H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体IPMA检测方法的建立

论文摘要

本试验旨在建立一种针对检测抗H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体的免疫过氧化物酶单层细胞试验（immunoperoxidase monolayer assay,IPMA）筛选方法。通过优化MDCK细胞接毒量、细胞接毒后培养时间、封闭液的种类和工作浓度、工作时间等各个反应条件,并对建立的IPMA筛选方法的特异性、敏感性和重复性进行评价。结果显示,建立的IPMA检测方法的最优反应条件为MDCK细胞接毒102.63TCID50/100μL H1N1亚型猪流感病毒,37℃培养24 h,含3‰H2O2的甲醇室温固定15 min,5%脱脂乳37℃封闭2 h,50μL杂交瘤细胞上清作为一抗,37℃孵育2 h,羊抗鼠HRP-IgG二抗37℃孵育1 h。所建立的IPMA方法能特异性地检测H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体,与猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪圆环病毒2型（PCV2）和猪瘟病毒（CSFV）阳性血清不发生交叉反应;其敏感性检测结果显示,可检测1∶3 200的HI=2-9标准H1N1猪阳性血清;批间和批内重复性试验结果较好。综上所述,本试验成功建立了抗H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体的IPMA检测方法,该方法特异性强、敏感性高、重复性好,为生产鉴定H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体提供了一种简便、实用、有效的检测手段。

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文章来源

类型: 期刊论文

作者: 石建州,李青梅,王彦红,刘肖,李鸽,郭军庆,邓瑞广,张改平

关键词: 亚型猪流感病毒,单克隆抗体

来源: 中国畜牧兽医 2019年09期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 河南省农业科学院动物免疫学重点实验室,河南农业大学,南阳师范学院,扬州大学江苏高校动物重要疾病与人兽共患病防控协同创新中心

基金: 国家重点研发计划(2016YFD0500701)

分类号: S852.65

DOI: 10.16431/j.cnki.1671-7236.2019.09.024

页码: 2691-2698

总页数: 8

文件大小: 3214K

下载量: 156

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