化学发光酶免疫法测定动物源性食品中呋喃唑酮代谢物的含量

化学发光酶免疫法测定动物源性食品中呋喃唑酮代谢物的含量

论文摘要

目的建立化学发光酶免疫法(chemiluminescent enzyme immunoassay, CLEIA)测定动物源食品中呋喃唑酮代谢物的分析方法。方法通过使用N-羟基琥珀酰亚胺酯法将衍生的CPAOZ半抗原与卵白蛋白(ovalbumin, OVA)缀合以合成包被抗原,优化CLEIA酶免疫方法的主要条件。对CLEIA酶免疫法的灵敏度、特异性、精密度及准确度进行评价,并就准确度指标同国家标准中的液相色谱串联质谱法进行对比分析。结果包被原和单克隆抗体稀释倍数分别为4000倍和1600倍, 1%脱脂乳封闭,竞争时间30 min, HRP-IgG孵育时间60 min时为最佳条件。CLEIA的线性方程为Y=-0.357X+1.459(r2=0.984), IC50为0.486 ng/mL,线性范围为0.070~3.362 ng/mL。回收率在87.9%~92.6%之间,批内和批间变异系数分别为3.6%~7.5%和3.2%~6.3%。结论该方法简单,快速,可用于实验室或现场动物源性食品的AOZ筛选。

论文目录

  • 1 引言
  • 2 材料与方法
  •   2.1 仪器与试剂
  •   2.2 实验方法
  •     2.2.1 溶液配制
  •     2.2.2 半抗原和抗原的合成
  •       (1) 合成半抗原CPAOZ
  •       (2) 合成包被原CPAOZ-OVA
  •     2.2.3 化学发光液体系统的组合和优化
  •       (1) 配制化学发光液
  •       (2) 选择增强剂及氧化剂
  •     2.2.4 CLEIA法条件优化
  •       (1) CLEIA法操作步骤
  •       (2) 包被原CPAOZ-OVA和单克隆抗体的最佳稀释组合
  •       (3) 封闭液脱脂乳的浓度
  •       (4) 竞争时间
  •       (5) HRP-IgG孵育时间
  •     2.2.5 为AOZ建立和评估CLEIA
  •       (1) 灵敏度
  •       (2) 特异性
  •       (3) 准确度和精度
  • 3 结果与分析
  •   3.1 Hapten和抗原的鉴定
  •     3.1.1 CPAOZ的鉴定
  •     3.1.2 包被原CPAOZ-OVA的鉴定
  •   3.2 化学发光液体系统的组合和优化
  •     3.2.1 增强剂和增氧剂的测定
  •     3.2.2 增强剂对碘苯酚浓度的确定
  •     3.2.3 鲁米诺浓度的确定
  •     3.2.4 过氧化氢脲浓度的确定
  •   3.3 确定CLEIA法的最优反应条件
  •   3.4 AOZ酶免疫测定的建立和评价
  •     3.4.1 灵敏度
  •     3.4.2 特异性
  •     3.4.3 准确度和精度
  • 4 结论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 温丹华,高丽霞,史晓亚,黄登宇

    关键词: 呋喃唑酮,氨基恶唑烷酮,化学发光酶免疫分析,硝基呋喃

    来源: 食品安全质量检测学报 2019年07期

    年度: 2019

    分类: 工程科技Ⅰ辑

    专业: 轻工业手工业

    单位: 山西大学生命科学学院,山西省市场监督管理局

    分类号: TS207.3

    页码: 2023-2032

    总页数: 10

    文件大小: 1767K

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