利用CRISPR/Cpf1系统构建人ABCG1和ABCG4基因敲除的293T细胞株

论文摘要

【目的】基于CRISPR/Cpf1（AsCpf1/LbCpf1）技术构建人ABCG1和ABCG4基因敲除的人胚肾细胞（HEK293T）稳定细胞株,旨在研究ABCG1和ABCG4基因的生物学功能。【方法】针对ABCG1和ABCG4基因作用的功能域,设计2对靶向ABCG1和ABCG4基因前7个外显子的sgRNA序列,分别克隆到AsCpf1和LbCpf1的载体上。将测序验证正确的重组质粒转染到HEK293T细胞中,T7E1酶切和测序验证敲除效率,对敲除成功的293T细胞利用有限稀释法筛选获得基因双突变的敲除细胞株,对其基因组进行PCR扩增并双向测序验证编辑结果,选择有正确编辑结果的PCR产物进行TA克隆,进而测序验证单克隆细胞株编辑效率。【结果】结果获得敲除ABCG1和ABCG4基因的稳定细胞株各1株（AsCpf1-ABCG1-sgRNA 1-1和LbCpf1-ABCG4-sgRNA 2-1）。【结论】通过利用新型基因编辑技术CRISPR/Cpf1系统,获得了永久性敲除目的细胞靶基因的细胞株,可为进一步探索和证实ABCG1和ABCG4在细胞中胆固醇代谢和调节作用提供帮助。

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文章来源

类型: 期刊论文

作者: 覃鸿妮,谢钰珍,马傲,蔡一林

关键词: 基因敲除,稳定细胞株

来源: 西南农业学报 2019年04期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学

单位: 苏州工业园区服务外包职业学院,西南大学玉米研究所

基金: 重庆市重大项目(cstc2016shms-ztzx80016),苏州市高职高专院校教改项目(2017SZJG015),苏州工业园区服务外包职业学院科研项目(ky-xjy703)

分类号: Q78

DOI: 10.16213/j.cnki.scjas.2019.4.007

页码: 741-750

总页数: 10

文件大小: 17012K

下载量: 184

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标签：基因敲除论文;  稳定细胞株论文;