藜麦麸过氧化物酶分离纯化及酶学特性研究

藜麦麸过氧化物酶分离纯化及酶学特性研究

论文摘要

经浸提、硫酸铵分级沉淀和DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换层析,从藜麦麸中纯化得到了电泳纯的过氧化物酶(peroxidase,POD),其纯化倍数、比活力和回收率分别为23.78,22 753.09 U/mg和19.36%。经SDS-PAGE鉴定,该酶相对分子质量为57.1 ku。在催化愈创木酚与过氧化氢的反应中,酶的最适温度为60℃,最适pH值为6.0,在40~60℃及pH值4~8范围内具有较好的稳定性。以H2O2为底物,测得该酶的Km值为5.61 mmol/L。尿素、Mg2+和Fe3+对酶有激活作用,当其浓度为50 mmol/L时,酶活力被分别激活至119%,117%,161%;K+,Ca2+对藜麦麸POD无显著影响;甲醇,乙醇,异丙醇,正丁醇,KSCN,SDS,Zn2+,Cu2+,Mn2+对酶有抑制作用,其中,正丁醇和SDS对酶的抑制作用很强,当正丁醇体积分数为20%,SDS浓度为10 mmol/L时,酶的活性完全丧失。

论文目录

  • 1 材料和方法
  •   1.1 材料与试剂
  •   1.2 仪器与设备
  •   1.3 方法
  •     1.3.1 粗酶液的制备
  •     1.3.2 硫酸铵分级沉淀
  •     1.3.3阴离子交换层析
  •     1.3.4 藜麦麸POD相对分子质量测定
  •     1.3.5 POD活性测定
  •     1.3.6 蛋白质浓度测定
  •     1.3.7 藜麦麸POD酶学性质研究
  •       1.3.7. 1 米氏常数 (Km) 的测定
  •       1.3.7.2最适温度和热稳定性的测定
  •       1.3.7.3藜麦麸POD最适pH值和pH稳定性的测定
  •       1.3.7. 4 部分有机试剂对藜麦麸POD活力的影响
  •       1.3.7. 5 部分化合物对藜麦麸POD活力的影响
  •       1.3.7. 6 部分金属离子对藜麦麸POD活力的影响
  • 2 结果与分析
  •   2.1 藜麦麸POD的分离纯化
  •   2.2 分子质量测定及活性鉴定结果
  •   2.3 藜麦麸POD的理化性质
  •     2.3.1 米氏常数 (Km) 的测定
  •     2.3.2 最适温度与温度稳定性
  •     2.3.3 最适pH值和pH稳定性
  •     2.3.4 有机溶剂对藜麦麸POD活性的影响
  •     2.3.5 不同化合物对藜麦麸POD活性的影响
  •     2.3.6 金属离子对藜麦麸POD活性的影响
  • 3 结论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 杨晓月,李小平,李晨

    关键词: 藜麦麸,过氧化物酶,分离纯化,酶活力

    来源: 山西农业科学 2019年06期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,工程科技Ⅰ辑

    专业: 轻工业手工业

    单位: 山西大学生命科学学院

    基金: 山西省自然科学基金项目(2015021047),山西省高校科技创新项目(2016116)

    分类号: TS210.9

    页码: 977-981+997

    总页数: 6

    文件大小: 590K

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