抗铁蛋白杂交瘤细胞无血清培养技术研究

论文摘要

杂交瘤细胞具有无限繁殖和抗体分泌的双重优势,其规模化培养工艺是当前生产抗体产品的重要技术。规模化无血清培养杂交瘤细胞具有简化工艺、降低生产成本、提高抗体产量等优点。本文研究了血清对骨髓瘤及杂交瘤细胞生长的影响,在此基础上研发了适合杂交瘤细胞生长的无血清培养基,并进一步研究了杂交瘤细胞无血清培养基的转瓶扩大培养,主要内容包括以下几个部分:第一,配制含不同血清浓度（10%、7.5%、5%）的DMEM培养基,将生长状态良好、处于对数期的5H2、Sp2/0-Ab、Sp2/0三种细胞分别以三种不同的接种密度接种到含上述培养基的12孔细胞培养板中,考查了不同血清浓度、不同接种密度对细胞生长与增殖的影响。通过细胞计数仪测量的数据表明血清浓度对三种细胞都有较大影响,三种细胞在10%血清浓度培养基中正常生长而在低血清浓度中不能正常生长,在相同的血清浓度下,具有高细胞接种密度的细胞增殖较快并且倍增时间短。第二,将DMEM培养基、Ham’s F-12培养基和RPMI1640培养基按照一定比例配制成基础培养基,在此基础上加入不同量的胰岛素、水解蛋白、转铁蛋白、胆固醇和乙醇胺等成分配制成无血清低蛋白培养基。通过细胞的无血清驯化培养考查了细胞在配制的无血清培养基和市售的无血清培养基中的生长情况,结果表明,配制的Z4培养基与市售培养基有相同的效果,细胞可以正常生长。第三,用Z4和H-SFM培养基分别进行5H2细胞转瓶批培养,测量培养基中葡萄糖、谷氨酰胺、乳酸、氨及抗体浓度的变化情况。结果表明,H-SFM培养基细胞数量在第5天达到最高点14.57×105个/mL,抗体生成速率明显提高,到第7天时抗体浓度为39μg/mL。Z4培养基细胞数量在第6天达到最高点19.87×105个/mL,第7天时抗体浓度为56μg/mL。Z4培养基和H-SFM培养基中葡萄糖和谷氨酰胺浓度都呈现下降趋势,乳酸和氨浓度都呈上升趋势,适当提高葡萄糖和谷氨酰胺的起始浓度细胞生长也会有所提升。

论文目录

摘要

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第1章绪论

1.1 杂交瘤细胞概述

1.1.1 杂交瘤细胞的定义及优点

1.1.2 单克隆抗体的制备

1.1.3 单克隆抗体的应用

1.1.4 单克隆抗体的纯化方法

1.2 规模化培养

1.2.1 规模化培养概述

1.2.2 规模化培养的方法

1.3 本文研究目的和研究内容

第2章血清对骨髓瘤和杂交瘤细胞的影响

2.1 引言

2.2 实验部分

2.2.1 实验材料

2.2.2 实验方法

2.3 结果与讨论

2.3.1 血清浓度对5H2细胞生长的影响

2.3.2 血清浓度对Sp2/0-Ab细胞生长的影响

2.3.3 血清浓度对Sp2/0 细胞生长的影响

2.4 本章总结

第3章骨髓瘤和杂交瘤细胞无血清培养基的制备

3.1 引言

3.2 实验部分

3.2.1 实验材料

3.2.2 实验方法

3.3 结果与讨论

3.3.1 配制多种无血清培养基

3.3.2 5H2细胞的无血清培养

3.3.3 Sp2/0-Ab细胞的无血清培养

3.3.4 杂交瘤无血清培养基的驯化比较

3.3.5 各种培养基的价格对比

3.4 本章总结

第4章杂交瘤细胞无血清培养基的转瓶批培养代谢特性

4.1 引言

4.2 实验部分

4.2.1 实验材料

4.2.2 实验方法

4.3 结果与讨论

4.3.1 5H2细胞在H-SFM中的无血清转瓶批培养

4.3.2 5H2细胞在Z4中的无血清转瓶批培养

4.3.3 抗体纯化

4.4 本章总结

第5章结论与展望

5.1 主要结论

5.2 工作展望

参考文献

致谢

一、攻读学位期间发表的论文

二、攻读学位期间获得的荣誉

文章来源

类型: 硕士论文

作者: 刘素生

导师: 张东浩,程华

关键词: 血清浓度,细胞数量,单克隆抗体,无血清培养基

来源: 河北大学

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: 河北大学

分类号: Q813.11

总页数: 70

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