通道,进而诱导DRN区5-HT神经元的起搏活动,是否存在其它调节机制则不得而知。在本研究中,通过脑片钳技术及单细胞PCR技术,我们发现,PE通过激活DRN区5-HT神经元上的α1受体,抑制A型钾通道和钙激活钾通道,进而诱发DRN区5-HT神经元的自发放电。第一部分A型钾通道在苯肾上腺素诱导DRN区5-HT神经元自发放电中的作用目的:观察A型钾通道在苯肾上腺素(PE)诱导DRN区5-HT神经元自发放电中的作用方法:1.利用全细胞脑片膜片钳和贴附式脑片膜片钳技术,观察PE对DRN区5-HT神经元的A型钾电流的影响,以及A型钾通道阻断剂对DRN区5-HT神经元放电的影响。2.利用单细胞PCR技术,观察A型钾通道亚型在DRN区5-HT能神经元的表达。结果:1.在小鼠DRN区5-HT神经元,利用贴附式(loose-cell-attached)脑片膜片钳记录神经元放电,发现α1受体激动剂PE(10μΜ)可以诱发DRN 5-HT神经元呈现出缓慢(<5Hz)、规律(clock-like)的放电。2.在小鼠DRN区5-HT神经元,利用全细胞脑片膜片钳技术,在-20mV电压下可以记录到典型的瞬时外向电流(A型钾电流)。这种电流可被PE(α1受体激动剂,10μM)所阻断,从初始电流1409.1±134.3 pA降低至1087.6±117.8 pA(n=6,P<0.001);应用prazosin(α1受体阻断剂,5μM)可逆转PE的上述作用(n=6,P<0.05)。3.在贴附式脑片膜片钳记录模式下,A型钾通道阻断剂4-AP(500μM)可以诱发小鼠DRN区5-HT神经元放电,继续给予PE(10μM)后,放电频率从0.6±0.2 Hz增加至1.4±0.3 Hz(n=5,P<0.01),差别具有统计学意义。4.单细胞PCR结果显示,A型钾通道亚型Kv4.2和Kv4.3通道高度表达于中缝背核腹侧区域(dorsal ventral part,DRV)的5-HT能神经元。结论:1.PE通过α1受体诱发DRN区5-HT神经元自发放电。2.A型钾通道亚型Kv4.2和Kv4.3通道高度表达于DRN腹侧区域的5-HT能神经元。3.DRN 5-HT能神经元能够记录到A型钾电流,可能主要由Kv4.2和Kv4.3构成;PE能够抑制DRN 5-HT能神经元A型钾电流。4.A型钾通道阻断剂4-AP诱发DRN区5-HT神经元产生自发放电的频率与PE诱发其产生自发放电的频率具有统计学差异,说明A型钾通道可能参与调节PE诱导DRN区5-HT神经元的放电过程,但除此之外,仍有其他的靶点参与其放电过程。第二部分SK通道在苯肾上腺素诱导DRN区5-HT神经元自发放电中的作用目的:观察SK通道在苯肾上腺素(PE)诱导DRN区5-HT神经元自发放电中的作用方法:1.利用全细胞脑片膜片钳和贴附式脑片膜片钳技术,观察PE对DRN区5-HT神经元的SK电流的影响,以及SK通道阻断剂对DRN区5-HT神经元自发放电的影响。2.利用单细胞PCR技术,观察SK通道亚型在DRN区5-HT能神经元的表达。结果:1.单细胞PCR结果显示,SK通道亚型SK2和SK3通道高度表达于DRN区的5-HT能神经元。2.利用全细胞电压钳制膜片钳技术,发现PE(10μM)可以显着抑制DRN区5-HT神经元上的SK电流,从初始电流44.7±1.3 pA降低至25.6±7.8 pA(n=6,P<0.05)。3.在贴附式脑片膜片钳记录模式下,SK通道阻断剂apamin(100 nM)可以诱发DRN区5-HT神经元放电,继续给予4-AP(500μΜ)后,放电频率从0.1±0.04 Hz增加至0.9±0.3 Hz(n=8,P<0.05),且其放电模式向burst放电模式转化;在同时阻断SK通道与A型钾通道的情况下,继续给予PE,其对DRN区5-HT神经元的放电频率无影响(从0.9±0.3 Hz到1.1±0.3 Hz,n=8,P>0.05)。4.在小鼠的DRN区5-HT神经元,利用电流钳膜片钳技术,记录细胞外钙对神经元膜电位的影响,发现去除细胞外钙(零钙)可以诱发神经元的自发放电。此外,HCN通道阻断剂ZD7288对零钙诱发的DRN区5-HT神经元的自发放电无影响。零钙使DRN区5-HT神经元细胞膜电位明显去极化,膜电位从-66.2±1.7 mV去极化至-49.7±0.9 mV(n=6,P<0.001)。结论:1.SK通道亚型SK2和SK3通道高度表达于DRN区的5-HT能神经元。2.在小鼠的DRN区5-HT神经元中,细胞外零钙使DRN区5-HT神经元膜电位明显去极化,且可以诱发DRN区5-HT神经元的自发放电。3.除A型钾通道外,SK通道在调节PE诱导DRN区5-HT神经元自发放电中可能也发挥重要作用。4.SK通道和A型钾通道共同参与DRN区5-HT神经元自发及burst放电。(本文来源于《河北医科大学》期刊2019-03-01）
李永丰,任维[3]（2018）在《外周神经压迫性损伤引起损伤区自发放电的研究概述》一文中研究指出坐骨神经慢性压迫损伤模型是神经病理性疼痛疾病动物模型的典型代表,其中损伤区产生节律丰富的自发放电和异位电活动,传入大脑皮层感觉中枢,是造成神经病理性疼痛的主要原因之一。因此研究神经损伤区自发放电的特点对于探索神经病理性疼痛的发生机理具有重要意义。本文基于坐骨神经慢性压迫损伤模型,从神经节律编码、损伤区丰富多样的放电节律以及节律间复杂的转迁模式几个方面对外周损伤区自发放电进行概述并对外周疼痛的治疗进行展望。(本文来源于《中国疼痛医学杂志》期刊2018年12期）
王英,薛雁,陈蕾[4]（2018）在《Orexin-B对正常大鼠苍白球神经元自发放电及运动行为的影响》一文中研究指出目的探究orexin-B对正常大鼠苍白球神经元自发放电及运动行为的影响。方法分别采用体内细胞外电生理记录和提升躯体摇摆实验(EBST)等方法,观察苍白球给予orexin-B后其神经元自发放电以及大鼠运动行为的变化。结果在苍白球记录的18个基础放电频率为(18.34±2.07)Hz的神经元,微压力给予orexin-B可使其中15个神经元的放电频率增加(22.06±3.65)%(t=5.35,P<0.01),orexin-B对自发放电频率的兴奋效应与生理盐水对照组相比差异有统计学意义(z=4.286,P<0.01)。EBST显示单侧苍白球微量注射orexin-B可使大鼠发生明显的对侧偏转,与生理盐水对照组相比差异有统计学意义(z=2.098,P<0.05)。结论 Orexin-B可明显兴奋正常大鼠苍白球神经元,进而参与大鼠运动行为的调控。(本文来源于《青岛大学学报(医学版)》期刊2018年01期）
余蕾,赵雪红,樊小力,曹健[5]（2018）在《细胞外液钙离子浓度的改变对大鼠比目鱼肌离体单一肌梭自发放电的影响》一文中研究指出观察了含有不同钙离子浓度的细胞外液对大鼠离体单一比目鱼肌肌梭自发放电的影响。实验分为低钙改良任氏液组和高钙改良任氏液组,首先采用空气隔绝法记录大鼠离体单一比目鱼肌肌梭自发放电情况,然后分别以相应改良任氏液灌流肌梭,并记录其自发放电和氯化琥珀胆碱所致的诱发放电的情况。给予低钙改良任氏液灌流肌梭后,其自发放电频率增加(P<0.01),自发放电的周期间隔缩短(P<0.01),给予氯化琥珀胆碱后诱发放电未见明显增加;给予高钙改良任氏液灌流肌梭后,其自发放电频率减少(P<0.01),自发放电的周期间隔延长(P<0.05),给予氯化琥珀胆碱后诱发放电未见明显增加。提示含有较低钙离子浓度的细胞外液可增加大鼠离体单一比目鱼肌肌梭自发放电,含有较高钙离子浓度的细胞外液可抑制该肌梭自发放电。为大鼠肌梭生理的研究及钙离子与失重性肌萎缩的实验研究提供了有意义的资料。(本文来源于《生物学杂志》期刊2018年02期）
田飞,刘春娜,刘新宇,陈秋元,丁宇豪[6]（2017）在《神经肽优洛可定对丘脑底核神经元自发放电影响与CRF-2R关系研究》一文中研究指出目的研究神经内分泌生物活性肽优洛可定(urocortin,UCN)对丘脑底核(subthalamic nucleus,STN)神经元放电及STN中多巴胺(dopamine,DA)能、谷氨酸(glutamic acid,GLU)能神经传递的影响,研究UCN在STN中是否与GLU及DA存在汇聚作用,探讨UCN在帕金森疾病(Parkinson’s disease,PD)发生中可能发挥的作用。方法取40只SD大鼠,采用神经电生理实验方法中的微电泳技术,在微电泳UCN过程中,观察STN神经元放电的波形及频率变化,同时,微电泳Astressin(AST)及蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)抑制剂,观察促皮质素释放因子2型受体(corticotropin releasing factor 2 receptor,CRF-2R)是否参与UCN对STN神经元放电的影响。另外,在微电泳DA和GLU过程中,给予UCN及AST,观察STN神经元放电的变化,明确是否存在DA能及GLU能与UCN的交汇作用。结果微电泳UCN过程中,82%(27/33)STN神经元频率减慢。STN平均放电频率由(3.65±0.27)Hz减少到(2.05±0.33)Hz,微电泳UCN前、后STN放电频率明显降低(P<0.01)。另外,UCN抑制作用可被AST明显拮抗(P<0.01),UCN抑制作用也可被PKA阻断剂部分阻断。在微电泳抑制性神经递质DA和兴奋性GLU过程中,UCN能进一步协同DA的抑制效应,并明显拮抗GLU的兴奋作用(P<0.01)。结论 UCN与DA能及GLU能在STN神经元中存在汇聚作用,UCN可能是通过与CRF-2R结合,进而通过PKA信号通路,影响DA能、GLU能神经递质活动,抑制STN神经元放电。(本文来源于《中国药理学通报》期刊2017年10期）
陈安琪,薛雁,刁汇玲,陈蕾[7]（2017）在《5-羟色胺对小鼠苍白球神经元自发放电的调控作用》一文中研究指出目的探讨5-羟色胺(5-HT)对正常小鼠苍白球神经元自发放电的影响。方法将8只小鼠随机分为两组,每组4只,对照组苍白球微压力注射生理盐水,实验组苍白球微压力注射5-HT。采用细胞外电生理学记录的方法,观察两组小鼠注射前后苍白球神经元放电频率、自发放电间隔的变异系数(CV)和法诺因子(FF)的变化。结果实验组记录到15个苍白球神经元放电,其平均放电频率为(6.16±0.93)Hz,CV为0.39±0.11;微量压力注射5-HT后,13个苍白球神经元的自发放电频率明显升高,与加药前比较,差异有显着性(t=2.95,P<0.05)。与对照组比较,实验组加药后放电频率明显升高,差异有显着性(Z=2.94,P<0.01)。实验组苍白球神经元呈现两种放电模式,其中5个(33.33%)呈规则放电,10个(66.67%)呈不规则放电。微压力注射5-HT和生理盐水对CV值和FF值无明显影响(P>0.05)。结论 5-HT可以兴奋正常小鼠苍白球神经元。(本文来源于《青岛大学医学院学报》期刊2017年02期）
盛晴,薛雁,刁汇玲,陈蕾[8]（2017）在《Orexin-B对大鼠丘脑底核神经元自发放电及运动行为影响》一文中研究指出目的探讨orexin-B对正常大鼠丘脑底核神经元自发放电及运动行为的影响。方法应用在体电生理细胞外记录的方法观察orexin-B对大鼠丘脑底核神经元自发放电频率的影响,并采用提升躯体摇摆实验(EBST)观察丘脑底核微量注射orexin-B后大鼠运动行为随时间变化。结果大鼠丘脑底核微压力注射orexin-B,神经元放电频率平均升高(96.85±17.42)%(t=10.242,P<0.01),与生理盐水对照组的细胞反应百分数比较差异有极显着性(Z=-4.157,P<0.01)。EBST结果显示,单侧丘脑底核微量注射orexin-B引起大鼠向对侧摇摆,两组在观察的30、45s向对侧偏转的频率比较,差异有显着性(F=80.35,t=13.42、21.54,P<0.01)。结论 Orexin-B可提高正常大鼠丘脑底核神经元兴奋性,提示orexin-B可能通过基底神经节间接通路参与大鼠运动行为调控。(本文来源于《青岛大学医学院学报》期刊2017年01期）
朱再满,华田苗,潘群皖,李晶,李敏[9]（2017）在《纳洛酮对海洛因依赖位置偏爱系统大鼠戒断症状及伏隔核自发放电的影响》一文中研究指出目的研究纳洛酮对海洛因诱导条件性位置偏爱系统(CPP)大鼠戒断症状和伏隔核自发放电活动的影响。方法通过立体定位,向大鼠伏隔核埋藏电极,建立海洛因依赖大鼠模型。自然戒断4 d后,注射纳洛酮0.5 mg·kg-1,对戒断症状进行评价。分别于给药前、给药后即刻、戒断状态下,用无线遥测大鼠伏隔核神经元放电活动,分析伏隔核神经元自发放电0.5~30 Hz的频率分布,并与纳洛酮激惹后自发脑电比较。结果以CPP系统建立海洛因依赖模型有效,大鼠戒断症状明显,呈动态变化。大鼠均能产生海洛因药物依赖,可视性戒断症状在戒断第2天表现最为显着,大鼠戒断后2 d的戒断症状评分最高为(6.6±1.7)分;纳洛酮激惹后的戒断症状尤为显着,评分最高为(7.2±1.3)分,较建模前比较,差异有统计学意义(均P<0.01)。且大鼠伏隔核自发放电δ波比例均最大,β1波比例最小,且不同频段脑电的分布梯度相同。与即刻状态的低频脑电δ波为(45.58±7.80)%、θ波为(22.67±3.37)%相比,激惹状态下的低频脑电δ波为(38.58±5.76)%、θ波为(18.75±3.31)%,差异有统计学意义(P<0.05)。与即刻状态的高频脑电(β_1波、β_2波)分别为(7.50±2.28)%,(10.17±3.33)%相比,激惹状态下的高频脑电(β_1波、β_2波)分别为(11.00±1.35)%,(16.50±2.15)%,差异有统计学意义(均P<0.01)。纳洛酮激惹后,脑电能量状态与海洛因给药后即刻状态差异最大,与海洛因给药前差异最小。结论纳洛酮可以激发海洛因依赖大鼠戒断症状,并对大鼠伏隔核电生理特性有显着影响,提示纳洛酮影响了药物依赖大鼠伏隔核的脑电能量状态。(本文来源于《中国临床药理学杂志》期刊2017年05期）
陈心怡[10]（2017）在《Orexin-A对海马CA1区神经元自发放电的影响及机制探讨》一文中研究指出Orexins(又称 hypocretin)是下丘脑神经肽,包括 orexin-A 和 orexin-B。Orexins受体有OX1和OX2两种亚型,属于G蛋白耦联受体。Orexin-A可与OX1受体及OX2受体结合且具有相似的亲和力,而orexin-B与OX2受体的亲和力远高于OX1。脑内orexin能神经元胞体集中分布在下丘脑外侧区和穹窿周围区,发出上行和下行纤维,参与调控觉醒和睡眠、能量代谢、摄食、神经内分泌和运动等多种功能活动。海马作为脑内边缘系统的主要组成部分,在学习、记忆及认知等高级神经活动中发挥重要作用。根据细胞形态及神经纤维通路的不同,海马又分为CA1、CA2、CA3和CA4等区域。形态学研究表明,海马接受下丘脑发出的orexin能纤维支配,并表达高水平的orexin受体。其中海马CA1和CA2区主要表达OX1受体,而CA3区主要表达OX2受体。早期行为学研究揭示,侧脑室注射orexin-A调节大鼠学习和记忆,阻断海马CA1区OX1受体可降低大鼠空间学习和记忆能力。然而,迄今为止,关于orexin对海马不同区域神经元自发放电的直接效应及其受体机制尚不十分清楚。目的:探讨orexin-A对海马CA1区神经元自发放电频率及模式的影响及其受体机制。方法:本实验采用多管微电极压力给药、在体细胞外单细胞放电记录、免疫组织化学等实验方法。雄性Wistar大鼠麻醉后固定于Narishige脑立体定位仪,根据脑图谱于海马CA1区(前囟后3.0-3.8 mm,旁开2.0-2.4 mm)行开颅手术。叁管玻璃微电极尖端直径3-10 μm,电阻10-20 MΩ,其中的记录电极加入含2%滂胺天蓝的0.5 M的乙酸钠溶液,其余两管分别加入不同的药物。记录的电信号经MEZ-8201放大器放大,由Spike2电生理数据分析软件分析单个神经元自发放电的频率和放电间隔的变异系数(coefficient of variation,CV)。采用成对t检验分析加药前后同一神经元自发放电频率和模式的变化,曼-惠特尼秩和检验用于比较两组间的差异,卡方检验用于比较不同放电模式与orexin反应神经元的相关性。结果:1.在大鼠海马CA1区记录的23个神经元中,微压力注射orexin-A(0.01mM)可使其中15个神经元的自发放电频率由 2.96±0.85 Hz 增加至 8.45±1.86 Hz(t=4.87,n=15,P<0.001)。Orexin-A平均增加放电频率411.78±125.46%,较生理盐水对照组(加药前:2.71±0.86Hz,生理盐水:2.55±0.87Hz;t=0.56,n=8,P=0.591)明显增强(Z=3.87,P<0.001)。Orexin-A对CA1区神经元的CV无明显影响(加药前:1.23±0.09,orexin-A:1.36±0.11;t=1.20,n=15,P=0.250)。2.在海马 CA1 区记录的 17 个神经元中,单独给予特异性OX1受体阻断剂SB-334867(0.1μM)可使其中7个神经元的放电频率由4.02±1.08Hz降至2.11±0.58Hz(t=2.68,n=7,P=0.036),表明内源性orexin调节海马CA1区神经元自发放电。而在另外10个神经元,给予特异性OX2受体阻断剂TCS-OX2-29(0.1μM)后其放电频率无明显改变(加药前:3.11±0.64Hz,TCS-OX2-29:3.07±0.71Hz;t=0.11,n=10,P=0.918);3.同时给予orexin-A及SB-334867可完全阻断orexin-A对CA1区神经元的兴奋效应。在9个CA1区神经元,同时加药使其放电频率由3.13±0.90 Hz变为3.08±0.79 Hz(t=0.09,n=9,P=0.928);4.应用 PLC 抑制剂 U73122 可完全阻断由 orexin-A所致的CA1区神经元的兴奋效应。在记录的8个orexin-A敏感神经元,加入U73122后再加入orexin-A可使放电频率由3.11±0.48 Hz改变至3.33±0.66 Hz(t=0.94,n=8,P=0.376),表明OX1受体通过PLC通路发挥其对海马CA1区神经元的兴奋效应;5.免疫组织化学染色结果表明,电生理实验记录大鼠的下丘脑外侧区表达orexin-A阳性神经元,而海马CA1区可见清晰的orexin-A阳性纤维支配。进一步免疫荧光双标记技术显示海马CA1区表达OX1受体,且OX1受体既表达在PV阴性海马神经元也表达在PV阳性的中间神经元。结论:本研究结果证实orexin-A通过OX1受体增加大鼠海马CA1区神经元的自发放电频率。内源性orexin通过OX1受体调控CA1区神经元自发放电。PLC信号通路参与激活OX1受体所致的CA1区神经元的兴奋效应。本实验结果为进一步探讨orexin在学习记忆中的作用及其与阿尔茨海默病的相关性提供了一定的理论和实验依据。(本文来源于《山东大学》期刊2017-03-15）
自发放电论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)能神经元胞体主要聚集于中缝背核(Dorsal raphe nucleus,DRN)区,其主要参与调节各种生理和行为功能,包括情绪及其相关行为。许多研究结果表明,DRN区5-HT神经元的异常活动与精神疾病有关,如重度抑郁症(MDD)和焦虑症等。长期处于压力环境中所引发的紧张、恐惧和焦虑情绪会导致5-HT神经元兴奋性的增加,且DRN附近的5-HT水平也随之增加。因此,调控DRN区5-HT神经元的兴奋性对维持神经系统的稳态至关重要。DRN区5-HT神经元活动受多种离子通道和膜受体的调控,如:G蛋白调控的内向整流钾通道(GIRK)、钙激活钾通道(如SK3)、双孔钾通道(如TREK1)、5-HT_(1A)受体、GABA_B受体及α1受体等。它们都可以调节5-HT能神经元的兴奋性,但对DRN区5-HT神经元放电模式的影响和调控机制尚未完全清楚。有研究发现钾离子通道,如SK通道、TREK1通道和GIRK通道,在控制神经元内在活动中起着重要作用,并且调节这些通道可以减轻情绪障碍。例如,社会隔离小鼠的5-HT神经元上SK3通道表达上调,导致5-HT神经元兴奋性降低,阻断SK3通道可以使5-HT神经元兴奋性恢复正常,同时缓解社会隔离小鼠的抑郁样行为。类似地,阻断TREK1通道会显着增加DRN区5-HT神经元的放电频率,并在抑郁症的大鼠模型中诱导显着的抗抑郁样反应。敲除或阻断DRN区GIRK2通道可促进抑郁症表型等等。在体记录结果显示,动物在清醒状态时,DRN区5-HT能神经元呈现两种放电模式:张力性放电和簇状放电;而在麻醉状态时,动物DRN区5-HT能神经元只表现为张力性放电,呈现缓慢且规律的放电模式,放电频率在0.5-3Hz,这被描述为类似心脏起搏的一种放电模式。虽然在在体记录模式下可以记录到DRN区5-HT神经元的自发放电活动,但其自发放电可能并不是源于5-HT神经元本身内在的起搏驱动,而是需要其它外源性神经元投射的兴奋性刺激,其中来自蓝斑(Locus coeruleus,LC)的去甲肾上腺素能输入可能发挥主要作用。与此一致,在离体脑片中,DRN区5-HT神经元是沉默的,但α1-肾上腺素能激动剂如苯肾上腺素(Phenylephrine,PE)可以触发5-HT神经元自发放电。目前,对苯肾上腺素/α1受体触发5-HT神经元自发放电的机制尚不很清楚,有文献表明,PE可以通过抑制A型钾通道,进而诱导DRN区5-HT神经元的起搏活动,是否存在其它调节机制则不得而知。在本研究中,通过脑片钳技术及单细胞PCR技术,我们发现,PE通过激活DRN区5-HT神经元上的α1受体,抑制A型钾通道和钙激活钾通道,进而诱发DRN区5-HT神经元的自发放电。第一部分A型钾通道在苯肾上腺素诱导DRN区5-HT神经元自发放电中的作用目的:观察A型钾通道在苯肾上腺素(PE)诱导DRN区5-HT神经元自发放电中的作用方法:1.利用全细胞脑片膜片钳和贴附式脑片膜片钳技术,观察PE对DRN区5-HT神经元的A型钾电流的影响,以及A型钾通道阻断剂对DRN区5-HT神经元放电的影响。2.利用单细胞PCR技术,观察A型钾通道亚型在DRN区5-HT能神经元的表达。结果:1.在小鼠DRN区5-HT神经元,利用贴附式(loose-cell-attached)脑片膜片钳记录神经元放电,发现α1受体激动剂PE(10μΜ)可以诱发DRN 5-HT神经元呈现出缓慢(<5Hz)、规律(clock-like)的放电。2.在小鼠DRN区5-HT神经元,利用全细胞脑片膜片钳技术,在-20mV电压下可以记录到典型的瞬时外向电流(A型钾电流)。这种电流可被PE(α1受体激动剂,10μM)所阻断,从初始电流1409.1±134.3 pA降低至1087.6±117.8 pA(n=6,P<0.001);应用prazosin(α1受体阻断剂,5μM)可逆转PE的上述作用(n=6,P<0.05)。3.在贴附式脑片膜片钳记录模式下,A型钾通道阻断剂4-AP(500μM)可以诱发小鼠DRN区5-HT神经元放电,继续给予PE(10μM)后,放电频率从0.6±0.2 Hz增加至1.4±0.3 Hz(n=5,P<0.01),差别具有统计学意义。4.单细胞PCR结果显示,A型钾通道亚型Kv4.2和Kv4.3通道高度表达于中缝背核腹侧区域(dorsal ventral part,DRV)的5-HT能神经元。结论:1.PE通过α1受体诱发DRN区5-HT神经元自发放电。2.A型钾通道亚型Kv4.2和Kv4.3通道高度表达于DRN腹侧区域的5-HT能神经元。3.DRN 5-HT能神经元能够记录到A型钾电流,可能主要由Kv4.2和Kv4.3构成;PE能够抑制DRN 5-HT能神经元A型钾电流。4.A型钾通道阻断剂4-AP诱发DRN区5-HT神经元产生自发放电的频率与PE诱发其产生自发放电的频率具有统计学差异,说明A型钾通道可能参与调节PE诱导DRN区5-HT神经元的放电过程,但除此之外,仍有其他的靶点参与其放电过程。第二部分SK通道在苯肾上腺素诱导DRN区5-HT神经元自发放电中的作用目的:观察SK通道在苯肾上腺素(PE)诱导DRN区5-HT神经元自发放电中的作用方法:1.利用全细胞脑片膜片钳和贴附式脑片膜片钳技术,观察PE对DRN区5-HT神经元的SK电流的影响,以及SK通道阻断剂对DRN区5-HT神经元自发放电的影响。2.利用单细胞PCR技术,观察SK通道亚型在DRN区5-HT能神经元的表达。结果:1.单细胞PCR结果显示,SK通道亚型SK2和SK3通道高度表达于DRN区的5-HT能神经元。2.利用全细胞电压钳制膜片钳技术,发现PE(10μM)可以显着抑制DRN区5-HT神经元上的SK电流,从初始电流44.7±1.3 pA降低至25.6±7.8 pA(n=6,P<0.05)。3.在贴附式脑片膜片钳记录模式下,SK通道阻断剂apamin(100 nM)可以诱发DRN区5-HT神经元放电,继续给予4-AP(500μΜ)后,放电频率从0.1±0.04 Hz增加至0.9±0.3 Hz(n=8,P<0.05),且其放电模式向burst放电模式转化;在同时阻断SK通道与A型钾通道的情况下,继续给予PE,其对DRN区5-HT神经元的放电频率无影响(从0.9±0.3 Hz到1.1±0.3 Hz,n=8,P>0.05)。4.在小鼠的DRN区5-HT神经元,利用电流钳膜片钳技术,记录细胞外钙对神经元膜电位的影响,发现去除细胞外钙(零钙)可以诱发神经元的自发放电。此外,HCN通道阻断剂ZD7288对零钙诱发的DRN区5-HT神经元的自发放电无影响。零钙使DRN区5-HT神经元细胞膜电位明显去极化,膜电位从-66.2±1.7 mV去极化至-49.7±0.9 mV(n=6,P<0.001)。结论:1.SK通道亚型SK2和SK3通道高度表达于DRN区的5-HT能神经元。2.在小鼠的DRN区5-HT神经元中,细胞外零钙使DRN区5-HT神经元膜电位明显去极化,且可以诱发DRN区5-HT神经元的自发放电。3.除A型钾通道外,SK通道在调节PE诱导DRN区5-HT神经元自发放电中可能也发挥重要作用。4.SK通道和A型钾通道共同参与DRN区5-HT神经元自发及burst放电。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
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