一、EFFECT OF LOW SELENIUM ON CHONDROCYTE DIFFERENTIATION AND DIFFERENTIAL EXPRESSION OF COLLAGEN TYPES Ⅰ,Ⅱ AND Ⅹ IN ARTICULAR CARTILAGE FROM MINI-PIGS（论文文献综述）
Ning Wang,Yuchen He,Silvia Liu,Meagan J.Makarcyzk,Guanghua Lei,Alexander Chang,Peter G Alexander,Tingjun Hao,Anne-Marie Padget,Nuria de Pedro,Tsapekos Menelaos,Hang Lin[1]（2022）在《Engineering osteoarthritic cartilage model through differentiating senescent human mesenchymal stem cells for testing disease-modifying drugs》文中提出Significant cellular senescence has been observed in cartilage harvested from patients with osteoarthritis（OA）.In this study,we aim to develop a senescence-relevant OA-like cartilage model for developing disease-modifying OA drugs（DMOADs）.Specifically,human bone marrow-derived mesenchymal stromal cells（MSCs） were expanded in vitro up to passage 10（P10-MSCs）.Following their senescent phenotype formation,P10-MSCs were subjected to pellet culture in chondrogenic medium.Results from q RT-PCR,histology,and immunostaining indicated that cartilage generated from P10-MSCs displayed both senescent and OA-like phenotypes without using other OA-inducing agents,when compared to that from normal passage 4（P4）-MSCs.Interestingly,the same gene expression differences observed between P4-MSCs and P10-MSC-derived cartilage tissues were also observed between the preserved and damaged OA cartilage regions taken from human samples,as demonstrated by RNA sequencing data and other analysis methods.Lastly,the utility of this senescence-initiated OA-like cartilage model in drug development was assessed by testing several potential DMOADs and senolytics.The results suggest that pre-existing cellular senescence can induce the generation of OA-like changes in cartilage.The P4-and P10-MSCs derived cartilage models also represent a novel platform for predicting the efficacy and toxicity of potential DMOADs on both preserved and damaged cartilage in humans.
李晓晶[2]（2020）在《缺硒通过LncRNA TCONS18040481/miR-7b调控TNFR1诱导鸡肝细胞程序性坏死的研究》文中研究表明硒是一种机体必需微量元素,许多健康问题都与硒摄入不足相关,如克山病、大骨节病、肿瘤、糖尿病、高血压以及免疫、生殖功能障碍等。在畜禽养殖中,禽类的缺硒病主要表现为白肌病、渗出性素质,一般会伴有神经症状,并且生长缓慢、产蛋率下降。肝脏作为缺硒性疾病的主要靶器官之一,缺硒会造成肝脏坏死性病变。转录组分析旨在通过捕获编码和非编码RNA（nc RNA）,量化细胞、组织、器官乃至整个机体内的基因表达差异性,为探索对农业和人类医学重要的定性和定量表型的调控途径和遗传网络提供了基础。Micro RNA（miRNA）作为一种nc RNA,可以通过靶向调节其目的基因转录后表达,介导体内多种生物反应,在各类疾病的发生中发挥重要调控作用。近年来研究发现miRNA的表达水平也响应于机体的硒水平,参与缺硒造成的多种组织损伤。长链非编码RNA（lncRNA）可在细胞质中与miRNA结合,作为竞争性内源RNA（ce RNA）调控miRNA及其靶基因,发挥生物学功能。目前还未有报道阐明lncRNA是否参与缺硒诱导的肝损伤。本研究以肉鸡为研究对象,通过饲喂硒含量为0.008 mg/kg的缺硒日粮,建立鸡缺硒性肝坏死模型,应用H&E染色、转录组学检测技术、实时荧光定量PCR、免疫印记、生物信息学等方法,检测肝脏组织形态学变化、mRNA/lncRNA/miRNA表达谱、程序性坏死相关信号转导通路基因表达,构建lncRNA-miRNA-mRNA调控网络并验证,随后在体外鸡LMH细胞中敲低和/或过表达筛选出的特定lncRNA和miRNA,通过流式细胞术、免疫荧光等方法,分析并验证lncRNA/miRNA途径对靶基因及其下游通路的调控,以及对程序性坏死发生的影响。本试验旨在探究缺硒引起鸡肝损伤的发病机制,明确构建的ce RNA调控网络在程序性坏死的作用。主要研究结果如下:（1）病理组织学结果显示,饲喂低硒日粮后,鸡肝脏组织中肝索紊乱,肝细胞形态不规整,胞核浓缩,肝细胞坏死,表明缺硒诱导鸡肝脏组织坏死性病变。（2）缺硒引起鸡肝脏组织中390个mRNAs表达上调,245个mRNAs表达下调,40个lncRNAs表达上调,49个lncRNAs以及5个miRNAs表达下调（log2 fold change>0.585或<-0.585,FDR<0.05）,富集分析发现代谢和氧化还原过程受严重影响。（3）生物信息学发现lncRNA Tcons＿18040481/miR-7b/TNFR1之间存在潜在互作关系,双荧光素酶报告基因试验证实了miR-7b能够靶向Tcons＿18040481和TNFR1的3’UTR,并抑制其表达。胞质、胞核定位显示Tcons＿18040481主要位于细胞质内。在缺硒鸡肝脏中,Tcons＿18040481和TNFR1表达上调,而miR-7b的表达下降。此外,在LMH细胞中过表达或敲低miR-7b能够分别抑制或增加TNFR1的mRNA和蛋白水平。过表达Tcons＿18040481降低LMH细胞中的miR-7b表达,而增加TNFR1的蛋白水平和mRNA水平;相应地,敲低Tcons＿18040481提高了miR-7b水平,抑制TNFR1的表达。表明了Tcons＿18040481能够作为miR-7b的分子海绵调控miR-7b及靶基因TNFR1的表达。（4）对缺硒鸡肝脏的蛋白检测显示TNFα和TNFR1以及经典程序性坏死途径中RIP1、RIP3和MLKL的蛋白表达水平均上调,caspase 8蛋白表达下降,表明缺硒引起鸡肝脏细胞程序性坏死发生。在体外LMH细胞中,miR-7b抑制导致细胞坏死水平增加,RIP1、RIP3和MLKL表达升高,其可被Nec-1处理所缓解,表明miR-7b低表达造成鸡肝细胞RIP依赖性程序性坏死。在miR-7b抑制的同时用si RNA敲低TNFR1,发现TNFR1抑制能够缓解miR-7b低表达造成的细胞程序性坏死。结合miR-7b与TNFR1之间的靶向调控关系,表明miR-7b低表达通过释放TNFR1而造成细胞程序性坏死的发生。另外,过表达miR-7b缓解了z VAD-fmk和TNFα处理造成的LMH细胞程序性坏死,表明miR-7b通过抑制TNFR1阻断程序性坏死激活剂造成的程序性坏死。对Tcons＿18040481的探究发现,Tcons＿18040481过表达能够造成LMH细胞程序性坏死的发生,其可被Nec-1和TNFR1抑制所缓解。上述的结果表明Tcons＿18040481作为miR-7b的ce RNA增加TNFR1表达,参与缺硒造成的肝细胞程序性坏死。（5）缺硒诱导鸡肝脏组织中TNFα、TNFR1、IKKα/β、IκBα和NF-κB的蛋白表达水平升高。体外试验的结果显示TCONS＿18040481过表达和miR-7b抑制增加IKKα/β、IκBα和NF-κB的蛋白表达,促炎细胞因子i NOS、COX-2、PGE和TNFα的mRNA表达也随之增加,表明TCONS＿18040481/miR-7b信号激活NF-κB途径。并且抑制TNFR1能够缓解TCONS＿18040481过表达和miR-7b抑制造成的NF-κB和TNFα蛋白表达的上调。表明在缺硒鸡肝脏中,TCONS＿18040481/miR-7b增加TNFR1的表达,激活NF-κB通路。（6）在体外LMH细胞中,抗氧化剂NAC处理逆转了miR-7b抑制和TCONS＿18040481过表达诱导的鸡肝细胞程序性坏死,即氧化应激促成TCONS＿18040481/miR-7b诱导的程序性坏死。miR-7b抑制和TCONS＿18040481过表达导致H2O2和ROS水平升高,SOD和GSH活性增加,伴随NF-κB途径激活和程序性坏死发生,这些变化都可以被抗氧化剂NAC或程序性坏死抑制剂Nec-1所抑制,表明细胞内抗氧化功能增强以应对氧化应激。此外,NAC处理逆转了miR-7b抑制诱导的NF-κB和TNFα的激活,表明TCONS＿18040481/miR-7b引起的氧化应激和炎症应答相互促进。结合转录组学中,在鸡肝脏中,氧化还原过程受到影响的结果,表明TCONS＿18040481/miR-7b也参与缺硒引起的氧化应激。这些结果表明,在缺硒鸡肝脏中,TCONS＿18040481/miR-7b增加TNFR1的表达进而引起氧化应激,造成鸡肝细胞程序性坏死。综上所述,缺硒引起鸡肝脏组织坏死性病变,细胞发生RIP依赖性程序性坏死,诱导635个mRNAs、5个miRNAs和89个lncRNAs差异表达。TNFR1为miR-7b的靶基因,TCONS＿18040481能够结合miR-7b而调控TNFR1表达。进一步研究证实,缺硒导致鸡肝脏中TCONS＿18040481表达增加,其通过抑制miR-7b表达,使其释放TNFR1从而激活NF-κB信号,并引起氧化应激,造成鸡肝细胞程序性坏死的发生。以上结果表明缺硒调节lncRNA TCONS＿18040481/miR-7b/TNFR1途径激活NF-κB/ROS信号通路诱导鸡肝细胞程序性坏死。本研究结果为进一步的相关研究提供参考,为程序性坏死诱导的肝损伤提供可能的预防和治疗策略,同时为畜禽健康养殖提供决策依据。
姜汹[3]（2020）在《肉鸡TD差异基因的筛选及柚皮苷和漆树酸的治疗作用》文中研究指明胫骨软骨发育不良（Tibial Dyschondroplasia,TD）是常发生于快速生长禽类中的一种营养代谢性腿部疾病。肉鸡出现TD时主要症状为行走障碍、生长性能下降、胫骨发育畸形和精神萎靡等。据统计,TD在世界范围内发病率可达10%-30%,但是由于其多表现为亚临床症状而常被忽视。TD不仅抑制肉鸡的生长,还造成肉质减退,导致养禽业巨额的损失。此外,由于家禽TD的发生没有明显的地域性和显着的高发性,导致本病防治存在一定的困难。研究表明,TD与肉鸡品种、饲料和饲养环境密切相关。但是由于其发病原因多种多样,且尚未研发出用于预防和治疗TD的特异性药物,在我国肉鸡养殖中TD发病率可达10%左右,因此TD给我国肉鸡养殖带来的损失仍然不容忽视。为了深入了解TD的临床症状、病理变化、发病原因、发病机制及寻找相关的治疗药物。依据福美双构建TD模型,利用高通量测序技术筛选发生TD时显着变化的基因,并结合体内试验和体外试验,分析研究差异基因在肉鸡TD中的调控作用,为阐明TD发病机制和评估药物防治效果奠定基础。主要研究内容及结果如下:1.基于转录组对福美双诱导的TD相关基因的筛选与分析TD是家禽常见的一种营养代谢疾病,其主要表征是软骨生长板内形成白色软骨栓。先前的研究表明,TD与血管生成因子、缺氧诱导因子以及多种基因的异常表达密切相关。骨骼的发育涉及多个通路上基因和蛋白的表达,且任何一个环节出现问题都将会造成骨骼发育异常。本研究的目的是选用爱拔益加（AA）肉鸡,利用福美双造模,应用高通量测序技术筛选正常肉鸡和患TD肉鸡中差异表达的基因。本研究结果表明,对照组和TD组样本中共筛选出14380个表达基因,其中差异表达的基因有1128个。其中部分差异表达的基因在骨形成的过程中承担着重要作用,暗示着TD的发生可能与这些基因有关。差异表达基因GO分析结果显示谷氨酸分泌、多肽抗原结合和MHCⅠ类蛋白复合物的形成在TD发生过程中发挥着重要作用。同时,我们通过对KEGG富集通路分类统计发现,细胞过程类中细胞群体（Cellular community）有36个差异基因;环境信息处理中信号分子与相互作用（Signaling molecules and interaction）有64个差异基因;遗传信息处理中折叠、分类和降解（Folding,sorting and degradation）有6个差异基因;代谢中全局和概览示意图（Global and overview maps）有71个差异基因;机体系统内分泌系统（Endocrine system）有21个差异基因。结果提示,在TD的发生过程中存在多种基因交互式表达差异,多基因共同参与完成TD发病过程的表达调控机制。本研究通过RNA测序技术,分析了肉鸡发生TD时差异表达的基因,分析出肉鸡TD发生过程中显着差异表达的关键靶基因及其参与的代谢物质,为进一步探究TD发生机制奠定基础。2.差异基因在肉鸡TD的表达调控研究软骨成骨是一个复杂的过程,与软骨细胞、成骨细胞、血管分化密切相关,并受多种激素和细胞因子的调控。Ihh-PTHr P信号轴在肉鸡胫骨发育中,可调控软骨细胞发育,Wnt4和ColⅡ也被广泛证实参与动物骨细胞的增殖、分化和胶原蛋白的合成过程。本研究利用福美双造模,通过体内试验和体外试验研究发现,差异基因Ihh、Wnt4和ColⅡ在肉鸡TD组的表达较对照组下调,与第一章转录组筛选的差异基因结果一致。而在体内试验中,基因PTHr P在肉鸡TD组的表达上调;体外试验,基因PTHr P在对照组和TD组的细胞质（呈红色）中均有表达,差异不显着。研究结果表明:PTHr P、Ihh、Wnt4和ColⅡ基因的表达水平的变化对肉鸡TD发挥着重要的作用,可能作为参与TD发生的重要调控基因,该研究将为后续进一步对上述差异基因在肉鸡TD的中草药防治中表达调控研究奠定基础。3.柚皮苷对福美双诱导肉鸡TD的治疗作用TD可引起家禽腿部疾病和生长发育迟缓,且迄今为止尚未发现可治疗TD的特异性药物。柚皮苷用于治疗各种骨骼疾病。然而,柚皮苷是否可以治疗TD目前尚未得到证实。因此,本研究的目的是探讨中草药柚皮苷对福美双诱导的肉鸡TD的治疗作用。180只1日龄大的AA肉鸡随机分成三组,每组60只,分别为对照组（标准饮食）,福美双组（福美双50 mg/kg,从第3天到第18天）和柚皮苷治疗组（柚皮苷100 mg/kg,从第8天到第18天）。在整个试验过程中,记录肉鸡的临床症状、胫骨参数和相关理化指标的变化等,以评估柚皮苷对TD肉鸡的保护效果。另外,通过RT-q PCR和Western blot确定Ihh和PTHr P基因和蛋白表达水平。结果发现,柚皮苷可以通过下调Ihh和上调PTHr P基因和蛋白表达,显着改善TD肉鸡的跛行症状。与TD组相比,柚皮苷组表现出更好的生长趋势,在第10-18天,两组的体重表现出明显差异（p<0.05或p<0.01）;TD组在整个试验过程中,料肉比（FCR）明显升高（p<0.05或p<0.01）,平均日增重（ADWG）和平均日采食量（ADFI）显着降低（p<0.01）;柚皮苷组平均日增重（ADWG）和平均日采食量（ADFI）明显改善（p<0.05或p<0.01）,料肉比（FCR）也明显下降。同时,柚皮苷的使用显着降低了发病肉鸡的生长板的宽度;服用柚皮苷18天后,柚皮苷组胫骨的重量和长度恢复,接近对照组水平。生化指标研究显示,TD组血清中ALT和AST水平显着上升（p<0.01）,而AKP水平明显降低（p<0.01）,柚皮苷组血清的ALT和AST明显低于TD组,而AKP水平高于TD组。TD组肝脏的抗氧化力受到了严重的影响。与对照组相比,TD组SOD浓度、GSH-Px和T-AOC水平明显降低,MDA含量明显升高（p<0.05或p<0.01）,而柚皮苷通过提高GSH-Px、T-AOC、SOD水平,降低MDA水平,改善了肝脏的抗氧化能力。特别在第18天柚皮苷组的GSH-Px和SOD含量已恢复至对照组水平。研究结果表明,柚皮苷可以促进生长性能的提升,恢复生长板宽度,并改善肉鸡肝脏由于福美双导致的抗氧化损伤;同时,柚皮苷还可以通过参与调控Ihh和PTHr P基因的表达,促进软骨细胞的增殖、发育和生长板周边血管的形成,进而恢复由福美双诱导的胫骨生长板的损伤。综上,通过研究发现柚皮苷可以作为治疗TD的潜在药物。4.漆树酸通过调控Wnt4和ColⅡ表达对肉鸡TD的影响漆树酸是一种传统中草药,可用于治疗骨关节炎及多种骨骼疾病。但是,漆树酸是否对TD具有治疗作用目前尚无报道。因此,本研究的目的是探究漆树酸是否对TD具有改善作用。300只1日龄的AA肉鸡被平均分成三组,对照组、TD组和漆树酸治疗组。统计分析各组肉鸡的胫骨指标变化、肝脏抗氧化指标变化、血管生成变化、软骨病理变化及Wnt4与CollⅡ基因和蛋白质表达变化。研究结果表明,TD组肉鸡胫骨各指数低于对照组,而生长板的宽度明显增大（p<0.05）。在漆树酸治疗组中,胫骨的长度,宽度和重量明显得到改善,胫骨生长板的宽度也趋于恢复正常,并且胫骨血管分布也得到了改善。与对照组相比,TD组GSH-Px,T-AOC和SOD水平显着降低（p<0.05）,MDA水平和生长板宽度增加,而漆树酸组显着增加了肝脏抗氧化能力。免疫组化分析显示,漆树酸可以显着促进Wnt4和CollⅡ基因表达。此外,与对照组相比,TD组中Wnt4和ColⅡ基因表达下调,而漆树酸处理则上调Wnt4和CollⅡ基因和蛋白表达。与第一章转录组筛选的差异基因Wnt4和ColⅡ表达均下调的结果一致。总之,通过研究发现,漆树酸可以通过调节Wnt4和CollⅡ基因的表达进而改善胫骨的发育状态,缓解TD产生的跛行症状,并可以刺激软骨细胞的生长和再发育,促进骨的再吸收和胶原蛋白的形成。
张石磊[4]（2020）在《低剂量持续暴露双酚A对小鼠生殖毒性的影响》文中研究表明双酚A（Bisphenol A,BPA）是制造塑料制品和涂层的原料,被认为具有生殖毒性,孕期暴露于BPA可导致母体和后代糖代谢紊乱,激素紊乱和子代死亡等严重后果。本试验主要研究小鼠在整个繁殖周期中口服暴露BPA所引起的子代小鼠生殖器官损伤和生殖相关基因表达的异常及其机制。通过在母鼠孕期和哺乳期以及仔鼠断奶后至性成熟期使小鼠饮水摄入不同浓度的BPA,分析BPA损伤仔鼠生殖发育的机制,并通过对卵巢颗粒细胞和睾丸间质细胞体外培养印证动物试验中BPA引起的基因表达差异。1.BPA对孕鼠生殖毒性研究:本研究给予孕鼠BPA 口服剂量为50mg·kg-1·d-1。分别于孕3 d、6 d、9 d、12 d、15 d、18 d处死孕鼠采样。试验统计了母鼠怀孕不同阶段胚胎个数、卵巢和子宫在不同妊娠阶段的细胞凋亡和卵巢、子宫中雌激素受体 α（estrogen receptor α,ERα）、雌激素受体 β（estrogen receptor β,ERβ）。结果显示,暴露BPA后孕鼠血清BPA含量显着升高（P<0.05）。另一方面,由于BPA的雌激素特性,BPA暴露导致孕鼠的生殖器官中ER的表达发生变化。卵巢ERα在孕15 d后显着升高（P<0.05）,ERβ的表达量在整个孕期均显着升高（P<0.05）;子宫ERβ在孕6 d之后显着升高（P<0.05）。孕3～9 d时卵巢细胞凋亡显着增多（P<0.05）;孕3 d时子宫细胞凋亡显着降低（P<0.05）。孕鼠在孕18 d时子宫胚胎数目显着减少（P<0.05）。本研究结果表明,低剂量BPA暴露影响子宫和卵巢ER的表达,影响子宫内胚胎正常生长,致孕鼠子宫胚胎数目显着减少。2.BPA对子代雄鼠生殖毒性研究:试验统计了 21日龄、45日龄仔鼠生殖器官病理损伤、细胞凋亡和睾丸中雄激素受体（androgen receptor,AR）、联会复合体蛋白3（synaptic complex protein 3,Scp3）的表达变化,检测了 45 日龄仔鼠的精子质量。同时对21日龄、45日龄仔鼠睾丸进行转录组学测序,观测仔鼠卵巢发育等情况。试验结果证实,低于50 mg·kg-1·d-1的BPA暴露引起仔鼠睾丸发育异常。BPA暴露使21日龄和45日龄子代雄鼠血清和睾丸中BPA含量均显着升高（P<0.05）,睾丸出现一定的病理组织学变化,睾丸生殖细胞凋亡增加（P<0.05）,AR表达减少（P<0.05）。另外低剂量的BPA引起45日龄子代小鼠睾丸精子质量下降（P<0.05）,与生精细胞分化相关的Scp3表达减少（P<0.05）,进一步证实了 BPA对睾丸发育和精子生成的不良影响。转录组测序显示BPA影响了睾丸剪切体基因表达,其中21日龄仔鼠睾丸Snrnp40上调、Hnrnpu下调,45日龄仔鼠睾丸Snrpc和Hnrnpu表达下调。Hnrnpu在mRNA前体与剪切体结合时起到连接作用,其下调导致mRNA转录后修饰第一步受阻,睾丸间质细胞的体外培养结果印证了 BPA对Hnrnpu的影响。3.BPA对子代雌鼠生殖毒性研究:试验统计了 21日龄、45日龄仔鼠生殖器官病理损伤、细胞凋亡和卵巢、子宫中ERα、ERβ的表达变化,同时对21日龄、45日龄仔鼠卵巢进行转录组学测序,以研究BPA对仔鼠生殖器官发育成熟情况及生殖功能的变化。研究结果表明低于50 mg·kg-1·d-1的BPA暴露即引起仔鼠卵巢发育异常。21日龄和45日龄子代雌鼠血清和卵巢中BPA均显着升高（P<0.05）,21日龄仔鼠卵巢器官指数增大（P<0.05）、卵泡颗粒细胞层出现破损。但45日龄仔鼠卵巢器官指数均无显着变化和病理损伤。BPA可引起21日龄和45日龄小鼠卵巢颗粒细胞凋亡增加（P<0.05）,ERα和ERβ表达紊乱。转录组测序显示BPA影响了卵巢核糖体基因表达,其中21日龄仔鼠卵巢Rpl3、Rpl21、Rpsa显着下调、Rps2、Rps28、Rpl26、Rpl32、Rpl10a显着上调;45日龄仔鼠卵巢Rpl21、Rpsa显着下调,Rpl3、Rps2、Rpl7a、Rps26、Rpl26显着上调。仔鼠卵巢发育异常可能与核糖体功能改变有关。卵巢颗粒细胞的体外培养结果印证了 BPA对Rps2的影响。综上所述,BPA低剂量长时期暴露引起孕鼠子宫内胚胎发育中止,子代小鼠睾丸、卵巢发育异常。子代雄鼠生殖功能受到损害。对于子代雄鼠睾丸的发育而言,BPA阻断了剪切体的功能,可能Hnrnpu是关键基因;对于子代雌鼠而言,BPA影响了核糖体的功能,Rps2可能是关键基因。
徐闰胜[5]（2020）在《蛋种鸭饲粮硒、碘缺乏对母子代抗氧化功能与骨骼品质影响研究》文中进行了进一步梳理硒、碘是动物机体必需微量元素,硒参与体内多种蛋白质的合成,参与动物生长、抗氧化、免疫、骨骼代谢等生物学功能。而碘在甲状腺激素功能、动物生长等方面具有重要的作用。迄今为止,两种微量元素对种禽繁殖功能和子代影响仍不清楚,本试验拟以蛋种鸭为动物模型,通过硒、碘营养素缺乏研究两种微量元素对母鸭及子代抗氧化功能和骨骼生长的影响,为种禽生产中微量元素营养的应用提供理论依据。试验选用遗传背景一致,体重相近的140日龄龙岩麻鸭288只,采用2×2双因素随机区组设计,将试验母鸭随机分为4个处理,分别为:1)缺硒缺碘饲粮（-Se-I）:不添加硒和碘的基础饲粮（硒与碘含量实测值分别为0.11 mg/kg,0.00 mg/kg）;2)含硒缺碘饲粮（+Se-I）:基础饲粮中添加0.24 mg/kg硒;3)含碘缺硒饲粮（-Se+I）:基础饲粮中添加0.4 mg/kg碘;4)含硒含碘饲粮（+Se+I）:基础饲粮中添加0.24 mg/kg硒和0.4 mg/kg碘。每个处理6个重复,每重复12只鸭,单笼饲养,试验期为200d。母鸭试验期结束前10天,对各处理组种母鸭进行间隔3天的两次输精试验,并收集种蛋,按常规程序孵化。孵化出壳后,根据种鸭分组,从每组中选取48只健康雏鸭,分为6个重复、每个重复8只。雏鸭饲喂含有正常水平硒和碘饲粮,试验期为7周。研究结果如下:（1）饲粮硒、碘缺乏对种母鸭繁殖性能、抗氧化和骨骼品质的影响饲粮硒、碘缺乏对种母鸭采食量、产蛋率、平均蛋重、料蛋比等生产性能均无显着影响（P>0.05）。饲粮硒缺乏对蛋品质指标无显着影响（P>0.05）,而饲粮碘缺乏引起蛋白高度、哈氏单位显着降低（P<0.05）。蛋种鸭硒、碘缺乏对种蛋受精率、孵化率、死胚率、健雏率等繁殖性能指标无显着影响（P>0.05）。饲粮硒缺乏降低了种鸭血浆和肝脏中GSH-Px活性（P<0.01）,并显着提高了肝脏丙二醛（MDA）含量（P<0.05）;而碘缺乏降低了种鸭血浆总超氧化物歧化酶（T-SOD）活性（P<0.05）,并提高了血浆中MDA和氧化低密度脂蛋白（Ox-LDL）水平（P<0.05）。饲粮碘缺乏显着降低了种鸭胫骨长度（P<0.05）,但对胫骨重量、骨密度和骨矿盐含量无显着影响（P>0.05）。（2）种母鸭饲粮硒、碘缺乏对子代鸭抗氧化及骨骼生长的影响种母鸭饲粮硒缺乏对子代1-7周龄鸭各周体重、日采食量、日增重、料重比等生长性能指标无显着影响（P>0.05）,但种母鸭饲粮碘缺乏有降低子代7周龄母鸭体重的趋势（P=0.06）。种母鸭饲粮碘缺乏降低了子代出壳鸭血清胰岛素样生长因子-1（IGF-1）浓度（P<0.01）,但对血清三碘甲腺原氨酸（T3）、甲状腺素（T4）水平无显着影响（P>0.05）。种母鸭硒缺乏降低了子代出壳鸭血浆和肝脏中GSH-Px活性（P<0.01）,并导致血液和肝脏中MDA水平升高（P<0.05）,种母鸭饲粮碘缺乏降低了子代出壳鸭血浆T-SOD活性（P<0.05）,并有提高血浆Ox-LDL水平的趋势（P=0.07）。此外,种母鸭硒、碘缺乏对子代出壳鸭血浆中GSH-Px活性的影响表现出交互作用（P<0.01）。雏鸭饲喂硒、碘充足饲粮后,各组间血浆和肝脏中抗氧化指标和脂质过氧化指标无显着差异（P>0.05）。种母鸭硒缺乏对子代出壳鸭胫骨重量、长度等骨骼品质指标无显着影响（P>0.05）;而碘缺乏则导致子代出壳鸭胫骨发育受阻,表现为胫骨重量、胫骨长度、关节软骨管状直径、关节软骨正面直径等指标显着降低（P<0.01）。此外,种母鸭碘缺乏导致胫骨生长板软骨中X型胶原蛋白（Col X）表达显着下降（P<0.05）,但对软骨中甲状旁腺相关蛋白（PTHr P）无显着影响（P>0.05）。出壳后雏鸭饲喂硒、碘充足饲粮7周后,各组间胫骨重量、长度、管围、骨密度、骨矿盐含量等骨骼品质指标无显着差异（P>0.05）。综上试验结果表明,种母鸭饲粮硒缺乏或碘缺乏均可降低自身和子代出壳鸭的抗氧化能力,引起氧化损伤;种母鸭饲粮碘缺乏可导致自身胫骨品质下降,并引起子代出壳鸭胫骨发育障碍,而出壳后雏鸭提供充足硒和碘可使抗氧化能力和骨骼发育得以恢复。
于庆贺[6]（2020）在《基质刚度对人脂肪间充质干细胞成软骨分化的影响》文中进行了进一步梳理研究背景关节软骨中缺乏血管,因此它的自我修复能力较差,若关节软骨受到损伤,没有接受治疗,软骨缺损将会继续增加,造成软骨合成代谢和分解代谢的紊乱,引起骨性关节炎,病情严重时需要关节置换甚至需要截肢。目前文献报道的软骨缺损修复方法主要有骨软骨移植术、关节清创后微骨折术、软骨细胞移植术等。骨软骨移植术修复软骨缺损疗效较好,但该方法会造成供体区域损伤或功能退化,且供体区域有限,无法修复严重的软骨缺损,具有极大的局限性。微骨折术被报道只对较小的软骨缺损有好的治疗效果。软骨细胞移植术则有着长久的问题未能解决,即软骨细胞的获取难度较大和植入受损部位后的去分化。临床上迫切需要找到更好的治疗方法,同时改善治疗的效果和效率。体外构建功能化组织工程软骨逐渐成为软骨组织工程研究的重要内容。软骨组织工程首先面临的问题是种子细胞的选择,可用于软骨组织工程种子细胞的主要是软骨细胞或间充质干细胞。软骨细胞的获取较为困难,体外扩增时被许多文献报道面临迅速去分化的难题。间充质干细胞如脂肪间充质干细胞、骨髓间充质干细胞、脐带血源性干细胞等都被报道有成软骨分化的潜能。脂肪间充质干细胞是组织工程领域中应用广泛的成体干细胞之一,具有来源获取容易、量大、增殖活性高的优势。与骨髓来源干细胞相比,相同体积的脂肪组织所含干细胞数量是骨髓组织的数百倍,因此脂肪间充质干细胞在软骨组织工程应用等方面前景广阔。在进行体外脂肪间充质干细胞成软骨诱导时,诱导培养基中的几种成分如胎牛血清、ITS、TGF-β3等成分的浓度众说纷纭。体外培养条件下,脂肪间充质干细胞向软骨细胞的分化受到多种因素的影响,在其中力学作用的影响尤为显着。已有许多研究发现,力学刺激可以对成软骨细胞的增殖、分化和细胞外基质变化产生影响。ECM硬度（通常用杨氏模量或弹性模量表示）是细胞重要的外界刺激,对MSCs的成软骨分化起关键的作用。为了观察ECM硬度对成软骨分化的影响需要准备不同刚度且有较好的细胞亲和性的材料。通常改变基质刚度的方法是通过改变其聚合成分的配比,从而制作出有不同力学强度的材料。但是改变基质聚合成分的同时不可避免地会造成表面化学成分的变化,因此研究ECM硬度对接种细胞的影响的核心问题是要找到改变基质刚度的同时不改变其表面的化学成分。机械转导在调节间充质干细胞（MSC）软骨形成中的分子机制尚未完全了解。整联蛋白位于传感路径的开始处,被学者们认为是细胞的的机械传感器。整联蛋白是由18个α亚基和8个β亚基组合而成的异聚跨膜受体,α亚基通常负责结合胞外蛋白,而β亚基通常负责胞内募集调节蛋白。整联蛋白各个亚基中机械敏感的成分及发挥功能的机制尚不明确,目前也需要用适当的动物模型进行更彻底的研究,以阐明在各种疾病和组织再生中机械转导下游靶向信号传递事件的治疗潜力。目的和意义首先探索hASCs成软骨诱导培养基中胎牛血清、ITS、TGF-β3等成分的合适浓度,在验证hASCs成软骨分化的优秀潜能的同时也为后续的实验奠定基础。制备出可调整刚度的聚丙烯酰胺凝胶,观察不同刚度的ECM对hASCs增殖和成软骨分化的影响,最后检测不同刚度的ECM上hASCs整联蛋白的表达情况,为整联蛋白感识外界机械作用的原理提供线索。研究方法1.hASCs提取、培养及3种成软骨培养基的比较2.不同刚度的聚丙烯酰胺水凝胶制备、力学性能检测及细胞增殖检测3.不同刚度聚丙烯酰胺凝胶上hASCs的成软骨分化效果测试结果1.在单层培养或者微球培养时软骨诱导培养基中添加10 ng/ml的TGF-β3并以ITS代替FBS作为细胞培养基添加剂更能促进hASCs的成软骨分化,与此同时,我们也验证了 hASCs成软骨分化的优秀潜能。2.成功制备出3组不同力学性能的聚丙烯酰胺凝胶,测试力学强度,组1凝胶平均刚度为0.67kpa,组2凝胶平均刚度为13.44kpa,组3凝胶的平均刚度为99.31kpa。组1凝胶上的hASCs细胞形态更小,增殖速度组1也更为缓慢。3.3组凝胶上hASCs成软骨诱导3周后检测软骨细胞标志物,观察到组1凝胶上的hASCs成软骨分化水平最高。结论hASCs具有良好的成软骨分化潜能;hASCs成软骨诱导的培养基中选取ITS代替FBS为细胞添加剂更有利于成软骨分化;硬度较低的细胞外基质上的hASCs增殖更慢,但成软骨分化水平更高。
欧阳晓[7]（2016）在《未培养骨髓单个核细胞对软骨细胞分化和基质分泌影响的实验研究》文中指出背景和目的近年来,骨髓单个核细胞（bone marrow mononuclear cells,BMMCs）已经成功应用于软骨缺损的修复。软骨细胞的增殖和分化在软骨修复中起重要作用,然而BMMCs对其增殖、分化效果的影响仍不清楚。故在这个研究中,我们探索了在细胞聚集体培养条件下BMMCs对软骨细胞分化的影响。方法我们分别分离了BMMCs和软骨细胞,并将其以1:1（BMMC/C）的比例混合后以细胞聚集体的形式（每个细胞聚集体含有1.6×106个细胞）在体外分别培养2、4和8周。我们接着分别通过大体观察、组织学检测、免疫组化和基因表达分析来评估软骨细胞的分化状态。结果随着培养时间的延续,BMMC/C组和软骨细胞组均表现出透明而光滑的表面。在培养4周后,BMMC/C组的面积小于软骨细胞组,而至培养8周后,BMMC/C组展现出更大的面积（P=0.003）。软骨特异性细胞外基质（extracellular matrix,ECM）包括糖胺多糖（glycosaminoglycan,GAG）和Ⅱ型胶原的分布随着软骨细胞组的培养进程而逐渐减少。然而,BMMC/C组在经历了2周和4周的体外培养后,未发现ECM的分布发生显着改变。在体外培养8周后,BMMC/C组ECM的沉积发生明显的减少。同时,我们发现与软骨细胞组相比,BMMC/C组随着培养时间的延续表现出软骨特异性基因的上调。结论总之,我们的研究结果显示在以细胞聚集体形式行体外培养时,BMMCs能够延缓软骨细胞的去分化进程。这表明未培养的BMMCs是一种能被快速并安全获取的细胞,且能作为一种用于软骨组织工程研究的潜在细胞来源。
李晨[8]（2016）在《GDF15和S100A2在结直肠癌中的表达与功能研究》文中提出结直肠癌是临床上一种常见的消化系统恶性肿瘤,其发病率和死亡率都较高,且呈逐年上升的趋势。虽然近年来肿瘤相关研究和医疗技术都在不断的发展,但是针对结直肠癌的防控收效甚微,进展期结直肠癌患者的五年生存率没有根本性的提高,结直肠癌患者的死亡率也没有显着降低。转移严重影响结直肠癌患者的治疗效果,是导致患者死亡的主要原因,因此研究肿瘤转移过程中的相关基因,做到早期预测结直肠癌患者的肿瘤转移潜能,是降低结直肠癌转移发生率,提高患者生存率的关键。此外,早期诊断筛查能够降低结直肠癌患病风险,研究诊断及预后分子指标对早期筛查有重要意义。但是由于单个研究的样本数量较小、人群间差异大等因素,单个研究结果提出的结直肠癌诊断及预后分子价值尚存在争议。Meta分析将研究目的相同的同类结果进行定量整合分析,能够增大样本数目,减少随机误差,改进统计学检验功效,从而得出更为系统、全面的结论。GDF15和S100A2均为TGF-β信号通路中的重要分子。GDF15参与调控成骨细胞形成、造血功能、胚胎着床及妊娠等生理过程。S100A2是一类小分子EF-手型蛋白,属于S100蛋白家族。研究发现,GDF15、S100A2在多种肿瘤的发生发展过程中异常表达,且其异常表达与肿瘤转移、分化、淋巴结转移、肿瘤分期及预后等多种临床病理学参数相关。因此,GDF15、S100A2的表达失调及其在结直肠癌转移过程的分子机制值得深入探讨。1.GDF15在结直肠癌转移过程中的研究我们构建了GDF15表达质粒、GDF15 shRNA干扰质粒,发现过表达GDF15能够促进结直肠癌细胞的迁移、侵袭能力,干扰GDF15后,结直肠癌细胞的侵袭、迁移能力减弱。上皮-间质转化（Epithelial-Mesenchymal Transition, EMT）被认为是发生在肿瘤转移过程的基本事件,我们通过Western Blot检测上皮-间质转化相关标志物的表达,发现过表达GDF15会降低上皮标志物E-cadherin的表达,上调间质标志物的表达。另外,对结直肠癌细胞用GDF15 shRNA处理进行拯救实验能够恢复EMT标志物的表达。免疫荧光检测也显示同样的结果。我们对结直肠癌细胞系SW620转染了GDF15-shRNA, GDF15干扰组细胞的迁移、侵袭能力显着降低,添加外源rhGDF15蛋白后,又能一定程度地恢复结直肠癌细胞的迁移、侵袭能力。通过Western Blot及免疫荧光,对EMT标志物的检测显示,GDF15干扰后E-cadherin表达上升,再添加外源rhGDF15蛋白后又能降低E-cadherin的表达。这些说明GDF15在体外能够促进EMT的发生。我们又进行鼠尾静脉注射,体内实验进一步验证了GDF15能够促进结直肠癌细胞的转移能力。通过ELISA,检测了287例结直肠癌患者及353例健康对照人群血清GDF15表达水平。结果表明,结直肠癌患者血清中GDF15水平显着高于健康对照组,且血清GDF15高表达与结直肠癌分化、淋巴结转移、远处转移及TNM分期相关,血清GDF15高表达是结直肠癌患者预后的不利因素。2.GDF15在结直肠癌中的诊断及预后意义-Meta Analysis我们在PubMed, ISI web of knowledge数据库进行文献检索（检索公开发表文献日期截止至2014年11月）,收集整理了目前已经发表的GDF15相关文献,采用Meta分析的方法对血清GDF15在结直肠癌的诊断及预后评估价值进行整合分析。结直肠癌病例与正常对照组间血清GDF15水平差异的比较采用SMD（standardized mean difference）标准化后进行Meta分析。诊断价值的评估采用ROC（receiver operating characteristic）曲线下面积AUC （area under the curve）、灵敏度和特异度进行评估。GDF15表达水平截断值（cutoff）的选取是根据约登指数（Youden’s index）最大值确定。预后价值的评估采用Cox比例风险回归模型计算得出的HR （hazard ratio）作为效应值。结果表明结直肠癌患者的GDF15血清水平显着高于正常对照人群（SMD=1.08,95% CI:0.56-1.59,p<0.001）.以血清GDF15水平区分结直肠癌患者和正常对照人群,AUC为0.816（95%CI：0.792-0.838）。此外,结直肠癌患者血清GDF15高表达与较差的生存相关（pooled HR=2.09,95% CI: 1.47～2.96）.总之,该Meta分析表明结直肠癌患者中血清GDF15水平能够作为一个有价值的诊断及预后指标。3.S100A2在结直肠癌中的功能研究我们构建了S100A2表达质粒和S100A2 siRNA,发现过表达S100A2能够促进结直肠癌细胞的迁移能力,干扰S100A2能减弱细胞的迁移能力。通过ELISA检测S100A2,临床数据显示血清中高水平表达S100A2的结直肠癌患者生存时间更短。通过免疫组化检测了结直肠癌患者肿瘤组织中S100A2的表达水平,发现肿瘤中S100A2的表达与肿瘤分化程度相关,并且肿瘤组织的S100A2细胞核表达与肿瘤分化程度、TNM分期相关。另外,我们分析GDF15与S100A2的相关性。基于Pearson相关性分析,发现结直肠癌患者血清中GDF15和S100A2的表达无相关性（r=0.112,p=0.385）。按照各因素分类后进行各组内相关性分析发现,在结直肠癌患者血清中GDF15表达和S100A2表达仅在TNM分期的早期（Ⅰ/Ⅱ）呈中度相关（r=0.463,p=0.015）,在其他分组均未显示相关性。我们将GDF15和S100A2的表达情况共同纳入生存分析,发现,GDF15和S100A2同时高表达的结直肠癌患者预后较差。根据GDF15、S100A2在结直肠癌中的表达和功能研究得出以下结论：（1）GDF15在结直肠癌中的研究①结直肠癌患者血清GDF15水平显着高于健康对照组,血清GDF15水平能够作为结直肠癌辅助诊断的分子标志物。②结直肠癌患者血清GDF15高水平表达与较差的生存相关,是预后不良的分子标志物。③GDF15促进结直肠癌细胞上皮间质转化（EMT）和转移。（2）S100A2在结直肠癌中的功能研究①体外实验证明S100A2能促进结直肠癌细胞的迁移。②结直肠癌组织中S100A2的表达与肿瘤分化程度相关,并且肿瘤组织的S100A2细胞核表达与肿瘤分化程度、TNM分期相关。③结直肠癌患者血清S100A2水平显着高于健康对照组,血清高水平表达S100A2的结直肠癌患者预后较差。④TNM分期早期（Ⅰ/Ⅱ期）的结直肠癌患者血清GDF15表达和S100A2表达呈中度相关（r=0.463,p=0.015）。将GDF15和S100A2的表达情况共同纳入生存分析,发现,GDF15和S100A2同时高表达的结直肠癌患者预后较差。
胡爱心[9]（2015）在《细胞因子在骨性关节炎的发生及治疗方面的相关研究》文中研究表明目的：判断原发性膝关节骨性关节炎患者的血清及关节滑液中的IL-17浓度,评估IL-17浓度与骨性关节炎严重程度之间的相关性。观察bFGF对大鼠BMSCs体外增殖及其分化潜能的影响。方法： （1）收集原发性膝关节骨性关节炎患者的血清及关节滑液。收集年龄、性别相匹配的健康人群的血清样本。酶联免疫吸附试验法定量测定IL-17浓度。骨性关节炎的严重程度使用Lequesne指数评分标准和Kellgren-Lawrence放射学诊断标准评分分级进行评估。（2）体外培养大鼠BMSCs,分别设对照组和bFGF处理组,bFGF作用浓度分别为1、10、1001μg/L。作用72 h后,噻唑蓝（MTT）测吸光度（A）值反映细胞增殖,细胞免疫组织化学测细胞CD44的累积A值,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测细胞CD44的mRNA相对表达量。结果：（1）实验组的血清IL-17浓度显着高于对照组（P<0.05）。将患者根据KL评分分组后,KL评分4级的患者血清IL-17浓度显着高于对照组（P<0.05）。KL评分2级、KL评分3级和对照组之间的血清IL-17浓度无显着性差异。KL评分3级、KL评分4级的关节滑液IL-17浓度显着高于KL评分2级（P<0.05）,KL评分4级的关节滑液IL-17浓度显着高于KL评分3级（P<0.05）。关节滑液IL-17浓度与Lequesne指数具有相关性（r=0.6232,P<0.05）,但是血清IL-17浓度与Lequesne指数不具有相关性。（2）在1ug/LbFGF作用下其MTTA值为0.334±0.036,较对照组A值0.251±0.033明显增高（P<0.05）。在1ug/LbFGF作用下其细胞免疫组织化学测得CD44的累积A值较对照组明显增高（P<0.01）,其RT-PCR测得CD44的mRNA相对表达量较对照组明显增高（P<0.01）。结论：（1）原发性膝关节骨性关节炎患者关节滑液中的IL-17浓度与骨性关节炎的严重程度具有高度的正相关。IL-17可以作为一种有用的生化标记物来反应骨性关节炎的严重程度及进程。（2）低浓度的bFGF促进BMSCs快速增殖的同时,保证了BMSCs高增殖的同时又使其处于未分化状态。这种改良培养可获得高增殖率的BMSCs,并且保证了BMSCs较好的分化潜能。这种优化的扩增措施,在BMSCs应用于骨、软骨、脂肪等组织工程方面具有较好的应用前景。
黄炎[10]（2015）在《基于生物组学方法的纳米银细胞毒性机理研究》文中指出随着纳米粒子在生物医学领域中的应用日趋广泛,纳米粒子对人体健康的影响即纳米毒性引起了人们的密切关注。虽然研究者已采用多种方法从不同层面研究了纳米粒子的毒性,但目前人们对纳米粒子与活细胞的相互作用仍知之甚少,更重要的是采用动物整体实验、细胞学实验和传统分子生物学方法不能系统全面地解释纳米粒子与细胞相互作用的机理。高通量生物组学技术（基因表达谱芯片技术、蛋白质组学技术、SOLiD测序技术等）的快速发展为全面、系统地在分子水平上研究纳米粒子毒性机理提供了新方法和新技术手段。但迄今为止,对纳米粒子作用后引起的细胞中基因、蛋白质、microRNA表达谱的变化都是采用单一的生物组学方法分别进行研究的,因此只能获知纳米粒子对细胞影响的一个方面,而无法对纳米粒子的毒性进行系统整体的分析。纳米银由于效果强、杀菌光谱,在医学领域获得了广泛的应用,但由于纳米银对生物系统影响的复杂性,其毒性作用还有许多方面未被揭示。目前已有研究者开始研究纳米银对细胞内基因、蛋白质表达谱的影响,但尚未见对细胞中microRNA表达谱影响的报道,也未见联合多种生物组学方法系统研究纳米银毒性机制的报道。本论文将通过对将基因、microRNA、蛋白质表达数据的联合分析,探讨microRNA在纳米银对人皮肤成纤维细胞毒性中的调控机制。本论文的具体内容如下：1、采用硼氢化钠还原硝酸银的方法制备纳米银,通过调节硼氢化钠的浓度和改变溶剂的种类制备一系列纳米银溶液。紫外可见分光光度计和透射电镜表征结果显示,还原剂的浓度和溶剂的种类均会影响纳米银的大小和形状。用二蒸水制备的纳米银形状均一,大部分呈球形。为了获得实验用20nm的纳米银,确定以二蒸水为溶剂、浓度为2mM的硼氢化钠和硝酸银溶液进行制备。2、采用MTT法、实时细胞电阻抗仪、光学显微镜、荧光显微镜和扫描电镜对纳米银对人皮肤成纤维细胞增殖和形貌的影响进行分析,采用流式细胞术研究纳米银对细胞周期和细胞凋亡的影响,进一步采用原子吸收光谱仪分析纳米银在细胞中的摄取。结果显示,低浓度的纳米银（1、10、50、100μM）作用细胞72h内,细胞毒性均为0级,高浓度纳米银（200、300μM）在作用细胞48h后均出现1级细胞毒性,且细胞的规则排列发生变化。而200μM纳米银作用细胞1、4、8h时虽未产生细胞毒性,影响细胞形态,但已使细胞滞留于DNA合成期,且在8h时纳米银对细胞周期和凋亡的影响最为显着。此外,随着作用时间的增加,细胞中摄取的纳米银量显着升高。3、采用基于二维差异凝胶电泳分离技术和质谱鉴定的蛋白质组学技术研究200／μM纳米银作用1、4、8h后人皮肤成纤维细胞中的蛋白质表达谱,筛选获得25种在三个时间点均发生差异表达的功能蛋白质,其中发生上调表达的蛋白质19种,发生下调表达的蛋白质4种,既有上调又有下调的蛋白质2种。进一步采用Cluster & Treeview, Gosurfer、GenMAPP、Ingenuity Pathway Analysis软件对差异表达蛋白质进行聚类、Gene Ontology （GO）功能分类、生物学通路和蛋白质-蛋白质相互作用网络分析,发现25种差异表达蛋白质影响多个GO功能类别,并参与31条生物学通路和4个蛋白质相互作用网络。纳米银可能影响细胞信号传导、细胞骨架、细胞粘附、细胞能量代谢、mRNA加工等功能,抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡。4、采用SOLiD测序技术分析2001μM纳米银对人皮肤成纤维细胞中microRNA表达谱的影响,在1、4、8h三个时间点分别获得59、143和142个差异表达microRNA,其中不重复的共有246个。进一步使用miRanda、TargetScan和PicTar三种方法同时对差异表达microRNA进行靶基因预测,在三个时间点分别获得1747个、2928个和2667个靶基因,其中不重复的共有3594个。生物信息学分析发现,差异表达microRNA靶基因显着影响171、272、233个生物学过程、分子功能和细胞组分第三层次的功能类别,并参与120、132和129条生物学通路,其功能涉及细胞粘附、细胞骨架、细胞凋亡、细胞周期、炎症反应等。5、将纳米银作用细胞后的蛋白质表达数据和本课题组前期获得的基因表达数据进行比较,发现两者在种类、数量和表达模式上都存在明显差别。对比差异表达基因、microRNA和蛋白质涉及的GO生物学过程功能类别和参与的生物学通路,发现三者之间存在差异。通过联合分析microRNA、基因和蛋白质表达数据,在1、4、8h三个时间点分别匹配到具有生物学意义的microRNA-靶基因作用对36、429、116个,microRNA-靶蛋白质作用对2、1、3个,包含的靶基因和靶蛋白质有28、186和82个,不重复的共257个。在匹配到的microRNA-靶基因／靶蛋白质对找到对应3个基因／蛋白质对的6个microRNA,而靶基因-蛋白质对的表达分别受多个microRNA的共同调控,microRNA本身的表达方式也会影响其对靶基因／靶蛋白质的调控效果,microRNA可通过降解mRNA和抑制翻译两种方式发挥对靶基因-蛋白质对的调控作用。对257个microRNA靶基因／靶蛋白质的生物信息学分析显示,其功能主要与细胞通讯和细胞代谢过程有关,并且参与57条生物学通路。而差异表达nicroRNA和调控的靶基因-蛋白质对共同参与4条主要的生物学通路,即“肌动蛋白细胞骨架的调节”、“肝细胞生长因子受体”、“胰岛素信号”和‘’MAPK信号通路”。纳米银可能通过差异表达microRNA调控这4条通路中的靶基因和靶蛋白质,最终导致细胞骨架的破坏、ATP水平的降低和细胞凋亡的产生。6、采用Western blot和qRT-PCR对选定的4种蛋白质和8个microRNA的表达值进行测定,证实纳米银与细胞作用的蛋白质组学和nicroRNA测序实验结果的可信性。进一步采用肌动蛋白细胞骨架染色试剂盒、ATP检测试剂盒和Hoechst荧光染色法对纳米银作用1、4、8、24、48和72h后细胞骨架、细胞内ATP含量和细胞凋亡进行分析,证实生物信息学分析结果,证明纳米银主要通过破坏细胞骨架、降低ATP水平和诱导细胞凋亡这三个方面的作用引起人皮肤成纤维细胞毒性。7、采用SOLiD测序技术分析200μM纳米金对人皮肤成纤维细胞中microRNA表达谱的影响,在1、4、8h三个时间点分别获得109、78和124个差异表达]microRNA。进一步使用miRanda, TargetScan和PicTar同时对差异表达microRNA进行靶基因预测,在三个时间点分别获得2403个、2044个和3002个靶基因,这些靶基因显着影响208、193、249个生物学过程、分子功能和细胞组分第三层次的功能类别,并参与126、125和129条生物学通路。通过联合分析microRNA、基因和蛋白质表达数据,在1、4、8h三个时间点分别匹配到具有生物学意义的microRNA-靶基因／蛋白质作用对132、38、137个,包含的不重复的靶基因和靶蛋白质共187个。对匹配的187个microRNA靶基因／靶蛋白质的生物信息学分析显示,其功能主要与细胞代谢过程有关,并且参与71条生物学通路。而差异表达microRNA和调控的靶基因-蛋白质对共同参与2条主要的生物学通路,即"mRNA加工”和"MAPK信号通路”。纳米金可能通过差异表达microRNA调控这2条通路中的靶基因和靶蛋白质,影响细胞周期但抑制细胞凋亡。8、从细胞水平、蛋白质水平和microRNA水平对纳米银与纳米金对人皮肤成纤维细胞的影响进行比较。结果发现,这两种纳米粒子对细胞增殖、细胞周期、细胞骨架、氧化应激、能量代谢、细胞凋亡等方面的影响均存在差异。进一步在蛋白质水平上的比较发现,这两种纳米粒子诱导的差异表达蛋白质中相同的只有5种,生物学过程、分子功能、细胞组分分类中包含蛋白质最多的类别基本相同,而纳米银影响的通路数量（31条）多于纳米金（24条）。在]microRNA水平上的比较显示,纳米银和纳米金作用细胞后差异表达microRNA的种类、靶基因／靶蛋白质功能、参与的生物学通路和对生物学通路的影响均不同。与纳米银相比,纳米金影响细胞周期,减弱对ATP合成的抑制和对细胞骨架的损伤,并抑制细胞凋亡的产生,最终未产生细胞毒性。而两种纳米粒子作用后细胞中活性氧水平的差异与纳米金无细胞毒性而纳米银诱导产生细胞毒性有关。
二、EFFECT OF LOW SELENIUM ON CHONDROCYTE DIFFERENTIATION AND DIFFERENTIAL EXPRESSION OF COLLAGEN TYPES Ⅰ,Ⅱ AND Ⅹ IN ARTICULAR CARTILAGE FROM MINI-PIGS（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、EFFECT OF LOW SELENIUM ON CHONDROCYTE DIFFERENTIATION AND DIFFERENTIAL EXPRESSION OF COLLAGEN TYPES Ⅰ,Ⅱ AND Ⅹ IN ARTICULAR CARTILAGE FROM MINI-PIGS（论文提纲范文）
（1）Engineering osteoarthritic cartilage model through differentiating senescent human mesenchymal stem cells for testing disease-modifying drugs（论文提纲范文）
| INTRODUCTION |
| RESULTS |
| Significant cellular senescence is observed in cartilage areas with severe damage |
| P10-MSCs display senescent phenotype and reduced differentiation potential |
| Cartilage generated from P10-MSCs displays OA features |
| Cartilage generated from P10-MSCs contains a significant number of senescent cells |
| RNA sequencing reveals differences in the transcriptomes of engineered cartilage from different cell populations |
| Senescence-induced OA-like cartilage models show potential in screening DMOADs |
| DISCUSSION |
| MATERIALS AND METHODS |
| Harvest of the preserved and damaged cartilage from OA knee joints |
| Isolation and expansion of human chondrocytes from P-C and D-C |
| Isolation and expansion of human bone marrow-derived MSCs |
| Examination of MSC stemness |
| Tri-lineage differentiation test |
| CFU assay |
| Flow cytometry analysis |
| Pellet culture for cartilage formation |
| Safranin O/Fast green staining |
| SA-β-gal staining |
| IHC staining |
| Immunofluorescence |
| MTS assay to assess cell proliferation potential |
| Telomere length assay (TAT) |
| RNA isolation and q RT-PCR |
| Western blot |
| RNA sequencing and data analysis |
| Drug test |
| Statistical analysis |
| SUPPORTING INFORMATION |
（2）缺硒通过LncRNA TCONS18040481/miR-7b调控TNFR1诱导鸡肝细胞程序性坏死的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| 英文摘要 |
| 1 前言 |
| 1.1 缺硒对机体损伤及其研究进展 |
| 1.1.1 缺硒对肝脏疾病发生的研究进展 |
| 1.1.2 mRNA转录组在缺硒病中应用的研究进展 |
| 1.1.3 非编码RNA(ncRNA)在缺硒病中的研究进展 |
| 1.2 ceRNA调控网络的研究进展 |
| 1.2.1 ceRNA假说及其调控网络成员 |
| 1.2.2 ncRNA与肝脏疾病关系的研究进展 |
| 1.3 程序性坏死的研究进展 |
| 1.3.1 程序性坏死概述 |
| 1.3.2 TNFα/TNFR1信号调控程序性坏死 |
| 1.3.3 NF-κB/ROS途径参与TNFα/TNFR1信号对程序性坏死的调控 |
| 1.4 研究的目的与意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 主要仪器与试剂 |
| 2.1.1 主要仪器 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.2 试验方法 |
| 2.2.1 试验动物分组与采样 |
| 2.2.2 肝脏组织显微结构的观察 |
| 2.2.3 肝脏组织转录组的检测方法 |
| 2.2.4 蛋白提取与Western blot(WB)的检测方法 |
| 2.2.5 RT-qPCR法对肝脏组织和LMH细胞中miRNA表达的检测方法 |
| 2.2.6 RT-qPCR法对肝脏组织和LMH细胞中lncRNA和mRNA表达的检测方法 |
| 2.2.7 鸡LMH传代细胞的培养 |
| 2.2.8 miR-7b过表达/敲低LMH细胞模型的建立 |
| 2.2.9 TNFR1抑制LMH细胞模型的建立 |
| 2.2.10 细胞核与细胞质内RNA分离的方法 |
| 2.2.11 miR-7b与TNFR1靶向关系的双荧光素酶报告基因系统验证方法 |
| 2.2.12 LncRNA Tcons_18040481过表达/抑制LMH细胞模型的建立 |
| 2.2.13 LncRNA Tcons_18040481与miR-7b靶向关系的双荧光素酶报告基因系统验证方法 |
| 2.2.14 鸡LMH细胞中TNFR1和NF-κB的免疫荧光(IF)的检测方法 |
| 2.2.15 AO/EB检测鸡LMH细胞坏死的方法 |
| 2.2.16 流式细胞术检测鸡LMH细胞坏死的方法 |
| 2.2.17 ROS与氧化应激相关指标的检测方法 |
| 2.3 试验数据的统计与分析 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 缺硒鸡肝脏组织病理学的观察结果 |
| 3.2 缺硒鸡肝脏组织程序性坏死和炎症相关蛋白表达的检测结果 |
| 3.3 缺硒鸡肝脏转录组测序结果 |
| 3.3.1 缺硒鸡肝脏组织中mRNA的测序结果 |
| 3.3.2 缺硒肝脏组织差异mRNA基因功能富集分析结果 |
| 3.3.3 缺硒鸡肝脏组织中miRNA的测序结果与验证 |
| 3.3.4 缺硒鸡肝脏组织中差异miRNA预测靶基因的GO和KEGG富集结果 |
| 3.3.5 缺硒鸡肝脏组织中LncRNA的测序结果与验证 |
| 3.3.6 缺硒鸡肝脏组织中差异lncRNA预测靶基因的GO和KEGG富集结果 |
| 3.3.7 差异miRNA和LncRNA潜在互作网络 |
| 3.4 miR-7b调控程序性坏死的检测结果 |
| 3.4.1 miR-7b过表达和抑制LMH细胞模型的建立 |
| 3.4.2 miR-7b过表达和抑制对LMH细胞坏死的AO/EB检测结果 |
| 3.4.3 miR-7b过表达和抑制对LMH细胞坏死的流式细胞术检测结果 |
| 3.4.4 miR-7b过表达和抑制对程序性坏死通路中蛋白表达影响的检测结果 |
| 3.5 miR-7b对 TNFR1 靶向关系的验证 |
| 3.5.1 miR-7b与TNFR1靶向关系的预测结果 |
| 3.5.2 miR-7b与TNFR1靶向关系的双荧光素酶报告基因系统验证结果 |
| 3.5.3 miR-7b过表达和抑制后TNFR1表达的检测结果 |
| 3.6 miR-7b通过TNFR1对NF-κB通路调控的检测结果 |
| 3.6.1 miR-7b过表达和抑制对NF-κB通路调控的检测结果 |
| 3.6.2 miR-7b抑制同时抑制TNFR1对NF-κB通路调控的检测结果 |
| 3.7 miR-7b抑制通过TNFR1对程序性坏死调控的检测结果 |
| 3.7.1 miR-7b抑制同时抑制TNFR1对细胞坏死水平的检测结果 |
| 3.7.2 miR-7b抑制同时抑制TNFR1对程序性坏死通路中蛋白表达影响的检测结果 |
| 3.8 miR-7b过表达和抑制对LMH细胞内氧化应激水平影响的检测结果 |
| 3.9 Tcons_18040481与miR-7b靶向关系的验证 |
| 3.9.1 Tcons_18040481细胞内的定位分析结果 |
| 3.9.2 Tcons_18040481与miR-7b靶向关系的双荧光素酶报告基因系统验证结果 |
| 3.9.3 过表达和敲低Tcons_18040481与miR-7b验证两者表达关系的检测结果 |
| 3.9.4 过表达和敲低Tcons_18040481对TNFR1表达影响的检测 |
| 3.10 过表达Tcons_18040481对程序性坏死影响的检测结果 |
| 3.10.1 过表达Tcons_18040481对程序性坏死水平影响的检测结果 |
| 3.10.2 过表达Tcons_18040481对程序性坏死通路中蛋白表达影响的检测结果 |
| 3.11 过表达Tcons_18040481通过TNFR1对NF-κB通路调控的检测结果 |
| 3.11.1 过表达和敲低Tcons_18040481对NF-κB通路调控的检测结果 |
| 3.11.2 过表达Tcons_18040481同时敲低TNFR1对NF-κB通路相关基因蛋白水平影响的检测结果 |
| 3.12 过表达Tcons_18040481同时抑制TNFR1对程序性坏死影响的检测结果 |
| 3.12.1 过表达Tcons_18040481同时敲低TNFR1对程序性坏死水平影响的检测结果 |
| 3.12.2 过表达Tcons_18040481同时敲低TNFR1对程序性坏死相关基因蛋白水平影响的检测结果 |
| 3.13 过表达Tcons_18040481对LMH细胞内氧化应激水平影响的检测结果 |
| 4 讨论 |
| 4.1 缺硒对肝脏组织损伤的影响 |
| 4.2 缺硒对转录组的影响 |
| 4.2.1 缺硒对mRNA转录组的影响 |
| 4.2.2 缺硒对lncRNA转录组的影响 |
| 4.2.3 缺硒对miRNA转录组的影响 |
| 4.3 Tcons_18040481对miR-7b及下游靶基因TNFR1 的影响 |
| 4.3.1 Tcons_18040481作为miR-7b的分子海绵调控miR-7b的表达 |
| 4.3.2 miR-7b对TNFR1表达的影响 |
| 4.4 缺硒通过调控Tcons_18040481/miR-7b/TNFR1激活NF-κB/ROS信号通路诱导鸡肝细胞程序性坏死 |
| 5 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 |
（3）肉鸡TD差异基因的筛选及柚皮苷和漆树酸的治疗作用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略语表(Abbreviation) |
| 第一部分 文献综述 |
| 1 肉鸡养殖行业存在的问题 |
| 1.1 抗生素滥用 |
| 1.2 传染性疾病 |
| 1.3 非传染性疾病 |
| 2 家禽的骨骼生长 |
| 2.1 长骨的生长发育 |
| 2.2 干骨生长板 |
| 2.2.1 生长板静止区 |
| 2.2.2 生长板增殖区 |
| 2.2.3 生长板过渡区 |
| 2.2.4 生长板前肥大区 |
| 2.2.5 生长板肥大区 |
| 3 肉鸡胫骨软骨发育不良的概况 |
| 3.1 肉鸡胫骨软骨发育不良的发病原因 |
| 3.1.1 遗传因素 |
| 3.1.2 生长因子 |
| 3.1.3 维生素D3及其代谢物 |
| 3.1.4 饲养管理因素 |
| 3.1.5 其他因素 |
| 3.2 肉鸡胫骨软骨发育不良的病理变化 |
| 3.3 肉鸡胫骨发育不良的临床症状 |
| 4 肉鸡胫骨软骨发育不良的发病机理研究进展 |
| 4.1 Ihh/PTHr P信号轴在软骨发育中的作用 |
| 4.1.1 PTHrP对软骨细胞增殖和分化的调控 |
| 4.1.2 Ihh对软骨细胞增殖和分化的调控 |
| 4.2 血管在软骨发育中的作用 |
| 4.3 相关因子在软骨发育中的作用 |
| 4.3.1 Wnt蛋白 |
| 4.3.2 血管生成因子 |
| 4.3.3 基质金属蛋白酶 |
| 4.3.4 热休克蛋白 |
| 4.3.5 成纤维细胞生长因子 |
| 4.3.6 转录因子Sox-9 |
| 4.4 缺氧在软骨发育中的作用 |
| 5 福美双在肉鸡TD造模中的应用研究 |
| 6 肉鸡胫骨软骨发育不良的诊断方法 |
| 6.1 临床症状诊断 |
| 6.2 剖检及病理学诊断 |
| 6.3 影像学诊断 |
| 7 肉鸡胫骨软骨发育不良的防治措施 |
| 7.1 中草药在胫骨软骨发育不良中的应用 |
| 7.1.1 漆树酸 |
| 7.1.2 柚皮苷 |
| 7.1.3 川芎嗪 |
| 7.1.4 黄芪甲苷 |
| 7.2 日粮中营养因素在肉鸡胫骨软骨发育不良中的应用 |
| 7.2.1 钙、磷在肉鸡胫骨软骨发育不良中的应用 |
| 7.2.2 镁离子、氯离子在肉鸡胫骨软骨发育不良中的应用 |
| 7.2.3 铜、锌在肉鸡胫骨软骨发育不良中的应用 |
| 7.2.4 含硫氨基酸在肉鸡胫骨软骨发育不良中的应用 |
| 7.2.5 维生素在肉鸡胫骨软骨发育不良中的应用 |
| 8 转录组及在软骨疾病中的应用 |
| 8.1 转录组 |
| 8.2 转录组研究技术 |
| 8.2.1 基因芯片技术 |
| 8.2.2 表达序列标签技术 |
| 8.2.3 基因表达序列分析技术 |
| 8.2.4 转录组测序技术 |
| 8.3 转录组技术在软骨疾病中的应用 |
| 9 本研究的目的与意义 |
| 第二部分 试验研究 |
| 第一章 基于转录组对福美双诱导的胫骨软骨发育不良相关基因的筛选与分析 |
| 1 研究背景 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 试验材料 |
| 2.1.1 试验动物 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要仪器设备 |
| 2.2 试验方法 |
| 2.2.1 动物处理及样品采集 |
| 2.2.2 RNA-Seq技术的主要流程 |
| 2.2.3 总RNA抽提 |
| 2.2.4 总RNA质量鉴定 |
| 2.2.5 反转录 |
| 2.2.6 基因RT-q PCR检测 |
| 2.2.7 数据统计及分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 RNA-Seq结果统计及基因组定位 |
| 3.1.1 饱和度分析 |
| 3.1.2 基因组比对 |
| 3.1.3 表达相关性分析 |
| 3.1.4 不同表达基因的筛选 |
| 3.1.5 差异表达基因的RT-q PCR验证 |
| 3.2 差异表达基因的GO富集分析 |
| 3.3 差异表达基因的KEGG富集分析 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第二章 差异基因在肉鸡胫骨软骨发育不良的表达调控研究 |
| 1 研究背景 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 试验材料 |
| 2.1.1 试验动物 |
| 2.1.2 主要仪器与设备 |
| 2.1.3 主要试剂 |
| 2.1.4 主要培养基和溶液的配制 |
| 2.2 试验方法 |
| 2.2.1 动物处理及样品采集 |
| 2.2.2 解剖病理学观察 |
| 2.2.3 软骨细胞的分离培养 |
| 2.2.4 软骨细胞的PCR鉴定 |
| 2.2.5 软骨细胞免疫荧光检测 |
| 2.3 数据统计及分析 |
| 3 试验结果 |
| 3.1 模型构建 |
| 3.2 添加福美双对肉鸡血清钙、磷含量的影响 |
| 3.3 福美双对肉鸡器官指数的影响 |
| 3.4 软骨细胞培养结果鉴定 |
| 3.5 基因PTHr P和 Ihh在软骨细胞中的表达和定位 |
| 3.6 福美双对Ihh和 PTHr P基因表达的影响 |
| 3.7 福美双对Wnt4和ColⅡ基因表达的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第三章 柚皮苷对福美双诱导肉鸡胫骨软骨发育不良的治疗作用 |
| 1 研究背景 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 试验材料 |
| 2.1.1 试验动物 |
| 2.1.2 主要仪器设备 |
| 2.1.3 主要试剂 |
| 2.2 试验方法 |
| 2.2.1 动物处理及样品采集 |
| 2.2.2 生长性能分析 |
| 2.2.3 肉鸡胫骨相关指标测量 |
| 2.2.4 肝脏抗氧化能力检测 |
| 2.2.5 血清生化指标检测 |
| 2.2.6 病理学观察 |
| 2.2.7 胫骨组织总RNA提取及c DNA合成 |
| 2.2.8 蛋白免疫印记 |
| 2.3 数据统计及分析 |
| 3 试验结果 |
| 3.1 临床症状观察 |
| 3.2 柚皮苷对TD肉鸡生长性能的影响 |
| 3.3 柚皮苷对肉鸡胫骨参数的影响 |
| 3.4 血清生化指标分析 |
| 3.5 肝脏抗氧化能力的测定 |
| 3.6 H.E染色观察 |
| 3.7 Ihh和 PTHr P基因在胫骨生长板中的表达 |
| 3.8 胫骨生长板中Ihh和 PTHr P蛋白表达水平 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第四章 漆树酸通过调控Wnt4和ColⅡ表达对肉鸡胫骨软骨发育不良的影响 |
| 1 研究背景 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 试验材料 |
| 2.1.1 试验动物 |
| 2.1.2 主要仪器设备 |
| 2.1.3 主要试剂 |
| 2.1.4 主要培养基和溶液的配制 |
| 2.2 试验方法 |
| 2.2.1 形态学、样本收集和数据分析 |
| 2.2.2 TD scores判定 |
| 2.2.3 免疫组织化学检测 |
| 2.2.4 测定SOD、MDA含量、GSH-Px、T-AOC活性 |
| 2.2.5 基因RT-q PCR检测 |
| 2.2.6 蛋白免疫印记检测 |
| 2.2.7 数据统计及分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 漆树酸的治疗效果评估 |
| 3.2 TD scores评分 |
| 3.3 胫骨相关指数评价 |
| 3.4 胫骨生长板组织学观察 |
| 3.5 肝脏生化指标检测 |
| 3.6 漆树酸对TD组肉鸡胫骨软骨干骺端血管形成的影响 |
| 3.7 Wnt4和ColⅡ免疫组织化学检测 |
| 3.8 漆树酸治疗对生长板Wnt4和ColⅡ基因表达量的作用效果 |
| 3.9 漆树酸治疗对生长板Wnt4和ColⅡ蛋白表达的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录1 |
| 附录2 |
| 附录3 |
| 附录4 |
| 致谢 |
（4）低剂量持续暴露双酚A对小鼠生殖毒性的影响（论文提纲范文）
| 资助项目 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 1 引言 |
| 1.1 双酚A的来源与污染 |
| 1.2 低剂量BPA的潜在危害 |
| 1.3 BPA对孕鼠孕期的影响 |
| 1.4 BPA对仔鼠的影响 |
| 1.4.1 BPA对仔鼠卵巢的影响 |
| 1.4.2 BPA对仔鼠睾丸的影响 |
| 1.5 转录组学测序 |
| 1.6 研究的目的和意义 |
| 2 孕期暴露BPA对母体子宫和卵巢的影响 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 试验动物与分组处理 |
| 2.1.2 母鼠饮水量和体重统计 |
| 2.1.3 窝产子数、仔鼠初生重和雌雄比 |
| 2.1.4 母鼠孕期血清BPA含量测定 |
| 2.1.5 母鼠孕期卵巢和子宫器官指数测定 |
| 2.1.6 母鼠孕期卵巢和子宫雌激素受体检测 |
| 2.1.7 母鼠孕期卵巢和子宫细胞凋亡检测 |
| 2.1.8 统计分析 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 BPA暴露期间母鼠饮水量和体重 |
| 2.2.2 暴露不同剂量BPA对产仔的影响 |
| 2.2.3 孕鼠孕期血清BPA含量 |
| 2.2.4 BPA对母鼠孕期卵巢、子宫指数及胚胎数目的影响 |
| 2.2.5 不同妊娠日期孕鼠卵巢和子宫ER表达水平 |
| 2.2.6 BPA暴露引起孕鼠卵巢细胞凋亡的变化 |
| 2.2.7 孕鼠子宫细胞凋亡结果 |
| 2.3 讨论 |
| 2.3.1 BPA对孕鼠生殖毒性模型的建立 |
| 2.3.2 BPA对孕鼠孕期胎儿数量的影响 |
| 2.3.3 BPA对孕鼠卵巢和子宫ER表达的影响 |
| 2.3.4 BPA对孕鼠卵巢和子宫细胞凋亡的影响 |
| 2.4 小结 |
| 3 BPA低剂量长期暴露对睾丸发育的影响 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 试验动物分组与处理 |
| 3.1.2 仔鼠饮水量和体重统计 |
| 3.1.3 仔鼠血清和睾丸BPA含量测定 |
| 3.1.4 睾丸器官指数 |
| 3.1.5 仔鼠睾丸病理组织切片制作 |
| 3.1.6 单细胞凝胶电泳(彗星试验)检测睾丸DNA损伤 |
| 3.1.7 仔鼠精子活力、密度和畸形率 |
| 3.1.8 仔鼠睾丸AR的检测 |
| 3.1.9 小鼠睾丸Scp3的免疫组织化学检测 |
| 3.1.10 转录组测序分析及差异基因荧光定量PCR验证 |
| 3.1.11 BPA对小鼠TM3细胞的影响 |
| 3.1.12 统计分析 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 仔鼠饮水量和体重 |
| 3.2.2 仔鼠血清和睾丸中BPA含量 |
| 3.2.3 BPA对子代雄鼠睾丸器官指数的影响 |
| 3.2.4 长期暴露BPA后21日龄和45日龄仔鼠睾丸的病理学变化 |
| 3.2.5 长期暴露于BPA后子代雄鼠睾丸彗星试验 |
| 3.2.6 仔鼠精子活率、密度和畸形率 |
| 3.2.7 长期暴露于BPA后21日龄子代睾丸AR表达变化 |
| 3.2.8 Scp3在子代45d雄鼠睾丸生精细胞上的表达 |
| 3.2.9 BPA暴露对21日龄仔鼠睾丸转录组测序结果 |
| 3.2.10 45日龄仔鼠睾丸转录组测序结果 |
| 3.2.11 BPA对小鼠TM3细胞的影响 |
| 3.3 讨论 |
| 3.3.1 孕期和哺乳期暴露于BPA对21日龄仔鼠的影响 |
| 3.3.2 长期暴露于BPA对45日龄雄鼠的影响 |
| 3.3.3 BPA对睾丸间质细胞剪切体相关基因的影响 |
| 3.4 小结 |
| 4 BPA长期低剂量暴露对仔鼠卵巢发育的影响 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 动物分组与处理 |
| 4.1.2 BPA对仔鼠血清和卵巢BPA含量的影响 |
| 4.1.3 卵巢器官指数的计算 |
| 4.1.4 仔鼠卵巢病理组织切片的制备 |
| 4.1.5 TUNEL检测卵巢细胞凋亡 |
| 4.1.6 仔鼠卵巢ERα和ERβ的免疫组化检测 |
| 4.1.7 RNA-seq及差异基因qPCR验证 |
| 4.1.8 BPA对小鼠卵巢颗粒细胞的影响 |
| 4.1.9 统计分析 |
| 4.2 结果 |
| 4.2.1 子代雌鼠血清和卵巢组织BPA含量 |
| 4.2.2 卵巢器官指数 |
| 4.2.3 仔鼠卵巢组织病理学变化 |
| 4.2.4 BPA对仔鼠卵巢DNA损伤的测定结果 |
| 4.2.5 暴露BPA后子代21日龄雌鼠卵巢ERα、ERβ表达变化 |
| 4.2.6 暴露BPA对子代45日龄雌鼠卵巢ERα、ERβ表达的影响 |
| 4.2.7 21日龄仔鼠卵巢基因表达变化 |
| 4.2.8 45日龄仔鼠卵巢转录组测序 |
| 4.2.9 BPA对小鼠卵巢颗粒细胞的影响 |
| 4.3 讨论 |
| 4.3.1 孕期和哺乳期暴露BPA对子代21日龄雌鼠卵巢发育的影响 |
| 4.3.2 长期暴露于BPA环境对子代45日龄小鼠卵巢发育的影响 |
| 4.4 小结 |
| 5 结论 |
| 6 本研究创新点 |
| 参考文献 |
| 博士期间发表论文及申请专利 |
| 作者简历 |
| 致谢 |
| 附件 |
（5）蛋种鸭饲粮硒、碘缺乏对母子代抗氧化功能与骨骼品质影响研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 硒、碘的抗氧化功能研究现状 |
| 1.1.1 氧化应激的产生与清除 |
| 1.1.2 硒的抗氧化功能 |
| 1.1.3 碘的抗氧化功能 |
| 1.1.4 硒、碘对家禽抗氧化能力的影响 |
| 1.1.5 种禽硒、碘营养水平对子代抗氧化能力的影响 |
| 1.2 硒、碘与骨骼发育的研究现状 |
| 1.2.1 硒对骨骼生长与代谢的影响 |
| 1.2.2 碘对骨骼生长与代谢的影响 |
| 1.2.3 种禽矿物元素营养对子代胚胎胫骨发育的影响 |
| 1.3 家禽硒、碘的需要量 |
| 1.3.1 硒 |
| 1.3.2 碘 |
| 1.4 本研究的目的与意义 |
| 第二章 饲粮硒、碘缺乏对种母鸭繁殖性能、抗氧化和骨骼品质的影响 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 试验材料 |
| 2.1.2 试验动物与分组 |
| 2.1.3 试验饲粮 |
| 2.1.4 饲养管理 |
| 2.1.5 试剂与仪器 |
| 2.1.6 测定项目与方法 |
| 2.1.7 数据分析 |
| 2.2 结果分析 |
| 2.2.1 饲粮硒、碘缺乏对种母鸭生产性能的影响 |
| 2.2.2 饲粮硒、碘缺乏对蛋品质的影响 |
| 2.2.3 饲粮硒、碘缺乏对种蛋孵化性能的影响 |
| 2.2.4 饲粮硒、碘缺乏对种母鸭血浆抗氧化指标的影响 |
| 2.2.5 饲粮硒、碘缺乏对种母鸭肝脏中抗氧化指标的影响 |
| 2.2.6 饲粮硒、碘缺乏对种母鸭胫骨品质的影响 |
| 2.3 讨论 |
| 2.3.1 饲粮硒、碘缺乏对种母鸭生产性能的影响 |
| 2.3.2 饲粮硒、碘缺乏对蛋品质的影响 |
| 2.3.3 饲粮硒、碘缺乏对种蛋孵化性能的影响 |
| 2.3.4 饲粮硒、碘缺乏对种母鸭血浆和肝脏抗氧化指标的影响 |
| 2.3.5 饲粮硒、碘缺乏对种母鸭胫骨品质的影响 |
| 2.4 小结 |
| 第三章 种母鸭硒、碘缺乏对子代鸭生长、抗氧化和骨骼品质的影响 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 试验动物与分组 |
| 3.1.2 试验饲粮 |
| 3.1.3 饲养管理 |
| 3.1.4 试剂与仪器 |
| 3.1.5 测定项目与方法 |
| 3.1.6 数据分析 |
| 3.2 结果分析 |
| 3.2.1 种母鸭饲粮硒、碘缺乏对子代鸭生长性能的影响 |
| 3.2.2 种母鸭饲粮硒、碘缺乏对子代出壳鸭血浆抗氧化指标的影响 |
| 3.2.3 种母鸭饲粮硒、碘缺乏对子代出壳鸭肝脏抗氧化指标的影响 |
| 3.2.4 种母鸭饲粮硒、碘缺乏对子代7 周龄鸭血浆抗氧化指标的影响 |
| 3.2.5 种母鸭饲粮硒、碘缺乏对子代7 周龄鸭肝脏中抗氧化指标的影响 |
| 3.2.6 种母鸭饲粮硒、碘缺乏对子代出壳鸭胫骨品质的影响 |
| 3.2.7 种母鸭饲粮硒、碘缺乏对子代出壳鸭股骨和胫骨Col X和 PTHr P蛋白表达的影响 |
| 3.2.8 种母鸭饲粮硒、碘缺乏对子代7 周龄鸭胫骨品质指标的影响 |
| 3.2.9 种母鸭饲粮硒、碘缺乏对子代出壳鸭和7 周龄鸭血浆激素水平的影响 |
| 3.3 讨论 |
| 3.3.1 种母鸭饲粮硒、碘缺乏对子代雏鸭生长性能的影响 |
| 3.3.2 种母鸭饲粮硒、碘缺乏对子代出壳鸭血浆和肝脏抗氧化指标的影响 |
| 3.3.3 种母鸭饲粮硒、碘缺乏对子代7 周龄鸭血浆和肝脏抗氧化指标的影响 |
| 3.3.4 种母鸭饲粮硒、碘缺乏对子代出壳鸭胫骨品质及胫骨与股骨Col X和PTHr P蛋白表达的影响 |
| 3.3.5 种母鸭饲粮硒、碘缺乏对子代出壳鸭和7 周龄鸭血浆激素水平的影响 |
| 3.4 小结 |
| 结论 |
| 1 结论 |
| 2 本文创新点 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 在校期间科研成果 |
（6）基质刚度对人脂肪间充质干细胞成软骨分化的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 hASCs提取、培养及3种成软骨培养基的比较 |
| 前言 |
| 1. 材料与方法 |
| 2. 结果 |
| 3. 讨论 |
| 第二章 不同刚度的聚丙烯酰胺水凝胶制备、力学性能检测及细胞增殖检测 |
| 前言 |
| 1. 材料与方法 |
| 2. 结果 |
| 3. 讨论 |
| 第三章 不同刚度聚丙烯酰胺凝胶上hASCs的成软骨分化效果测试 |
| 前言 |
| 1. 材料与方法 |
| 2. 结果 |
| 3. 讨论 |
| 参考文献 |
| 全文小结 |
| 中英文对照缩略词表 |
| 成果 |
| 致谢 |
（7）未培养骨髓单个核细胞对软骨细胞分化和基质分泌影响的实验研究（论文提纲范文）
| 英文缩略词 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述1 |
| 参考文献 |
| 综述2 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读学位期间成果 |
| 致谢 |
（8）GDF15和S100A2在结直肠癌中的表达与功能研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略语 |
| 1 引言 |
| 2 仪器设备和试剂 |
| 2.1 仪器设备 |
| 2.2 主要生物化学试剂 |
| 3 缓冲液和培养液的配制方法 |
| 3.1 核酸凝胶电泳缓冲液 |
| 3.2 蛋白免疫印迹缓冲液 |
| 3.3 基因克隆缓冲液 |
| 3.4 细胞培养液 |
| 4 GDF15在结直肠癌转移过程中的研究 |
| 4.1 材料和方法 |
| 4.2 实验结果 |
| 4.3 讨论 |
| 5 GDF15在结直肠癌中的诊断和预后意义-METAANALYSIS |
| 5.1 材料和方法 |
| 5.2 实验结果 |
| 5.3 讨论 |
| 6 S100A2在结直肠癌中的功能研究 |
| 6.1 材料和方法 |
| 6.2 实验结果 |
| 6.3 讨论 |
| 7 结论与展望 |
| 7.1 结论 |
| 7.2 展望 |
| 参考文献 |
| 综述 S100A2 PROTEIN IN CANCER |
| Reference |
| 作者简历及在读期间所取得科研成果 |
（9）细胞因子在骨性关节炎的发生及治疗方面的相关研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 1 前言 |
| 第一部分 血清与关节滑液IL-17浓度与骨性关节炎 |
| 2 材料和方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 第二部分 bFGF对BMSCs扩增及分化潜能的影响 |
| 5 材料和方法 |
| 6 实验结果 |
| 7 讨论 |
| 8 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻博期间发表的科研成果目录 |
| 致谢 |
（10）基于生物组学方法的纳米银细胞毒性机理研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩写词表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 生物材料及其生物相容性研究概况 |
| 1.1.1 生物材料概述 |
| 1.1.2 生物材料的生物相容性 |
| 1.2 纳米生物材料生物相容性研究 |
| 1.3 金属及金属氧化物纳米粒子毒性研究 |
| 1.4 纳米银的生物相容性研究 |
| 1.4.1 纳米银的制备 |
| 1.4.2 纳米银的应用 |
| 1.4.3 纳米银的生物相容性研究 |
| 1.5 蛋白质组学技术在生物相容性研究中的应用 |
| 1.5.1 蛋白质组学简介 |
| 1.5.2 蛋白质组学技术简介 |
| 1.5.3 蛋白质组学实验结果的生物信息学分析 |
| 1.5.4 蛋白质组学技术在生物材料生物相容性研究中的应用 |
| 1.6 microRNA高通量分析技术在生物材料生物相容性研究中的应用 |
| 1.6.1 microRNA简介 |
| 1.6.2 microRNA的检测方法 |
| 1.6.3 microRNA靶基因的研究方法 |
| 1.6.4 microRNA高通量分析技术在生物相容性研究中的应用 |
| 1.7 生物相容性研究中多种生物组学数据的联合分析 |
| 1.8 生物组学实验结果的验证方法 |
| 1.9 本论文的工作基础和研究内容 |
| 1.10 参考文献 |
| 第二章 纳米银的制备和表征 |
| 2.1 纳米银制备方法的选取 |
| 2.2 纳米银尺寸的确定 |
| 2.3 纳米银的制备与表征 |
| 2.3.1 实验材料和仪器 |
| 2.3.2 纳米银的制备 |
| 2.3.3 纳米银的表征 |
| 2.4 实验结果与讨论 |
| 2.4.1 去离子水和二蒸水溶剂中纳米银的制备结果 |
| 2.4.2 平均粒径20 nm的纳米银制备结果 |
| 2.5 本章小结 |
| 2.6 参考文献 |
| 第三章 纳米银与人皮肤成纤维细胞作用的细胞水平研究 |
| 3.1 纳米银细胞毒性评价 |
| 3.1.1 实验目的 |
| 3.1.2 实验材料和仪器 |
| 3.1.3 主要溶液的配制 |
| 3.1.4 不同浓度20nm纳米银对细胞增殖的影响 |
| 3.1.5 200μM纳米银作用细胞1、4、8h的细胞毒性评价 |
| 3.1.6 实验结果和讨论 |
| 3.2 纳米银对细胞周期和细胞凋亡的影响 |
| 3.3 纳米银在细胞中的摄取 |
| 3.4 本章小结 |
| 3.5 参考文献 |
| 第四章 纳米银与人皮肤成纤维细胞作用的蛋白质组学研究 |
| 4.1 二维差异凝胶电泳(2D-DIGE)实验 |
| 4.1.1 2D-DIGE实验材料和仪器 |
| 4.1.2 2D-DIGE实验方法 |
| 4.1.3 实验结果与讨论 |
| 4.2 质谱鉴定实验 |
| 4.2.1 质谱鉴定实验原理 |
| 4.2.2 质谱鉴定实验方法 |
| 4.2.3 质谱鉴定结果 |
| 4.3 差异表达蛋白质的生物信息学分析 |
| 4.3.1 聚类分析 |
| 4.3.2 Gene Ontology(GO)功能分类分析 |
| 4.3.3 生物学通路分析 |
| 4.3.4 蛋白质-蛋白质相互作用网络分析 |
| 4.4 本章小结 |
| 4.5 参考文献 |
| 第五章 纳米银与人皮肤成纤维细胞作用的microRNA测序研究 |
| 5.1 microRNA测序实验样品的制备 |
| 5.1.1 实验材料 |
| 5.1.2 实验仪器 |
| 5.1.3 细胞培养和处理 |
| 5.1.4 microRNA的提取 |
| 5.2 SOLiD测序实验 |
| 5.2.1 实验方法 |
| 5.2.2 实验结果与讨论 |
| 5.3 microRNA靶基因预测 |
| 5.3.1 分析方法 |
| 5.3.2 结果与讨论 |
| 5.4 microRNA靶基因的生物信息学分析 |
| 5.4.1 分析方法 |
| 5.4.2 结果与讨论 |
| 5.5 与氧化应激相关microRNA的筛选和分析 |
| 5.5.1 分析和实验方法 |
| 5.5.2 结果与讨论 |
| 5.6 本章小结 |
| 5.7 参考文献 |
| 第六章 纳米银与人皮肤成纤维细胞作用的生物组学实验结果的联合分析 |
| 6.1 纳米银作用细胞的蛋白质组学和转录组学实验结果的比较 |
| 6.1.1 基因和蛋白质表达数据的获取 |
| 6.1.2 基因和蛋白质表达数据的对比 |
| 6.2 基因、microRNA和蛋白质表达数据的联合分析 |
| 6.2.1 差异表达基因、microRNA和蛋白质涉及的GO功能类别的比较 |
| 6.2.2 差异表达基因、microRNA和蛋白质参与的生物学通路的比较 |
| 6.2.3 匹配microRNA靶基因/靶蛋白质的筛选和分析 |
| 6.3 本章小结 |
| 6.4 参考文献 |
| 第七章 纳米银生物组学实验结果的验证 |
| 7.1 蛋白质组学实验结果的Western blot验证 |
| 7.1.1 Western blot实验蛋白质的挑选原则 |
| 7.1.2 实验材料 |
| 7.1.3 实验方法 |
| 7.1.4 实验结果与讨论 |
| 7.2 microRNA测序实验结果的qRT-PCR验证 |
| 7.2.1 qRT-PCR实验microRNA的挑选原则 |
| 7.2.2 实验材料 |
| 7.2.3 实验仪器 |
| 7.2.4 qRT-PCR实验方法 |
| 7.2.5 结果与讨论 |
| 7.3 肌动蛋白细胞骨架观察 |
| 7.3.1 实验目的 |
| 7.3.2 实验材料 |
| 7.3.3 实验仪器 |
| 7.3.4 主要溶液配制 |
| 7.3.5 实验方法 |
| 7.3.6 实验结果与讨论 |
| 7.4 细胞内ATP水平测定 |
| 7.4.1 实验目的 |
| 7.4.2 实验材料 |
| 7.4.3 实验仪器 |
| 7.4.4 实验方法 |
| 7.4.5 实验结果与讨论 |
| 7.5 细胞凋亡分析 |
| 7.5.1 实验目的 |
| 7.5.2 实验材料 |
| 7.5.3 实验仪器 |
| 7.5.4 实验方法 |
| 7.5.5 实验结果和讨论 |
| 7.6 本章小结 |
| 7.7 参考文献 |
| 第八章 纳米金与人皮肤成纤维细胞作用的microRNA测序研究和生物组学实验结果的联合分析 |
| 8.1 纳米金与人皮肤成纤维细胞作用的microRNA测序实验 |
| 8.1.1 实验材料 |
| 8.1.2 实验仪器 |
| 8.1.3 实验方法 |
| 8.1.4 实验结果与讨论 |
| 8.2 纳米金作用人皮肤成纤维细胞后基因、microRNA与蛋白质表达数据的联合分析 |
| 8.2.1 差异表达基因、microRNA和蛋白质涉及的GO功能类别的比较 |
| 8.2.2 差异表达基因、microRNA和蛋白质参与的生物学通路的比较 |
| 8.2.3 匹配microRNA靶基因/靶蛋白质的筛选和分析 |
| 8.3 本章小结 |
| 8.4 参考文献 |
| 第九章 纳米银、纳米金与人皮肤成纤维细胞作用机制的比较 |
| 9.1 纳米银、金与人皮肤成纤维细胞作用的细胞学实验结果的比较 |
| 9.2 纳米银、金与人皮肤成纤维细胞作用的蛋白质组学实验结果的比较 |
| 9.2.1 差异表达蛋白质的比较 |
| 9.2.2 差异表达蛋白质生物信息学分析结果的比较 |
| 9.3 纳米银与纳米金microRNA测序实验结果的比较 |
| 9.3.1 差异表达microRNA及匹配到的靶基因/靶蛋白质的比较 |
| 9.3.2 匹配靶基因/靶蛋白质功能分类分析结果的比较 |
| 9.3.3 匹配靶基因/靶蛋白质生物学通路分析结果的比较 |
| 9.4 本章小结 |
| 9.5 参考文献 |
| 第十章 总结和展望 |
| 10.1 全文总结 |
| 10.2 展望 |
| 10.3 本论文的创新点 |
| 在校期间发表论文情况 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 附录1 细胞蛋白质的二维凝胶电泳实验(上海中科新生命生物公司提供) |
| 附录2 2D-DIGE实验方法(由上海中科新生命生物科技有限公司提供) |
| 附录3 质谱实验方法(由上海中科新生命生物科技有限公司提供) |
| 附录4 Western blot实验方法(由上海康成生物工程公司提供) |
四、EFFECT OF LOW SELENIUM ON CHONDROCYTE DIFFERENTIATION AND DIFFERENTIAL EXPRESSION OF COLLAGEN TYPES Ⅰ,Ⅱ AND Ⅹ IN ARTICULAR CARTILAGE FROM MINI-PIGS（论文参考文献）
- [1]Engineering osteoarthritic cartilage model through differentiating senescent human mesenchymal stem cells for testing disease-modifying drugs[J]. Ning Wang,Yuchen He,Silvia Liu,Meagan J.Makarcyzk,Guanghua Lei,Alexander Chang,Peter G Alexander,Tingjun Hao,Anne-Marie Padget,Nuria de Pedro,Tsapekos Menelaos,Hang Lin. Science China（Life Sciences）, 2022(02)
- [2]缺硒通过LncRNA TCONS18040481/miR-7b调控TNFR1诱导鸡肝细胞程序性坏死的研究[D]. 李晓晶. 东北农业大学, 2020
- [3]肉鸡TD差异基因的筛选及柚皮苷和漆树酸的治疗作用[D]. 姜汹. 华中农业大学, 2020
- [4]低剂量持续暴露双酚A对小鼠生殖毒性的影响[D]. 张石磊. 河北农业大学, 2020(01)
- [5]蛋种鸭饲粮硒、碘缺乏对母子代抗氧化功能与骨骼品质影响研究[D]. 徐闰胜. 佛山科学技术学院, 2020(01)
- [6]基质刚度对人脂肪间充质干细胞成软骨分化的影响[D]. 于庆贺. 南方医科大学, 2020
- [7]未培养骨髓单个核细胞对软骨细胞分化和基质分泌影响的实验研究[D]. 欧阳晓. 南京医科大学, 2016(02)
- [8]GDF15和S100A2在结直肠癌中的表达与功能研究[D]. 李晨. 浙江大学, 2016(02)
- [9]细胞因子在骨性关节炎的发生及治疗方面的相关研究[D]. 胡爱心. 武汉大学, 2015(01)
- [10]基于生物组学方法的纳米银细胞毒性机理研究[D]. 黄炎. 东南大学, 2015(08)