导读:本文包含了志贺毒素亚单位论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:毒素,单位,大肠杆菌,血性,单克隆抗体,免疫,噬菌体。
志贺毒素亚单位论文文献综述
黄明明[1]（2014）在《肠出血性大肠杆菌志贺毒素Ⅰ型A亚单位(Stx1A)的表达及其单克隆抗体的制备》一文中研究指出肠出血性大肠杆菌(Enterohemorrhagic E. coli, EHEC)感染是一种重要的人畜共患病,在世界各地包括发达及发展中国家都有流行,其感染具有暴发性、强烈的致病性与致死性等特点,已成为全球性的公共卫生问题,对人类健康构成巨大威胁。EHEC感染可使人患腹泻(Diarrhea)、出血性结肠炎(Hemorrhagic Colitis, HC),还可引发溶血性尿毒综合征(Hemolytic Uremic Syndrome, HUS)、血栓性血小板减少性紫癜(Thromboric Thromobocytopenic Porpura, TTP)等严重并发症,特别是HUS可对患者肾脏造成不可恢复性的功能损伤,病死率较高。EHEC所分泌的志贺毒素(Shiga toxin, Stx)是介导细菌致病的重要因子,Stx可以穿越破损的肠上皮细胞进入血液循环,与其受体-丙糖酰基鞘氨醇(globotriaosylceramide, Gb3)或丁糖酰基鞘氨醇(globotetraosylceramide, Gb4)结合,造成肠道、中枢神经系统等器官的损伤,特别是Gb3受体含量较高的肾脏,受损后易引发HUS,危及生命。因此,Stx已经成为诊断、治疗EHEC感染及其并发症的靶向分子,本研究旨在制备StxⅠ型A亚单位(Stx1 A)勺单克隆抗体。根据GenBank公布的Stx1A基因序列设计引物,以EHEC O157:H7分离株基因组DNA为模板,PCR扩增出具有完整开放阅读框架(Open Reading Frames, ORF) Stx1A基因,序列分析表明扩增的Stxl A基因核苷酸序列与GenBank公布序列一致。将Stx1A基因经过限制性内切酶NdeⅠ和XhoⅠ双酶切后连接到pET-22b(+)中,构建原核表达载体pET-22b(+)-Stx1A,转化大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG低温诱导表达重组蛋白Stx1A,重组蛋白Stx1A经细胞破碎仪破碎后,用NiSO4亲和层析柱纯化、PBS透析获得纯化的重组蛋白Stx1A。SDS-PAGE与蛋白质免疫印迹法(Western blotting)结果表明重组蛋白与其预期大小相符,质谱分析结果表明该重组蛋白即为Stx I型A亚单位。重组Stx1A蛋白与弗氏佐剂充分乳化,免疫BALB/c小鼠,经酶联免疫吸附试验(Enzyme Linked Immunosorbent Assay, ELISA)检测、多次有限稀释亚克隆、筛选得到能稳定分泌抗Stx1A单克隆抗体的杂交瘤细胞株6株,分别命名为5D3-H6、10G9-D9、4E2-H4、6E10-D11、8E7-E6、2F6-F8。结果表明其中两株单抗,8E7-E6和2F6-F8能与天然Stx1毒素实现有效的杂交。该两株杂交瘤细胞在体外连续传代3个月和冻存后再复苏均不影响抗体分泌的稳定性。总之,Stx1A特异性单抗的制备为肠出血性大肠杆菌的快速、特异性诊断奠定了基础。(本文来源于《南京农业大学》期刊2014-04-01）
包士中,史晶,蔡昆,侯晓军,高翔[2]（2008）在《志贺毒素B亚单位及其模拟表位的制备和免疫保护效应》一文中研究指出目的:对重组表达的StxB和预测的模拟表位肽进行免疫保护效应评价。方法:用分子生物学方法构建基因工程菌,IPTG诱导表达重组StxB,经复性后进行离子交换层析纯化。同时采用生物信息学手段对StxB的表位相关参数进行分析,预测StxB可能的抗原表位。以纯化的StxB和合成的模拟表位肽免疫小鼠后攻毒,评价StxB及其模拟表位肽的免疫保护效应。结果:表达并制备了90%以上纯度重组StxB;发现p14和p17多肽易形成转角和无规卷曲的柔性区段,可及性、极性和亲水性较强,是可能的抗原表位。免疫保护试验显示,经重组StxB和合成多肽免疫的小鼠发病延迟,症状减轻,存活率显着提高。结论:重组StxB和预测的模拟表位肽具有良好的免疫保护效果,为亚单位疫苗及其作用机制的研究奠定了基础。(本文来源于《军事医学科学院院刊》期刊2008年06期）
罗萍,曾浩,易勇,张卫军,郭鹰[3]（2008）在《EHEC O157∶H7志贺毒素ⅡA1亚单位蛋白的构建表达与免疫原性鉴定》一文中研究指出目的构建表达GST-STX2A1融合蛋白并鉴定其免疫原性。方法通过PCR反应从EHEC O157∶H7EDL933标准株菌中扩增STX2A1基因,将此基因克隆到GST融合蛋白原核表达载体PGEX-6p-1,得到阳性克隆PGEX-6p-1/STX2A1,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导GST-STX2A1融合蛋白的表达,采用亲和层析纯化该蛋白,SDS-PAGE分析其表达量、表达形式和纯度;用纯化的融合蛋白免疫Balb/c小鼠,免疫双向扩散鉴定抗血清效价,Western blotting鉴定抗血清的特异性。结果成功构建重组质粒PGEX-6p-1/STX2A1,经DNA测序证实插入序列与设计完全一致,并在大肠杆菌中表达出Mr约为5.3×104大小的可溶性目的蛋白,经亲和层析纯化后纯度可达90%,免疫Balb/c小鼠产生的抗血清效价为1∶16,Western blotting表明可与天然STX2A蛋白反应。结论在大肠杆菌中成功表达了可溶性的GST-STX2A1融合蛋白,该蛋白具有较好的免疫原性,为O157∶H7亚单位疫苗及制备抗STX2A1的单克隆抗体提供了必要的物质基础。(本文来源于《免疫学杂志》期刊2008年03期）
罗萍,陈洪章,曾明,郭鹰,张卫军[4]（2008）在《肠出血性大肠杆菌O157∶H7志贺毒素ⅡA1亚单位单克隆抗体的制备和生物学特性鉴定》一文中研究指出目的制备出高效价的抗志贺毒素ⅡA1亚单位(STX2A1)的单克隆抗体。方法以重组GST-STX2A1融合蛋白作为免疫抗原,免疫BALB/c小鼠,运用细胞杂交瘤技术制备,以天然STX2毒素为筛选抗原,采用间接ELISA法筛选产生针对STX2A1的单克隆抗体细胞株;以体内诱生法产生腹水,并采用Protein A-Sepharose柱对其纯化,快速定性试纸鉴定McAb的Ig亚类,采用间接ELISA相加实验鉴定抗原识别表位。结果获得3株产生针对STX2A1的单克隆抗体细胞株STX2-1A3、STX2-1E10、STX2-3A7,Ig亚类分别为IgG1λ型、IgG1κ型和IgG3κ,亲和力常数分别为5.76×109、1.21×109和3.97×108。结论成功制备3株稳定分泌抗STX2A1的杂交瘤细胞株,产生的单克隆抗体特异性好,亲和力高,能与天然STX2A亚单位反应。(本文来源于《第叁军医大学学报》期刊2008年08期）
曾晓燕,焦永军,郭喜玲,吴涛,陈银[5]（2008）在《肠出血性大肠杆菌Ⅱ型志贺毒素A亚单位单克隆抗体S1D8的制备和初步应用》一文中研究指出目的:制备肠出血性大肠杆菌(EHEC)Ⅱ型志贺毒素(StxⅡ)A亚单位单克隆抗体,探讨用特异性抗体检测EHEC志贺毒素的可行性。方法:通过基因工程操作制备了EHEC StxⅡA亚单位蛋白-StxⅡA,StxⅡA免疫小鼠制备鼠源单克隆抗体;对获得的抗体S1D8克隆的特异性用Western blot验证;最后用单抗S1D8制备亲和层析柱纯化StxⅡ,用志贺毒素检测试剂盒验证其特异性。结果:成功表达、纯化StxⅡA-GST融合蛋白;从融和的杂交瘤中筛选出一株特异性抗体克隆并命名为S1D8,S1D8在Western blot中可以与StxⅡ的A亚单位特异性结合,用S1D8亲和层析柱从EHEC的培养上清液中纯化了StxⅡ,在胶体金检测试验中StxⅡ阳性。结论:单克隆抗体S1D8的制备为基于毒素分子作为靶分子的EHEC免疫诊断、治疗研究奠定了基础。(本文来源于《江苏预防医学》期刊2008年01期）
陈洪章,曾浩,毛旭虎,罗萍,余抒[6]（2007）在《抗志贺毒素ⅡB亚单位单克隆抗体识别表位的初步鉴定》一文中研究指出目的初步确定抗志贺毒素ⅡB亚单位(Stx2B)单克隆抗体(McAb)1H9、1H10、3E5识别的抗原表位。方法运用DNAstar Protean软件,对Stx2B(1～72aa)全抗原进行表位预测;采用截短法分段构建重组质粒Stx2B50(23～72aa),Stx2B54(1～54aa)。用IPTG诱导表达融合蛋白。对表达产物进行SDS-PAGE蛋白电泳及Westernblot分析。结果1H9、1H10能够识别Stx2B和Stx2B50;3E5能够识别Stx2B、Stx2B50和Stx2B54。结论McAb1H9、1H10识别的抗原表位位于55～72aa,McAb3E5识别的抗原表位位于23～54aa。(本文来源于《第叁军医大学学报》期刊2007年19期）
包士中,王慧,荫俊,杨慧盈,史晶[7]（2006）在《利用噬菌体随机肽库筛选可结合志贺毒素B亚单位的短肽序列》一文中研究指出以制备的重组志贺毒素B亚单位(StxB)为靶标,利用噬菌体展示亲和淘选技术,经4轮筛选,从随机十二肽库中筛选到与StxB结合的一批噬菌体克隆,对特异结合活性较高的27个噬菌体克隆的表面展示肽进行序列测定,其中A6序列出现16次,A9和A3序列分别出现2次和3次。为评价筛选克隆中和毒素毒性的能力,将展示肽出现频率最高的A6噬菌体克隆,体外与志贺毒素孵育进行动物试验,动物存活率达33.3%,表明毒素的毒性得到部分抑制,A6短肽可能发展成为志贺毒素的拮抗剂。(本文来源于《微生物学报》期刊2006年05期）
喻华英,王景林,高丰,康琳,吴东林[8]（2006）在《志贺毒素B(ShT-B)亚单位在两种表达载体中表达形式的分析》一文中研究指出用Kpn Ⅰ和HindⅢ双酶切pGEM-TB3克隆质粒,得到为大小约为225bp的ShT-B基因片段,分别将其插入到经双酶切的pQE40和pQE30表达载体中,构建了两个ShT-B的重组表达质粒pQE40-B3和pQE30-B2,分别转化到E．coli M15,经IPTG诱导后,重组质粒目的蛋白均得到表达。其中,pQE40-B3表达蛋白约占菌体总蛋白的37％,主要为包涵体形式。 pQE30-B2表达蛋白约占菌体总蛋白的16％,主要为可溶性形式,约9．2％。为重组抗原的制备提供了必要的物质基础。(本文来源于《中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十四次学术研讨会、中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十叁次学术研讨会论文集》期刊2006-07-01）
喻华英,高丰,王景林[9]（2005）在《成熟志贺毒素A亚单位(ShT-A)全长与截短片段在E.coli中的表达及多抗制备》一文中研究指出根据G enB ank中Ⅰ型痢疾志贺菌ShT-A基因的核苷酸序列,设计合成了2对引物,分别进行PCR扩增,将PCR产物分别与pGEM-T连接构建了克隆质粒pGEM-TA1和pGEM-TA2。用B amHⅠ和K pnⅠ以及B amHⅠ和X hoⅠ双酶切pGEM-TA1和pGEM-TA2,均得到大小为895 bp的ShT-A基因片段,分别与pQE 30和pET 21a(+)原核重组表达载体连接,构建pQE 30-A2和pET-21A1原核重组表达质粒。工程菌M 15/pQE 30-A 2和BL-21/pET-21A 1经IPTG诱导,SDS-PAGE电泳观察,均没有目的蛋白表达。这表明全长ShT-A可能对E.coli细胞产生毒性作用。DNA s is软件分析ShT-A基因序列,发现在513 bp处有H indⅢ位点,以ShT-A上游引物的B amHⅠ和H indⅢ从pGEM-TA1切出1个513 bp的截短片段,重新插入表达载体pQE 30,经PCR和双酶切鉴定正确后,得到pQE 30-A513重组表达质粒,转化E.coliM 15经IPTG诱导,SDS-PAGE电泳观察,在20 000处出现1条特异性的表达蛋白带,与截短ShT-A513相对分子质量相符。经薄层扫描分析,该截短片段的表达量约占菌体总蛋白的37.4%,主要为包涵体形式。免疫印迹结果表明,表达的重组ShT-A513蛋白同抗ShT-A513鼠多抗有特异性结合。(本文来源于《中国兽医学报》期刊2005年06期）
喻华英,高丰,王景林[10]（2005）在《成熟志贺毒素全长与截短A亚单位在E.coli中的表达及纯化》一文中研究指出应用PCR技术从Ⅰ型痢疾志贺菌(Shigella dysenteriaetype I)中,扩增出约895 bp的成熟ShT-A基因片段,克隆至pGEM-T载体中,经蓝白斑筛选、PCR和双酶切鉴定正确后,命名为pGEM-TA2。测序结果表明,ShT-A与GenBank中ShT-A序列完全一致。用BamHⅠ和KpnⅠ双酶切克隆质粒,得到为895 bp成熟ShT-A与pQE30原核重组表达载体连接,构建原核重组表达质粒。经IPTG诱导,SDS-PAGE电泳观察,没有目的蛋白表达。DNAsis软件分析ShT-A基因序列,发现513 bp处有HindⅢ位点,故以ShT-A上游引物的BamHⅠ和HindⅢ从pGEM-TA2切出一个513 bp的截短片段,重新插入pQE30表达载体,得到pQE30-A513重组表达质粒,转化E.coliM15,经IPTG诱导,SDS-PAGE电泳观察,在20 ku处出现1条特异性的表达蛋白带,与截短ShT-A513分子量相符,表达量约占菌体总蛋白的37.4%,表达形式为包涵体。为抗体的制备提供了必要的物质基础。(本文来源于《微生物学杂志》期刊2005年05期）
志贺毒素亚单位论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:对重组表达的StxB和预测的模拟表位肽进行免疫保护效应评价。方法:用分子生物学方法构建基因工程菌,IPTG诱导表达重组StxB,经复性后进行离子交换层析纯化。同时采用生物信息学手段对StxB的表位相关参数进行分析,预测StxB可能的抗原表位。以纯化的StxB和合成的模拟表位肽免疫小鼠后攻毒,评价StxB及其模拟表位肽的免疫保护效应。结果:表达并制备了90%以上纯度重组StxB;发现p14和p17多肽易形成转角和无规卷曲的柔性区段,可及性、极性和亲水性较强,是可能的抗原表位。免疫保护试验显示,经重组StxB和合成多肽免疫的小鼠发病延迟,症状减轻,存活率显着提高。结论:重组StxB和预测的模拟表位肽具有良好的免疫保护效果,为亚单位疫苗及其作用机制的研究奠定了基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
志贺毒素亚单位论文参考文献
[1].黄明明.肠出血性大肠杆菌志贺毒素Ⅰ型A亚单位(Stx1A)的表达及其单克隆抗体的制备[D].南京农业大学.2014
[2].包士中,史晶,蔡昆,侯晓军,高翔.志贺毒素B亚单位及其模拟表位的制备和免疫保护效应[J].军事医学科学院院刊.2008
[3].罗萍,曾浩,易勇,张卫军,郭鹰.EHECO157∶H7志贺毒素ⅡA1亚单位蛋白的构建表达与免疫原性鉴定[J].免疫学杂志.2008
[4].罗萍,陈洪章,曾明,郭鹰,张卫军.肠出血性大肠杆菌O157∶H7志贺毒素ⅡA1亚单位单克隆抗体的制备和生物学特性鉴定[J].第叁军医大学学报.2008
[5].曾晓燕,焦永军,郭喜玲,吴涛,陈银.肠出血性大肠杆菌Ⅱ型志贺毒素A亚单位单克隆抗体S1D8的制备和初步应用[J].江苏预防医学.2008
[6].陈洪章,曾浩,毛旭虎,罗萍,余抒.抗志贺毒素ⅡB亚单位单克隆抗体识别表位的初步鉴定[J].第叁军医大学学报.2007
[7].包士中,王慧,荫俊,杨慧盈,史晶.利用噬菌体随机肽库筛选可结合志贺毒素B亚单位的短肽序列[J].微生物学报.2006
[8].喻华英,王景林,高丰,康琳,吴东林.志贺毒素B(ShT-B)亚单位在两种表达载体中表达形式的分析[C].中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十四次学术研讨会、中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十叁次学术研讨会论文集.2006
[9].喻华英,高丰,王景林.成熟志贺毒素A亚单位(ShT-A)全长与截短片段在E.coli中的表达及多抗制备[J].中国兽医学报.2005
[10].喻华英,高丰,王景林.成熟志贺毒素全长与截短A亚单位在E.coli中的表达及纯化[J].微生物学杂志.2005
论文知识图
