响应面优化南极磷虾蛋白酶解工艺及蛋白肽组分分析

论文摘要

以南极磷虾蛋白酶解液中的氨基氮含量为指标,采用甲醛电位滴定法测定胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、胃蛋白酶、风味蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶6种生物酶在其最适酶解条件下对南极磷虾蛋白酶解效果,筛选出酶解南极磷虾蛋白最佳生物酶。在单因素试验基础上,以酶解液中氨基氮含量为响应值,选择酶解温度、时间、pH为自变量,通过三因素三水平Box-Bohnken响应面分析法对筛选出来的生物酶解工艺进行优化。在优化酶解工艺的基础上,利用SDS-PAGE凝胶电泳方法分析南极磷虾酶解蛋白肽及南极磷虾蛋白的分子量分布范围。结果表明:胰蛋白酶为酶解南极磷虾蛋白的理想蛋白酶;响应面分析法建立二次多项回归方程:Y=51.07-0.83A+1.72B-2.06C+0.25AC+1.15BC-3.06A2-2.77B2-3.69C2,模型p<0.0001,而失拟项p>0.05,表明模型极显著且比较稳定,通过模型分析得最佳条件:酶解温度44.48℃、酶解时间8.52 h、pH 7.88,考虑实际应用可行性,我们在酶解温度45.0℃、酶解时间8.5 h,pH 7.9条件下实验得到的氨基氮含量为50.96±1.07mg/g,与理论预测值51.57mg/g基本一致。通过电泳分析得到南极磷虾蛋白分子量范围在15 ku以上,主要集中分子量范围为15 ku～45 ku;胰蛋白酶解多肽分子量在25 ku以下,主要分子量分布在5 ku以下。

论文目录

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验原料

1.1.2 酶制剂

1.1.3 主要试剂

1.2 主要仪器与设备

1.3 实验方法

1.3.1 氨基氮含量的测定

1.3.2 生物酶解效果实验

1.3.3 单因素实验

1.3.4 响应面实验设计

1.3.5 SDS-PAGE电泳分析

1.3.5. 1 marker的选取

1.3.5. 2 电泳凝胶的制备

1.3.5. 3 染色方法的选取

1.3.5. 4 电泳条件

1.4 数据分析

2 结果与分析

2.1 不同生物酶对南极磷虾蛋白的酶解效果

2.2 单因素实验结果

2.2.1 酶底浓度对南极磷虾蛋白酶解效果的影响

2.2.2 酶解温度对南极磷虾蛋白酶解效果的影响

2.2.3 酶解时间对对南极磷虾蛋白酶解效果的影响

2.2.4 初始p H对对南极磷虾蛋白酶解效果的影响

2.3 响应面结果分析

2.3.1 响应面因素水平设计

2.3.2 响应面设计方案、方差及可信度分析

2.3.3 响应曲面图分析

2.3.4 验证性实验

2.4 南极磷虾蛋白肽分子量电泳分析

3 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 刘云姣,张海燕,刘淑晗,汪宇,韩峰,孔聪,王媛,张璇,沈晓盛

关键词: 南极磷虾,甲醛电位滴定法,生物酶,响应面法

来源: 现代食品科技 2019年01期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑

专业: 轻工业手工业

单位: 上海海洋大学食品学院,中国水产科学研究院东海水产研究所

基金: 国家自然科学基金项目(31471672),上海市自然科学基金项目(17ZR1439400),中央级公益性科研院所基本科研业务费(1893-Z)

分类号: TS254.4

DOI: 10.13982/j.mfst.1673-9078.2019.1.021

页码: 144-151+280

总页数: 9

文件大小: 2010K

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