导读:本文包含了抗独特型抗体论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:抗体,特型,免疫,综合征,病毒,片段,噬菌体。
抗独特型抗体论文文献综述
徐重新,张霄,刘媛,胡晓丹,朱庆[1]（2019）在《抗独特型抗体在食用农产品危害物监控中的应用研究》一文中研究指出食用农产品质量安全危害物来源广、种类多,从产地环境到农业投入品再到收储运环节,生物、化学污染物危害风险几乎伴随整个产供链。对危害物的高效监测,以及探索更为安全的危害物(特别是高毒投入品)替代功能效应物是食用农产品质量安全监控可持续发展的必然要求。基于"免疫网络学说"的抗独特型抗体,因具有模拟抗原表位构象乃至生物活性的特性,已被证实可以用于免疫原功能效应物创制,这为食用农产品质量安全危害物检测或功能替代材料研发提供了新思路。系统梳理了食用农产品产供过程中可能涉及的危害物及其安全风险;全面整理并介绍了抗独特型抗体技术及其在食用农产品质量安全危害物监控中的应用状况;结合作者及所在团队近年科研成果,探讨了抗独特型抗体在食用农产品质量安全危害物监控中的应用前景、存在问题以及拟解决对策。(本文来源于《食品科学技术学报》期刊2019年04期）
李亮亮[2]（2018）在《猪繁殖与呼吸综合征病毒抗独特型抗体Mab2-5G2与MYH9蛋白互作的研究》一文中研究指出猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)感染所致的以母猪流产、死胎或木乃伊胎,同时导致育肥猪和仔猪呼吸障碍的高度传染病。目前,PRRS仍在全球大部分地区流行,尤其是自2006年以来,高致病性PRRS(HP-PRRS)的暴发给养猪业造成巨大的经济损失。虽然全球针对PRRS的防控研究已持续进行了30多年,仍然没有安全有效的疫苗及治疗药物得以认证并推广使用。由于PRRSV的高度变异致使有效疫苗的研发存在较大障碍,因此,有必要尝试开发新型抗病毒策略。前期研究证明PRRSV感染猪后会产生特异性针对GP5和M蛋白的自身抗独特型抗体(Auto-anti-idiotypic antibodies,Aab-2s),其中一部分Aab-2s可与抗GP5抗体分子的抗原结合部位决定簇反应,从而阻断其与抗原结合,即为GP5的“内影像”。这类抗体一方面可作为抗独特型抗体疫苗,同时可以作为筛选和鉴定病毒入侵所需受体的工具。本实验室前期利用所制备的针对PRRSV GP5蛋白的单克隆抗独特型抗体(Mab2-5G2)从PRRSV易感细胞PAM和MARC-145中发现了介导病毒进入靶细胞的重要蛋白,非肌肉肌球蛋白II-A(MYH9),由于Mab2-5G2具有模拟PRRSV囊膜糖蛋白GP5的功能,提示MYH9可能是病毒GP5蛋白结合易感细胞的一个功能性受体蛋白因子,基于前期研究基础,本研究主要目标如下:1.Mab2-5G2与MYH9分子互作的关键区域的确定非肌肉肌球蛋白II(Non-muscle myosin II,NM II)在正常细胞中发挥的生物功能主要包括:细胞迁移、有丝分裂、囊泡转移修复、胞质分裂和细胞因子分泌等。哺乳动物的NM II包含3个亚型,根据其重链命名为NM II-A(MYH9),NM II-B(MYH10),NM II-C(MYH14),叁者的氨基酸同源性高达64%~80%,序列比对分析发现其氨基酸差异主要位于氨基端和羧基端。为了查找Mab2-5G2与MYH9结合的区域,我们首先设计间并引物扩增猪源MYH9全长序列,然后将MYH9基因分成四部分进行扩增,分别克隆到真核表达质粒pCAGEN-HA,瞬时转染真核HEK-293T细胞48 h,收取细胞并借助蛋白免疫印迹试验,初步确定Mab2-5G2的结合区域位于MYH9的羧基端aa 1651-1960,将该区域命名为PRA。2.MYH9蛋白羧基端的关键区域PRA可溶表达和阻断PRRSV感染研究为了探究重组表达的PRA蛋白能否作为一种潜在的受体阻断剂抑制PRRSV感染,我们利用原核表达系统获得可溶的PRA蛋白,通过ELISA和Western blot试验分别证实抗独特型抗体Mab2-5G2结合PRA蛋白。本研究进一步将PRRSV SD16、VR-2332毒株分别与PRA蛋白或PCV2 Cap对照蛋白混合后感染易感细胞,结果显示如下:(1)PRA蛋白在PRRSV易感细胞MARC-145和PAM以及易感细胞系PK-15~(CD163)和CRL-2843~(CD163)上显着阻断PRRSV-2型SD16及VR-2332感染,其阻断效果均呈剂量依赖性。(2)PRA蛋白在PAM和MARC-145细胞中对PRRSV-1型(GZ11-G1和P073-3)和PRRSV-2型(JXA1、VR-2385、CH-1a、GD-HD)的增殖均具有抑制作用。(3)PRA蛋白通过结合PRRSV GP5蛋白来捕获病毒。(4)PRA与PRRSV结合后导致细胞胞浆中MYH9向细胞膜上迁移减少,从而降低PRRSV内化。3.MYH9介导PRRSV进入易感细胞关键区域的确定PRRSV进入宿主细胞主要依靠相关受体介导,其中CD163和MYH9是作为介导PRRSV吸附内化入胞过程中所必需的两个因子。为了探究不同种属MYH9是否均可作为PRRSV感染的重要介导因子并确定MYH9介导病毒入侵的关键区域,首先,分别构建稳定表达猪源CD163的PK-15(PK-15~(CD163)),HEK-293T(HEK-293T~(CD163))和BHK-21(BHK-21~(CD163))的PRRSV易感细胞系,用Blebbistatin(MYH9特异性抑制剂)或siRNA(针对不同种源MYH9)处理这些细胞系,感染病毒48 h。间接免疫荧光,qPCR和Western blot试验结果显示:PRRSV感染水平伴随着MYH9活性或表达下降而降低;然后,用大肠杆菌系统分别表达不同种属的PRA蛋白,证实其对PRRSV感染的均具有阻断作用。比较不同种属PRA氨基酸序列的差异,最后,以猪源PRA为例,对该区域进行逐步截短表达,通过病毒阻断试验筛选获得关键区域为aa1676-1791,同时制备针对该区域的多克隆抗体显着抑制PRRSV感染PAM和MARC-145细胞。由此推断该区域可能是MYH9介导PRRSV入侵的关键区域。4.Mab2-5G2与MYH9结合位点鉴定与功能研究为了探究Mab2-5G2是否可以作为“竞争阻断剂”结合细胞表面MYH9从而影响PRRSV GP5结合MYH9,进而降低病毒的感染。本研究在PAM细胞上初步证实Mab2-5G2具有抵抗PRRSV感染的作用。同时Mab2-5G2对PRRSV SD16,JXA1,CH-1a,VR-2332,VR-2385和GD-HD等不同毒株均具有阻断效果。为查找Mab2-5G2与MYH9的结合位点,首先构建PRA截短体,以及合成多肽,借助ELISA和Western blot技术逐步缩小与Mab2-5G2结合的范围;通过抗体测序获得Mab2-5G2 Fab序列,分别借助同源建模方法获得Mab2-5G2 Fab与MYH9结合的空间结构。通过Chimera软件对两者进行分子对接(Docking),初步确定Mab2-5G2结合MYH9的位点位于MYH9的羧基端E1670,K1673,E1679和I1683;通过构建重组表达PRA突变体(PRA~(1670),PRA~(1673),PRA~(1679),PRA~(1683)和PRA~(1670,1673,1679,1683))进行Mab2-5G2结合活性和病毒阻断的功能验证。结果显示,PRA突变体蛋白与Mab2-5G2及与病毒粒子结合活性以及阻断PRRSV的内化能力明显下降。由此推断,E1670,K1673,E1679和I1683可能是PRRSV囊膜蛋白GP5结合MYH9入侵易感细胞的结合位点。本研究鉴定出Mab2-5G2的结合区域位于MYH9的羧基端PRA(aa1651-1960),重组表达PRA具有良好的抗PRRSV活性,PRA可通过与细胞内源性MYH9竞争结合病毒的GP5蛋白,降低病毒的内化,抑制PRRSV感染。同时证实不同种属MYH9均参与病毒复制,借助阻断试验确定结合PRRSV的关键区域位于aa1676-1791。进一步研究发现Mab2-5G2对PRRSV感染具有明显地阻断作用,通过同源建模和分子对接预测Mab2-5G2与PRA结合位点为E1670,K1673,E1679和I1683,并进行了相关的功能验证,本研究进一步揭示PRRSV进入机制和开发新型抗病毒制剂提供理论依据。(本文来源于《西北农林科技大学》期刊2018-10-01）
王淼[3]（2017）在《prM抗独特型抗体对登革病毒感染的免疫保护性研究》一文中研究指出登革病毒(dengue virus,DENV)是一种正链RNA病毒,在分类学上属于黄病毒属,分为4种血清型(DENV1-4)。四种不同血清型的登革病毒可以共循环在同一地区。初次感染登革病毒的患者出现轻微的登革热症状,其体内产生的抗体能够对同一类型的病毒产生长时间的保护作用,但是二次异型感增加患者出现登革重症疾病的风险,出现威胁生命的登革出血热(DHF)和登革休克(DSS)症状。异型交叉反应的抗体介导了病毒与Fcγ受体细胞的结合,促进了登革病毒进入Fcγ受体细胞,这个过程被成为抗体依赖增强作用(antibody dependent enhancement,ADE)。许多研究表明人对登革病毒产生免疫应答的抗原主要是登革病毒的前膜prM蛋白,体内外研究证实prM抗体增加了登革病毒的感染能力。在这篇研究中,通过空斑中和实验,我们发现了一种能够中和DENV-1的兔源性多抗。荧光定量PCR结果证明了DENV-2人免疫血清和鼠源性prM单抗显着增加培养上清中的DENV-1的核酸拷贝数,流式细胞仪显示DENV-2人免疫血清和鼠源性prM单抗显着增加DENV-1对K562细胞的感染率。随后,我们通过向Balb/c小鼠免疫鼠源性prM单抗获得了较高滴度的prM抗独特型抗体(prM-AIDs)。荧光定量PCR结果表明prM-AIDs能够显着地抑制鼠源性prM单抗介导的DENV-1对K562细胞的感染,其抑制率最高达到90%。为了进一步探究是否prM-AIDs也能在体内抑制ADE作用,我们建立了以一种干扰素-α和γ受体缺陷的AG6小鼠为背景的登革病毒ADE模型。荧光相对定量PCR检测AG6小鼠外周血细胞中的病毒变化,空斑实验检测血浆中的活病毒粒子。显微镜计数血小板数量,ELISA试剂盒测定感染感染第叁天时AG6小鼠的IL-10和ALT水平。实验结果显示鼠源性prM单抗增加了小鼠体内的病毒滴度,升高了血浆中的白介素IL-10和转氨酶ALT,减少了血小板的数量。然而,注射prM-AIDs降低了小鼠体内的病毒滴度、IL-10和ALT水平。重要的是在感染第叁天时小鼠的血小板数量也显着回升。实验结果证明prM-AIDs能够有效地在体内外抑制prM单抗介导的登革病毒ADE效应。为治疗登革重症提供了一种有效的新策略。(本文来源于《深圳大学》期刊2017-06-30）
穆杨,周恩民[4]（2016）在《抗独特型抗体研究进展》一文中研究指出免疫系统是生物体体内执行免疫功能的组织系统,由免疫器官(组织)、免疫细胞和免疫分子组成。机体的免疫功能包括体液免疫和细胞免疫两大部分,两者相互独立又紧密配合,发挥免疫防御、免疫自稳和免疫监视等重要作用。抗体是发挥体液免疫功能的最主要成分,是机体的免疫系统在抗原刺激(本文来源于《中国免疫学杂志》期刊2016年11期）
于颖[5]（2015）在《高致病性PRRSV诱导仔猪胸腺的损伤机制及PRRSV抗独特型抗体的免疫调控》一文中研究指出猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)的病原是猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)。该病在临床上主要引起母猪流产、死胎或木乃伊胎,并引起育肥猪和仔猪的呼吸障碍。1987年,美国首先报道该病,1996年我国首次分离并报道该病。PRRSV为单股正链(+)RNA病毒,归类于动脉炎病毒科,动脉炎病毒属。2006年5月,高致病性PRRS(HP-PRRS)从我国南方地区开始爆发,主要表现为发病猪群的“叁高”,即体温高、发病率高、死亡率高,HP-PRRS的爆发导致我国养猪业损失巨大。许多研究表明,PRRSV变异毒株对中枢及外周免疫器官的噬性显着增强,除能引起胸腺严重萎缩外,还能导致外周免疫器的出血、坏死、淋巴细胞严重减少并伴随细胞凋亡现象。目前,PRRS/HP-PRRS的防控仍然是兽医病毒学及免疫学界的难题,感染宿主对PRRSV/HP-PRRSV的免疫应答仍不清楚。PRRSV/HP-PRRSV感染猪抗体产生较早且抗体滴度较高,但早期产生的抗体难以保护机体免受病毒的感染,甚至发挥抗体依赖性增强作用帮助病毒对机体造成更严重的伤害。本课题在前期研究的基础上,进一步研究HP-PRRSV感染诱导仔猪胸腺内自噬与凋亡情况,探讨HP-PRRSV对仔猪胸腺的损伤机制;研究PRRSV经典及变异毒株弱毒疫苗抗HP-PRRSV的作用机理;通过使用PRRSV GP5的抗独特型抗体调控机体的免疫网络,研究PRRSV感染与机体免疫网络的关系;探索PRRSV单克隆抗独特型单链抗体的免疫生物学功能。为进一步研究机体对PRRSV的免疫反应机制及免疫调控机制奠定基础。1、PRRSV感染引起胸腺内细胞的自噬和凋亡的研究细胞死亡是被周密调控的一系列复杂过程。凋亡,是一种程序性细胞死亡(programmed cell death,PCD)方式,用于维持机体自身平衡和内环境稳定,该过程受基因严格调控。自噬,也是程序性细胞死亡的一种方式,它是将受损的细胞器及大分子物质依赖溶酶体降解供机体重新利用的过程。很多疾病的发生及发展过程中,细胞凋亡与细胞自噬并存,它们在调控细胞死亡的过程中通路相互关联,互为调控。胸腺作为哺乳动物的中枢免疫器官之一,既介导细胞免疫,又为T细胞分化、发育提供场所。PRRSV感染可造成体内及体外培养细胞的凋亡及体外感染细胞的自噬现象,然而,HP-PRRSV感染引起仔猪胸腺萎缩,在萎缩的胸腺内细胞自噬情况未见相关报道。本实验目的是通过流式细胞技术、Western blot技术,研究HP-PRRSV感染仔猪胸腺诱导胸腺细胞的自噬与凋亡情况;通过免疫荧光共聚焦技术,阐明HP-PRRSV感染仔猪胸腺内病毒感染细胞、凋亡细胞与自噬细胞的关系,鉴定发生自噬细胞的类型。实验结果显示:HP-PRRSV感染仔猪的胸腺内,既存在细胞自噬现象,也存在细胞凋亡现象;自噬既可发生于病毒感染的细胞,也发生于病毒未感染细胞;发生自噬的细胞为CD14+细胞及胸腺上皮细胞,而占有胸腺中细胞总数85-90%的T细胞没有发生自噬,而发生了凋亡。2、PRRSV不同毒株弱毒疫苗对HP-PRRSV免疫保护作用的研究自2006年HP-PRRS在我国爆发以来,PRRSV疫苗在猪场中普遍使用。然而,由于PRRSV的免疫机制目前尚不清晰,PRRSV疫苗的选择及使用尚存在很大的争议。目前临床上流行的毒株以变异毒株为主,但经典PRRSV弱毒疫苗在使用中安全性较高,并对HP-PRRSV有交叉保护性,在临床上也被广泛使用。因此,本实验选用PRRSV经典株弱毒疫苗CH-1R株及变异毒株弱毒疫苗Hu N4-F112毒株免疫断奶仔猪,使用变异毒株HP-PRRSV Hu N4攻毒后,通过观察临床症状、病理组织学变化,检测血清中病毒载量、细胞免疫及体液免疫的变化,探讨不同毒株弱毒疫苗对变异毒株的免疫保护作用。实验结果显示:CH-1R、Hu N4 F112免疫的仔猪均有效的抵御HP-PRRSV的感染,二者在临床症状、眼观剖检变化、肺脏及胸腺的病理变化都明显优于HP-PRRSV攻毒组。然而,同Hu N4 F112免疫组相比,CH-1R组在疫苗免疫期膜蛋白抗体水平及HP-PRRSV感染后血清病毒载量都存在明显差异。PRRSV诱导机体产生的中和抗体主要是以膜蛋白抗体为主,Hu N4 F112免疫猪血清中的中和抗体在体外能有效阻止HP-PRRSV感染Marc-145细胞。本研究中,CH-1R免疫组与Hu N4 F112感染组在攻毒后血清病毒载量差异是否与同源毒株产生的中和抗体有关需进一步研究。3、PRRSV GP5抗独特型抗体影响PRRSV弱毒疫苗的使用效果我们前期研究发现,感染了PRRSV的猪体内可产生两种不同的针对GP5的抗独特型抗体,这两种抗独特型抗体可影响PRRSV感染猪的带毒状态。本实验目的是使用PRRSV GP5抗独特型抗体对机体进行免疫调控,观察抗独特型抗体对PRRSV弱毒疫苗的使用效果。实验猪群分别接种PRRSV GP5单克隆抗独特型抗体Mab2-5G2及自身抗独特型抗体,然后用CH-1R弱毒苗连续免疫两次,最后HP-PRRSV攻毒,每次操作时间间隔是14天。检测指标包括:观察临床症状、胸腺及肺的病理变化、血清中的病毒含量、细胞因子IFN-γ、IL-2/4/10及血清抗PRRSV特异性抗体和中和抗体水平,探讨PRRSV抗独特型抗体对CH-1R弱毒苗的调控效果。实验结果显示,PRRSV抗独特型抗体降低了PRRSV弱毒苗的使用效果,诱导机体在病毒感染之前产生较高水平的IL-4及较低水平的中和抗体。该猪群与同型对照猪群相比,病毒感染后体温较高且持续时间长,感染早期血清病毒含量较高。以上实验结果表明,当机体PRRSV抗独特型抗体存在时,频率较高地进行疫苗的接种可能对猪群带来一定的风险性。4、PRRSV单克隆抗独特型单链抗体免疫学特性研究MAb2-5G2是PRRSV GP5的抗独特型抗体,即“内影像”分子,能有模拟抗原表位而诱导机体的免疫反应,应用价值有待开发;而单链抗独特型抗体分子量小、没有毒性且易于穿入组织细胞又容易在大肠杆菌中大量表达,较抗独特型抗体优势明显。我们前期的研究表明经过复性后的原核表达MAb2-5G2 sc Fv具备MAb2-5G2的生物学功能,对MAb2-5G2 sc Fv的免疫学功能的研究发现:分别用MAb2-5G2v、sc Fv连续免疫兔子制备的抗血清能够与彼此的抗原发生交叉反应且二者的抗血清能够抑制HP-PRRSV感染Marc-145细胞。本实验进一步研究MAb2-5G2sc Fv的免疫学特性,使用MAb2-5G2及其sc Fv接种实验仔猪,结合PRRSV弱毒疫苗的使用,观察二者对弱毒疫苗使用效果的影响。实验猪群首先免疫接种PRRSV GP5单克隆抗独特型抗体Mab2-5G2或Mab2-5G2Sc Fv,然后接种一次CH-1R弱毒苗,最后接种HP-PRRSV,观察临床症状、胸腺及肺的病理组织学变化、检测病毒感染后血清病毒载量及血清抗PRRSV膜蛋白抗体水平。实验结果显示,MAb2-5G2 sc Fv保留了Mab2-5G2模拟GP5抗原的免疫学特性,二者在病毒感染后均较快地诱导机体产生了针对PRRSV膜蛋白的抗体,提高了HP-PRRSV感染仔猪的的成活率。(本文来源于《西北农林科技大学》期刊2015-05-01）
高继明,周恩民[6]（2014）在《抗独特型抗体鉴定猪繁殖与呼吸综合征病毒新型细胞受体》一文中研究指出研究背景:猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV]属于动脉炎病毒属有囊膜的单股正链RIgA病毒。病毒细胞受体是介导病毒感染宿主细胞的关键因素。目前已知的参与PRRSV感染的细胞分子有硫酸乙酰肝素蛋白多糖一类肝素分子,唾液酸粘附素,CD163,波形蛋白,CD151。作为PRRSV不同的细胞受体,虽然在病毒感染过程中发挥着重要的作用,但是这种作用并不能够单独完成病毒的侵染过程,因此PRRSV的感染需要多种细胞受体的介导并通过多条途径来完成。我们前期研究结果发现,PRRSV感染诱导宿主产生针对PRRSV GP5抗原的自身抗独特型抗体,利用抗GP5抗原的单克隆抗独特型抗体(Mab2-5G2)从Marc一145和PAM细胞中沉淀出一个分子量为230kD的蛋白。研究方法:利用Mab2-5G2通过免疫共沉淀沉淀、质谱测序分析获得并鉴定与Mab2-5G2相互作用的细胞蛋白。为进一步明确目的蛋白与PRRSV GP5的关系,我们通过构建GP5稳定表达细胞系并利用免疫共沉淀及共聚焦定位等方法确定GP5与细胞蛋白的关系。为研究目的蛋白与GP5蛋白作用关系在PRRSV感染过程中的作用,利用原核表达纯化的细胞蛋白制备抗血清,利用抗血清进行病毒阻断实验。另外,通过RNAi及过表达的技术分别在Marc-145细胞内敲低或高表达该目的蛋白,通过TCID50、real time RT-PCR及Western blot等技术测定病毒对该细胞的感染滴度。研究结果:利用Mab2-5G2通过免疫共沉淀及质谱测序鉴定得出的蛋白为非肌肉肌球蛋白Ⅱ型重链A(NMHCⅡ-A)。利用构建的稳定表达GP5蛋白的Marc-145细胞,我们证明NMHCⅡ-A与GP5蛋白结合,细胞内共定位结果显示NMHCⅡ-A与GP5在细胞内存在共定位关系。通过免疫小鼠制备的抗NMHCⅡ-A的高免血清能够剂量依赖性阻断PRRSV感染Marc-145细胞。细胞内敲低NMHCⅡ-A蛋白表达明显降低PRRSV对Marc-145细胞的感染,细胞内高表达NMHCⅡ-A蛋白显着增强PRRSV对Marc-145细胞的感染。结论:利用抗PRRSV GP5的单克隆抗独特型抗体(Mab2-5G2)鉴定出PRRSV GP5蛋白的一个重要细胞受体蛋白NMHCⅡ-A。(本文来源于《第九届全国免疫学学术大会论文集》期刊2014-10-18）
杨红秀[7]（2013）在《抗黄曲霉毒素B_1抗独特型抗体的制备及其性质分析》一文中研究指出黄曲霉毒素B1 (aflaxtion B1, AFB1)是由寄生曲霉(Aspergillus parasiticus)和产毒的黄曲霉(A. flavus)分泌的一种具有致癌、致畸、致突变毒性的次生代谢产物,常污染干果、花生以及玉米等农产品,对人畜危害很大,世界各国均制定了AFB1在食品和饲料中的限量标准。目前,检测AFB1的方法很多,其中免疫学检测方法具有快速、灵敏、特异性高等优点,是近二十年来的研究热点。无论什么检测方法,在进行AFB1分析时,一般都必须使用AFB1标准品,其价格昂贵,且操作人员存在一定的暴露风险,因此找到一种AFB1的替代品,建立无需使用AFB1标准品的(无毒)检测技术意义重大。根据免疫网络学说,抗独特型抗体(anti-idiotypic antibody, Ab2)是免疫系统针对独特型抗体(Ab1)产生的抗体,分为四种亚型(Ab2α、Ab2β、Ab2γ、Ab2δ)。其中Ab2p是针对Ab1抗原结合部位的抗原决定簇产生的抗独特型抗体,能与Abl特异性结合,在分子空间构象上与抗原存在镜像(internal image)关系,因此Ab2β可以替代AFB1标准品,进而建立无需使用AFB1标准品的AFB1检测方法。目前主要集中于抗独特型多克隆抗体(PcAb2)的研究。本实验以抗AFB1兔血清为材料,通过酶切制备抗体Fab片段,免疫BABL/c小鼠,制备了PcAb2,并对其性质进行了分析。在此基础上,制备了抗AFB1抗独特型单克隆抗体(McAb2),并对其替代AFB1应用于检测分析进行了探索。具体结果如下：1.抗体Fab片段的制备采用50%和33%饱和度的(NH4)2SO4对抗AFB1抗体(IgG)进行分级纯化,采用间接竞争酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定抗体纯化前后的灵敏度分别为2.41 ng/mL和6.55 ng/mL在此基础上,考察了木瓜蛋白酶、半胱氨酸、pH值与酶解时间对酶解抗AFB1抗体制备Fab片段的影响,优化得到最适酶解条件为：抗体：酶(w/w)为1：50,半胱氨酸浓度为18mmol/L, pH6.5,37℃水浴反应30 min。在上述最适酶解条件下对纯化的抗AFB1 IgG酶解,使用蛋白A亲和柱去除酶解产物中的抗体Fc片段,纯化得到Fab片段,得率为0.35～0.45 g/g IgG。SDS-PAGE结果表明,Fab片段达到电泳纯。间接竞争ELISA法测得Fab片段对AFB1的灵敏度为0.77 ng/mL,比IgG的灵敏度(6.55 ng/mL)提高了7.5倍。2.抗AFB1抗独特型多克隆抗体的制备及其性质分析以抗AFB 1的IgG及其Fab片段分别免疫了3只BALB/c小鼠,编号分别为1-3(IgG为免疫原)和4-6(Fab片段为免疫原),制备PcAb2。间接非竞争ELISA测定各小鼠PcAb2的产生进程,结果表明,以IgG为免疫原第四次免疫(免疫间隔时间15d)后,2号小鼠PcAb2的效价最高,达到4.7×104；以Fab为免疫原,第四次免疫后6号小鼠PcAb2的效价最高,达到2.5×105。采用间接竞争ELISA研究了PcAb2与AFB1的镜像关系,结果表明,它们均能与包被抗原AFB1-O-OVA(AFB1肟与卵清白蛋白的连接物)竞争Ab1中AFB1的结合位点,表明PcAb2与AFB1存在镜像关系。3.抗AFB1抗独特型单克隆抗体的制备及其性质分析以抗AFB1抗体的Fab片段为免疫原,免疫BALB/c小鼠,第四次免疫(免疫间隔时间15d)后,将SP2/0骨髓瘤细胞和小鼠脾细胞进行融合,融合率达63%,通过间接非竞争ELISA法筛选分泌特异性McAb2的阳性克隆细胞,阳性率约为2.5%。采用有限稀释法对阳性克隆细胞进行多次亚克隆,筛选得到1株能稳定分泌抗体的单克隆细胞,编号2F5。采用单层细胞培养法和动物体内诱导法制备McAb2,间接非竞争ELISA测得细胞培养上清的亲和常数为4.88×109mol/L,细胞培养上清和腹水上清的效价分别为2.8×103和2.45×104。间接竞争ELISA分析表明,腹水McAb2与AFB1存在镜像关系,可与包被抗原AFB1-O-OVA竞争抗AFB1抗体(Abl)的抗原结合位点。根据达到相同竞争抑制率时AFB1和McAb2的浓度,分析得到两者对应关系的线性回归方程：y=6.10×10-5x-1.56(R2=0.9812)(x:McAb2的浓度,ng/mL；y:AFB1的浓度,ng/mL)。分别以AFB1和McAb2为竞争抗原得到的间接竞争ELISA标准曲线,对AFBl加标回收实验结果进行了分析,然后对两条标准曲线得出的回收率进行双侧t检验分析,结果无显着性差异,表明McAb2可替代AFB1标准品应用于ELISA检测分析。(本文来源于《华中农业大学》期刊2013-06-01）
余涛,李大刚,邓宁,向军俭,宋其芳[8]（2013）在《抗玉米赤霉烯酮单抗独特型抗体制备与鉴定》一文中研究指出目的:研制抗玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEN)单抗独特型抗体并鉴定其特性,为建立ZEN无毒检测方法提供理论依据。方法:在研制抗ZEN单抗的基础上,将IgG与KLH偶联作为免疫原,免疫BALB/c小鼠,制备抗ZEN单抗独特型抗体;同时将经Protein G纯化的单抗用胃蛋白酶酶切获取Fab片段,作为检测原,并采用间接ELISA和间接竞争ELISA对抗独特型抗体特性进行鉴定。结果:所研制的抗独特型抗体能够与ZEN竞争结合ZEN单抗,与ZEN之间存在"内影像"关系。结论:成功研制抗ZEN单抗独特型抗体,可以替代ZEN标准品应用于ELISA检测。(本文来源于《食品科学》期刊2013年03期）
兰海楠,李维,郑鑫[9]（2012）在《猪生长激素抗独特型抗体的制备及生物活性检测》一文中研究指出【目的】以鼠肝细胞为模型,在细胞水平上研究猪生长激素抗独特型抗体的作用机制。【方法】以猪生长激素单克隆抗体1A5-F(ab′)2部分免疫BALB/c鼠,采用杂交瘤细胞技术制备猪生长激素抗独特型单克隆抗体。分离Wistar大鼠肝脏细胞,以其为模型,采用流式分析、激光共聚焦显微镜观察、Western-blot等技术手段,研究猪生长激素抗独特型单克隆抗体的生物活性。【结果】成功制备了3株猪生长激素抗独特型单克隆抗体,分别命名为CG1、CG2、CG3。其中,CG1阳性信号最强,经鉴定,CG1为Ab2β类抗独特型抗体,属于IgG2a亚类。CG1能够以二聚体的形式激活鼠肝细胞表面的生长激素受体,并可激活信号转导蛋白JAK2。【结论】CG1抗体可与鼠肝脏细胞表面的生长激素受体特异性地结合,并可磷酸化信号转导蛋白JAK2。(本文来源于《西北农林科技大学学报(自然科学版)》期刊2012年11期）
克力比努尔·热合曼[10]（2012）在《抗溶菌酶独特型抗体的制备及性质研究》一文中研究指出【研究背景】抗体分子可变区上的VH-VL抗原决定簇的总和称为独特型（idiotypic，Id），独特型上的表位被称为独特位(idiotope，Id)，它可以刺激机体在自身体内或者异体内诱导相应的抗体，被称为抗独特型抗体(anti—idiotypeantibody，Anti-Id)。 Id和Anti-Id是构成免疫调控网络的主要组成部分,其中由第一抗体Ab1的独特型诱导产生的第二抗体Ab2β型抗独特型抗体，可以作为原始抗原的分子模拟物，也称抗原的内映象(internal image)。研究人员根据Anti-Id的这种特点，通过抗独特型抗体可以获得具有催化作用的抗体，也称抗体酶。纳米抗体是近年来发现的存在于骆驼重链抗体可变区、迄今为止最小的具有功能的抗体片段。在前期研究中，发现可以利用骆驼纳米抗体优先识别酶活性中心的特性，高效获得具有蒜氨酸酶催化活性的抗独特型纳米抗体。这种结构简单的抗体，为研究其催化机制提供了便利条件。同时，在前期研究中利用溶菌酶从VHH抗体库中筛选获得了具有酶抑制活性的Ab1抗体，令人感兴趣的是其中一个纳米抗体NBL42，仅具有一个CDR3区，但却保留了较强的溶菌酶抑制活性。值得进一步研究。【研究目的】为了更好的验证前期研究中提出的基于纳米抗体的抗体酶制备策略，也为了今后进一步阐明抗体酶模拟天然酶的机制，本研究以溶菌酶抑制性纳米抗体NBL42为抗原，对已经构建好的新疆双峰驼免疫噬菌体展示文库进行亲和淘洗筛选，期望获得具有溶菌酶活性的抗溶菌酶独特型抗体，为抗体酶的研究和纳米抗体的分子模拟机制研究提供线索。【研究方法】通过辅助噬菌体滴度的测定，确定抗体库噬菌体滴度。BLAST和DNAMAN软件分析溶菌酶抑制性单域抗体NBL42、NBL114的氨基酸序列。对包含NBL42、NBL114的大肠杆菌宿主菌BL21经过IPTG诱导表达NBL42、NBL114。采用Ni-Sepharose4B亲和层析纯化带His标签的抗体蛋白。SDS-PAGE鉴定纯度，对NBL42、NBL114抗原溶菌酶结合能力采用ELISA进行测定。分别应用NBL42和NBL114作为抗原,对本实验室已经构建好的VHH抗体免疫文库中进行筛选,利用IgG3VHH序列上下游特异引物进行菌落PCR鉴定VHH阳性克隆。引物序列如下VHH-P1:5′-CGCGGATCCGTCCTGGCTGCTCTTCTAC-3′,下游引物VHH-P2:5′-CCGCTCGAGCTTGCATACTTCATTCGTTTC-3′和带有c-Myc标签的引物VHH-P3-IgG3-M:5’-CCGCTCGAGATTCAAGTCCTCTTCAGAAATGAGCTTTTGCTCTGAGGAGAC-3'。阳性克隆经测序证实为VHH抗体后，亚克隆到pET30a构建原核表达载体，诱导表达纯化。SDS-PAGE和Western blot检测纯化的抗体的纯度。ELISA检测与NBL42的特异结合。溶菌酶活性测定采用大肠杆菌进行抑菌检测吸光值的降低。酶活力单位定义为特定条件下，每分钟使吸光度值OD_(450)降低0.001为1个酶活力单位。【研究结果】经测定，辅助噬菌体M13K07滴度为1.24×10~(13)pfu/mL，新疆双峰驼免疫文库噬菌体经一轮扩增后滴度为1.46×10~(13)pfu/mL。成功表达纯化得到溶菌酶抑制性抗体NBL42、NBL114。采用这两种抗体对免疫文库中进行筛选，得到35个IgG3阳性克隆，根据菌落PCR结果选取20个克隆对其DNA序列进行测定，其中5个具有VHH插入片段的克隆，通过NCBI和DNMAN分析测序结果，选择了NBL(1-6)和NBL(2-3)两个克隆用于进行表达和纯化。首先从包含NBL(1-6)和NBL(2-3)两个克隆的重组pCANTAB5E质粒为模板，采用正向引物VHH-P1,反向引物VHH-P3-IgG3-M，进行PCR扩增并连接到pET30a上，构建原核表达载体，诱导表达纯化得到了带有c-Myc标签的NBL(1-6)、NBL(2-3)两个抗体， ELISA和Western blotting分析表明，NBL(1-6)、NBL(2-3)具有较好的抗原结合能力。枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌检测NBL(1-6)和NBL(2-3)的抑菌作用，结果显示NBL(1-6)、NBL(2-3)对大肠杆菌具有一定抑制作用，OD_(450)值分别0.864±0.03和0.889±0.03（重复测定3次），阳性对照溶菌酶对大肠杆菌作用的OD_(450)值为0.855，PBS阴性对照OD_(450)值为1.065。根据酶活力计算公式测出NBL(1-6)酶活为7000U、NBL(2-3)酶活为4200U。【研究结论】采用具有溶菌酶抑制活性的Ab1抗体NBL42，可以从VHH抗体免疫文库中筛选获得抗溶菌酶独特型抗体；其中两个抗体NBL(1-6)、NBL(2-3)能与Ab1抗体NBL42特异结合；筛选获得的抗溶菌酶独特型抗体NBL(1-6)、NBL(2-3)对大肠杆菌具有一定抑制作用，可能具有溶菌酶的催化活性。(本文来源于《新疆大学》期刊2012-05-27）
抗独特型抗体论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)感染所致的以母猪流产、死胎或木乃伊胎,同时导致育肥猪和仔猪呼吸障碍的高度传染病。目前,PRRS仍在全球大部分地区流行,尤其是自2006年以来,高致病性PRRS(HP-PRRS)的暴发给养猪业造成巨大的经济损失。虽然全球针对PRRS的防控研究已持续进行了30多年,仍然没有安全有效的疫苗及治疗药物得以认证并推广使用。由于PRRSV的高度变异致使有效疫苗的研发存在较大障碍,因此,有必要尝试开发新型抗病毒策略。前期研究证明PRRSV感染猪后会产生特异性针对GP5和M蛋白的自身抗独特型抗体(Auto-anti-idiotypic antibodies,Aab-2s),其中一部分Aab-2s可与抗GP5抗体分子的抗原结合部位决定簇反应,从而阻断其与抗原结合,即为GP5的“内影像”。这类抗体一方面可作为抗独特型抗体疫苗,同时可以作为筛选和鉴定病毒入侵所需受体的工具。本实验室前期利用所制备的针对PRRSV GP5蛋白的单克隆抗独特型抗体(Mab2-5G2)从PRRSV易感细胞PAM和MARC-145中发现了介导病毒进入靶细胞的重要蛋白,非肌肉肌球蛋白II-A(MYH9),由于Mab2-5G2具有模拟PRRSV囊膜糖蛋白GP5的功能,提示MYH9可能是病毒GP5蛋白结合易感细胞的一个功能性受体蛋白因子,基于前期研究基础,本研究主要目标如下:1.Mab2-5G2与MYH9分子互作的关键区域的确定非肌肉肌球蛋白II(Non-muscle myosin II,NM II)在正常细胞中发挥的生物功能主要包括:细胞迁移、有丝分裂、囊泡转移修复、胞质分裂和细胞因子分泌等。哺乳动物的NM II包含3个亚型,根据其重链命名为NM II-A(MYH9),NM II-B(MYH10),NM II-C(MYH14),叁者的氨基酸同源性高达64%~80%,序列比对分析发现其氨基酸差异主要位于氨基端和羧基端。为了查找Mab2-5G2与MYH9结合的区域,我们首先设计间并引物扩增猪源MYH9全长序列,然后将MYH9基因分成四部分进行扩增,分别克隆到真核表达质粒pCAGEN-HA,瞬时转染真核HEK-293T细胞48 h,收取细胞并借助蛋白免疫印迹试验,初步确定Mab2-5G2的结合区域位于MYH9的羧基端aa 1651-1960,将该区域命名为PRA。2.MYH9蛋白羧基端的关键区域PRA可溶表达和阻断PRRSV感染研究为了探究重组表达的PRA蛋白能否作为一种潜在的受体阻断剂抑制PRRSV感染,我们利用原核表达系统获得可溶的PRA蛋白,通过ELISA和Western blot试验分别证实抗独特型抗体Mab2-5G2结合PRA蛋白。本研究进一步将PRRSV SD16、VR-2332毒株分别与PRA蛋白或PCV2 Cap对照蛋白混合后感染易感细胞,结果显示如下:(1)PRA蛋白在PRRSV易感细胞MARC-145和PAM以及易感细胞系PK-15~(CD163)和CRL-2843~(CD163)上显着阻断PRRSV-2型SD16及VR-2332感染,其阻断效果均呈剂量依赖性。(2)PRA蛋白在PAM和MARC-145细胞中对PRRSV-1型(GZ11-G1和P073-3)和PRRSV-2型(JXA1、VR-2385、CH-1a、GD-HD)的增殖均具有抑制作用。(3)PRA蛋白通过结合PRRSV GP5蛋白来捕获病毒。(4)PRA与PRRSV结合后导致细胞胞浆中MYH9向细胞膜上迁移减少,从而降低PRRSV内化。3.MYH9介导PRRSV进入易感细胞关键区域的确定PRRSV进入宿主细胞主要依靠相关受体介导,其中CD163和MYH9是作为介导PRRSV吸附内化入胞过程中所必需的两个因子。为了探究不同种属MYH9是否均可作为PRRSV感染的重要介导因子并确定MYH9介导病毒入侵的关键区域,首先,分别构建稳定表达猪源CD163的PK-15(PK-15~(CD163)),HEK-293T(HEK-293T~(CD163))和BHK-21(BHK-21~(CD163))的PRRSV易感细胞系,用Blebbistatin(MYH9特异性抑制剂)或siRNA(针对不同种源MYH9)处理这些细胞系,感染病毒48 h。间接免疫荧光,qPCR和Western blot试验结果显示:PRRSV感染水平伴随着MYH9活性或表达下降而降低;然后,用大肠杆菌系统分别表达不同种属的PRA蛋白,证实其对PRRSV感染的均具有阻断作用。比较不同种属PRA氨基酸序列的差异,最后,以猪源PRA为例,对该区域进行逐步截短表达,通过病毒阻断试验筛选获得关键区域为aa1676-1791,同时制备针对该区域的多克隆抗体显着抑制PRRSV感染PAM和MARC-145细胞。由此推断该区域可能是MYH9介导PRRSV入侵的关键区域。4.Mab2-5G2与MYH9结合位点鉴定与功能研究为了探究Mab2-5G2是否可以作为“竞争阻断剂”结合细胞表面MYH9从而影响PRRSV GP5结合MYH9,进而降低病毒的感染。本研究在PAM细胞上初步证实Mab2-5G2具有抵抗PRRSV感染的作用。同时Mab2-5G2对PRRSV SD16,JXA1,CH-1a,VR-2332,VR-2385和GD-HD等不同毒株均具有阻断效果。为查找Mab2-5G2与MYH9的结合位点,首先构建PRA截短体,以及合成多肽,借助ELISA和Western blot技术逐步缩小与Mab2-5G2结合的范围;通过抗体测序获得Mab2-5G2 Fab序列,分别借助同源建模方法获得Mab2-5G2 Fab与MYH9结合的空间结构。通过Chimera软件对两者进行分子对接(Docking),初步确定Mab2-5G2结合MYH9的位点位于MYH9的羧基端E1670,K1673,E1679和I1683;通过构建重组表达PRA突变体(PRA~(1670),PRA~(1673),PRA~(1679),PRA~(1683)和PRA~(1670,1673,1679,1683))进行Mab2-5G2结合活性和病毒阻断的功能验证。结果显示,PRA突变体蛋白与Mab2-5G2及与病毒粒子结合活性以及阻断PRRSV的内化能力明显下降。由此推断,E1670,K1673,E1679和I1683可能是PRRSV囊膜蛋白GP5结合MYH9入侵易感细胞的结合位点。本研究鉴定出Mab2-5G2的结合区域位于MYH9的羧基端PRA(aa1651-1960),重组表达PRA具有良好的抗PRRSV活性,PRA可通过与细胞内源性MYH9竞争结合病毒的GP5蛋白,降低病毒的内化,抑制PRRSV感染。同时证实不同种属MYH9均参与病毒复制,借助阻断试验确定结合PRRSV的关键区域位于aa1676-1791。进一步研究发现Mab2-5G2对PRRSV感染具有明显地阻断作用,通过同源建模和分子对接预测Mab2-5G2与PRA结合位点为E1670,K1673,E1679和I1683,并进行了相关的功能验证,本研究进一步揭示PRRSV进入机制和开发新型抗病毒制剂提供理论依据。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
抗独特型抗体论文参考文献
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