人IgE Fc原核表达载体的构建、表达、纯化及对肥大细胞脱颗粒的抑制作用

人IgE Fc原核表达载体的构建、表达、纯化及对肥大细胞脱颗粒的抑制作用

论文摘要

目的探讨人IgE Fc原核表达载体的构建、表达、纯化及对肥大细胞脱颗粒抑制作用。方法以pEGFP-N1/IgE Fc真核表达载体为模版,用聚合酶链反应(PCR)方法扩增IgE Fc编码序列,通过镍柱亲和层析进一步纯化获得的蛋白质,采取酶联免疫吸附试验检测致敏肥大细胞中β-己糖胺酶和细胞因子。结果致敏肥大细胞中,抗原蛋白的表现形式主要是以涵体的模式存在且被成功纯化;pET-32a(+)-IgE Fc作用于未被致敏的RBL-2H3细胞后,RBL-2H3细胞的细胞膜平滑,细胞紧密贴覆于细胞壁,形态为梭形。结论 pET-32 a(+)-IgE Fc可抑制肥大细胞的脱颗粒,但不会对致敏肥大细胞活性造成影响,为人IgE Fc和哮喘等过敏性疾病研究提供了理论基础。

论文目录

  • 1 实验材料与方法
  •   1.1 研究材料
  •   1.2 pET-32a(+)-IgE Fc载体的构建
  •   1.3 IgE Fc蛋白的原核表达、纯化及定性分析
  •   1.4 pET-32a(+)-IgE Fc作用致敏的RBL-2H3细胞SOC通道的影响
  • 2 结果
  •   2.1 小量提取质粒后,双酶切初步鉴定
  •   2.2 pET-32a(+)-IgE Fc对致敏的RBL-2H3细胞SOC通道的作用
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 李雪飞,陆海涛,刘利君,杨宁,马丽娜,吴景良,牛艳东,段昕所

    关键词: 肥大细胞脱颗,原核载体构建,表达,纯化

    来源: 中国皮肤性病学杂志 2019年11期

    年度: 2019

    分类: 医药卫生科技,基础科学

    专业: 生物学,基础医学

    单位: 承德医学院附属医院

    基金: 承德市科学技术项目(201606A045)

    分类号: R392

    DOI: 10.13735/j.cjdv.1001-7089.201903152

    页码: 1251-1254

    总页数: 4

    文件大小: 640K

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