兔出血症病毒VP60蛋白单克隆抗体的制备及活性鉴定

兔出血症病毒VP60蛋白单克隆抗体的制备及活性鉴定

论文摘要

为制备兔出血症病毒VP60单克隆抗体,利用HEK 293T细胞瞬时表达VP60,免疫Balb/c小鼠,将小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,间接ELISA筛选获得阳性克隆细胞株-5D11。利用血凝抑制(HI)、间接免疫荧光(IFA)和Western blot等方法对5D11分泌的单克隆抗体活性进行鉴定,并对其识别区域进行了定位。结果显示,5D11能抑制病毒凝集人"O"型红细胞,与杆状病毒表达的VP60蛋白发生特异性抗原抗体反应,且其识别VP60蛋白线性抗原表位,并定位于494 aa-579 aa区段。成功制备了抗VP60蛋白单克隆抗体,为开展病原学检测、流行病学研究等奠定了基础。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料
  •     1.1.1 毒株、菌株、细胞与实验动物
  •     1.1.2 主要试剂
  •   1.2 方法
  •     1.2.1 免疫原的制备及鉴定
  •     1.2.2 单克隆抗体的制备
  •       1.2.2.1 动物免疫试验
  •       1.2.2.2 细胞融合及杂交瘤细胞的筛选
  •     1.2.3 单克隆抗体的活性鉴定
  •       1.2.3.1 HI试验
  •       1.2.3.2 IFA试验
  •       1.2.3.3 抗体识别抗原表位结构鉴定
  •     1.2.4 单克隆抗体识别域鉴定
  • 2 结果
  •   2.1 免疫原的制备及鉴定
  •     2.1.1 真核表达质粒的构建
  •     2.1.2 VP60瞬时表达产物鉴定
  •   2.2 杂交瘤细胞株的筛选与腹水单克隆抗体效价
  •   2.3 单克隆抗体的活性鉴定
  •     2.3.1 HI试验
  •     2.3.2 IFA试验
  •     2.3.3 抗体识别表位类型鉴定
  •   2.4 单克隆抗体识别域鉴定
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 杨慧,武玉香,王文秀,孙培姣,于雪,王玉茂,沈志强,肖跃强

    关键词: 兔出血症病毒,单克隆抗体,活性鉴定,定位

    来源: 动物医学进展 2019年08期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,基础科学

    专业: 生物学,畜牧与动物医学

    单位: 山东绿都生物科技有限公司,山东省滨州畜牧兽医研究院

    基金: 山东省自然科学基金项目(ZR2014CQ045),滨州市科技发展计划项目(2015ZC0108),中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室开放基金课题,山东省现代农业产业技术体系项目(SDAIT-21-15)

    分类号: S852.65

    DOI: 10.16437/j.cnki.1007-5038.20180925.002

    页码: 6-10

    总页数: 5

    文件大小: 1309K

    下载量: 142

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