王美莲
云南省开远市人民医院检验科云南红河661600
【摘要】培养基是进行生物实验时需要的人工制养料，主要为动物、植物、微生物等组织提供生存、生长的条件。培养基质量会直接影响到微生物实验室检验的结果，因此控制培养基质量显得尤为重要。本文主要介绍了微生物检测中培养基质量的控制方法以及基本控制要求。
【关键词】培养基；微生物检测；质量控制方法
【中图分类号】R888.4【文献标识码】A【文章编号】1276-7808（2015）-07-348-01
近年来随着生物科学技术的不断发展，培养基在微生物检测以及微生物实验中的应用越来越广泛，不断涌现了很多培养基生产厂商。但是，目前市场上的培养基制作工艺以及生产质量参差不齐，很多并没有达到规范化标准，质量上有待进一步提高。在微生物检测中，培养基是必需的一种试剂，培养基的质量高低，配制方法、保存方法、使用方式是否得当，都有可能会影响微生物检测的质量，因此非常有必要掌握培养基质量控制方法及要求。
1.关于培养基的理化指标及其质量控制办法
培养基的理化指标主要包括硬度、澄清度以及PH值三项。①硬度。必须达到微生物检测要求的硬度。②澄清度。如果是固体培养基，要求没有沉淀或者絮状物质。如果是液体培养基，要求液体是澄清的。③PH值。由于目标微生物不同，需要的PH值也会有所差异，因此一定要注意控制好培养基的PH值，如果温度是20-26℃的情况下，可以采用1mol/L盐酸溶液或者氢氧化钠溶液进行调节，均要求无菌状态。而且误差应该控制在±0.2。
2.关于培养基的生物学指标及其质量控制办法
2.1分离培养基
分离培养基的质量判断方法，主要需要观察目标菌的生长状况，同时需要注意是否出现显著的生化反应区别，菌落特征是否明显，其次需要观察目标菌是否会对其他非目标菌的生长具有抑制作用。具体方法是在2块普通营养琼脂平板上以及2块分离培养基平板上分别涂上0.1ml浓度为104、105、106的10倍稀释质控目标菌悬液，放置在37℃环境下连续培养17-25h。对比分离培养基平板以及普通营养琼脂平板，仔细观察两者的质控菌的颜色及其生长状况，还需要观察菌落大小及其数量等情况是否存在区别。下面列举出几种主要的分离培养基的质控菌株的标准，并且介绍了培养基质控的指标。
①普通琼脂。可以选择表皮葡萄菌球、大肠埃希菌作为标准菌株，其中表皮葡萄菌球的颜色以及菌落应该生长得很好；大肠埃希菌应该生长良好。②4号琼脂。可以选择大肠埃希菌、霍乱弧菌作为标准菌株，其中大肠埃希菌不生长，而霍乱弧菌应该是灰褐色，而且菌落中心应该是黑色的。③沙氏琼脂。可以选择酵母菌、大肠埃希菌作为标准菌株。其中酵母菌应该生长情况良好，而大肠埃希菌不生长。④TCBS琼脂。可以选择大肠埃希菌、副溶血性弧菌、霍乱弧菌等作为标准菌株，其中大肠埃希菌的培养基不会变色，菌落比较小，而且也比较少；副溶血性弧菌的培养基会变成黄色，菌落是黄褐色的，而且整体菌落比较圆整；霍乱弧菌的培养基颜色会变成黄色，菌落是黄褐色的，而且整体菌落比较圆整。
2.2选择性培养基
2.2.1接种目标菌
选择性增菌培养基的灵敏度主要是通过测定增菌效果来判断。在普通的肉汤培养基中接种质控目标菌种，然后将其放置在37℃的温度下连续培养17-25h，严格遵循无菌操作原则采用10倍稀释生理盐水溶液将整个肉汤培养物稀释到101-109左右。然后在1支增菌培养基中分别加入0.1ml浓度为109、108、107、106、105、104、103、102、101的10倍稀释质控目标菌悬液，而且应该在2块0.1ml涂布平板上放置104、105的10倍稀释质控目标菌悬液，并且将其放置在37℃的温度下连续培养17-25h，统计菌落的数目，并且根据统计结果合理推算出108、107、106的0.1ml中的菌落数量。在没有稀释过的0.1ml肉汤培养液中放置质控干扰菌，分别放置在0.1ml增菌培养基中，放置在37℃温度下进行培养，然后划相应的平板。
2.2.2观察结果并记录
全部都是目标菌，属于纯培养的话应该是（++++）；表示目标菌生长状况相对比较好的话是（+++）；1/2干扰菌、1/2目标菌的话应该是（++）；目标菌大概占到20%左右，相对较少的话应该是（+）。
2.2.3判断增菌效果
增菌效果良好：假如107目标菌或者106目标菌基本上属于纯培养或者目标菌的生长情况比较好的情况下，而且根据菌落统计结果推算出其相应的稀释液0.1ml接种目标菌只有1个。增菌效果良好：0.1ml接种目标菌数量为10个。增菌效果相对较差：0.1ml接种目标菌数量为100个甚至超过100个以上。
2.3生化鉴定培养基
配制生化培养基后，一定要接种具有代表性、典型性的阴性或者阳性质控菌株进行规定时间的培养，同时还应该密切观察质控菌是不是达到了生化培养基应该出现的各种生物学特征反应。而且有必要进行无菌对照试验。以三糖铁培养基为例，介绍了相应的标准菌株以及相应的生物学特征反应。假如选择大肠埃希菌作为质控菌，应该会产生产气、产酸、产碱等生物学特征反应；选择柠檬酸杆菌作为质控菌的话，应该会具有产硫化氢、产气、产酸等反应；选择沙门菌作为质控菌的话，应该会具有产硫化氢、产气、产酸、产碱等反应。
3.培养基质量控制的一些要求
对于培养基的质量控制应该遵循以下几点要求：①一定要严格根据国家规定的标准菌株作为质控菌株，以标准菌株进行1次传代培养后即可制备标准质控储备菌株，而且应该进行血清学鉴定以及生化鉴定认真确认试验，同时应该做好相应的标记，详细记录各项质控情况。②微生物培养基应该定期进行生物学测定，严格验收自备或者商业提供的重要培养基的质量，客观的评估培养基的可用性，判断有没有具备典型的生物学特征反应。③应该安排专门的人员负责保存质控菌，而且应该保存在专柜中，确保周围环境的安全，避免污染质控菌株。④如果培养基使用频繁，使用量比较大，或者需要长期使用的情况下，不仅进行初次质控检验，以后也需要定期质检。⑤在配制培养基时应该详细记录其PH值、时间、名称、灭菌温度、批号以及配置日期及相关人员等情况。
综上所述，培养基是微生物检测的重要基础物质，其质量对于微生物检测结果的真实可靠性、准确性会有直接的影响，因此非常有必要加强对培养基的质量控制，有效确保培养基的质量。笔者认为，每一种培养基都应该对其对适当菌的鉴别、支持以及抑制能力进行测试，根据实验室的实际情况选择合适的完全培养基。只有确保培养基的PH值在正常范围，生长测试、无菌试验以及各种对照实验都通过合格后方可应用，否则严禁应用。
参考文献：
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