百合荧光SSR标记体系构建及引物筛选

百合荧光SSR标记体系构建及引物筛选

论文摘要

为了确定百合荧光SSR-PCR反应的最佳体系,对反应体系和程序中的模板DNA、酶量和退火温度进行了优化筛选。结果表明,适用于百合的荧光SSR-PCR反应体系为:总体系为20μl,10×PCR buffer(Mg2+)2μl,2.5 mM dNTP 1μl,正、反引物各0.5μl,模板DNA 40 ng,Taq酶1 U,用ddH2O补足。反应程序为:94℃预变性5 min,94℃(30 s)/58℃(45 s)/72℃(45 s)35个循环,最后72℃延伸10 min。利用优化后的反应体系对百合SSR引物进行筛选,从50对引物中筛选出6对多态性高的SSR引物,并通过合成荧光标记引物对77个百合品(野生)种进行复选,验证了6对引物的稳定性。该研究为百合的遗传多样性分析、分子标记辅助育种等方面的进一步研究提供了技术支持。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 试验材料
  •   1.2 试验试剂
  •   1.3 DNA提取及检测
  •   1.4 SSR-PCR反应体系优化
  •     1.4.1 DNA和酶量
  •     1.4.2 退火温度
  •   1.5 引物筛选及验证
  •     1.5.1 初选
  •     1.5.2 复选验证
  • 2 结果与分析
  •   2.1 百合DNA提取
  •   2.2 SSR-PCR反应条件的优化
  •     2.2.1 DNA和酶量对SSR-PCR反应的影响
  •     2.2.2 退火温度对SSR-PCR反应的影响
  •   2.3 引物筛选
  •     2.3.1 初选
  •     2.3.2 复选验证
  • 3 结论与讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 周俐宏,石慧,王志刚,蔡忠杰

    关键词: 百合,荧光标记,引物筛选

    来源: 辽宁农业科学 2019年05期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,基础科学

    专业: 生物学

    单位: 辽宁省农业科学院花卉研究所,沈阳农业大学植物保护学院

    基金: 沈阳市科技计划项目(18-013-0-06),辽宁省科学技术计划项目(2018010392-301)

    分类号: Q943.2

    页码: 1-6

    总页数: 6

    文件大小: 1125K

    下载量: 141

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