猪繁殖与呼吸综合征商品活疫苗中盖他病毒的分离与鉴定

猪繁殖与呼吸综合征商品活疫苗中盖他病毒的分离与鉴定

论文摘要

在疫苗生产过程中,外源病毒造成疫苗污染的现象屡有发生。本文在对某猪场的猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS)减毒活疫苗进行外源病毒检测时,发现盖他病毒(Getah virus,GETV)为阳性。经病毒分离、纯化及鉴定,获得一株GETV分离物,将其命名为GETV-V1。GETV-V1与GenBank中GETV全基因序列相似性为97.3%~99.2%。遗传进化分析显示,GETV-V1与日本毒株14-I-605-C1、12IH26及中国毒株HB0234等处于同一进化分支,与本室分离的猪源GETV毒株HNJZ-S1的全基因序列(KY363862)相似性为99.1%,两者E2基因推导氨基酸序列相似性为99.8%。对同一厂家4批次市售同种疫苗和相应批次留样疫苗RT-PCR检测均为GETV阳性,第三方实验室和疫苗生产厂家分别独立进行的RT-PCR检测得出同样结果。测序结果表明,所有被测样品中E2基因与GETV已知相应序列的相似性均在98%以上。本研究首次报道了我国PRRS减毒活疫苗中GETV的污染,不仅表明猪用活疫苗外源病毒监测标准有待改进,而且提示要重视该病毒污染在疫苗生产、保存和使用过程中潜在的公共卫生风险。

论文目录

  • 材料与方法
  •   1疫苗、细胞系及主要试剂
  •   2引物合成
  •   3 PRRS疫苗中GETV的分离与传代
  •   4 RNA提取与RT-PCR检测
  •     4.1对疫苗的直接检测
  •     4.2对疫苗接种细胞后的培养物进行检测
  •     4.3 RT-PCR操作
  •   5 GETV的纯化及在Marc-145细胞中增殖动态
  •     5.1 GETV的纯化
  •     5.2 GETV在Marc-145细胞中一步生长曲线测定
  •   6间接免疫荧光鉴定Marc-145细胞中GETV
  •   7透射电镜观察细胞内GETV形态
  •   8 GETV全基因扩增与测序
  •   9 GETV全基因序列分析
  •   10 GETV E2基因截取与分析
  • 结果
  •   1两个独立的实验室及疫苗厂家均直接从PRRS疫苗原样中检测到GETV
  •   2从PRRS疫苗接种细胞上清中检测到GETV
  •   3PRRS疫苗中的GETV获得纯化及其在Marc-145细胞中一步生长曲线
  •   4 IFA检测及电镜观察分离物均符合GETV特征
  •   5 GETV-V1毒株全基因序列特征
  •   6 GETV-V1毒株全基因核苷酸序列特征
  •   7 GETV-V1毒株基因序列进化分析
  •   8 E2基因推导的氨基酸序列分析
  •   9 GETV-V1分离物E2基因的氨基酸序列特征
  • 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 周峰,王傲杰,常洪涛,王新港,崔丹丹,陈陆,杜季梅,刘红英,杨霞,王新卫,王川庆

    关键词: 猪繁殖与呼吸综合征疫苗,盖他病毒污染,分离鉴定,透射电镜,间接免疫荧光试验,序列分析,公共卫生安全

    来源: 病毒学报 2019年03期

    年度: 2019

    分类: 基础科学,医药卫生科技,农业科技

    专业: 生物学,畜牧与动物医学

    单位: 河南农业大学牧医工程学院

    基金: 河南省高等学校重点科研项目计划(项目号:18A230008),题目:猪盖塔病毒分离培养平台的建立与在疫苗研究中的应用,国家自然科学基金(项目号:3177131377),题目:伪狂犬病病毒编码prv--miR--LLT11a靶向调节SLA-I机制及免疫学效应~~

    分类号: S852.651

    DOI: 10.13242/j.cnki.bingduxuebao.003536

    页码: 486-496

    总页数: 11

    文件大小: 4628K

    下载量: 160

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