导读:本文包含了线粒体通道论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:线粒体,通道,心肌,离子,细胞,敏感性,依赖性。
线粒体通道论文文献综述
张恒,刘春晓,李媛媛,石月萍[1]（2019）在《加减枳实薤白桂枝汤通过激活线粒体ATP敏感性钾通道抑制缺血再灌注心肌线粒体凋亡途径》一文中研究指出目的探究加减枳实薤白桂枝汤能否在心肌缺血再灌注的过程中激活线粒体ATP敏感性钾通道产生线粒体保护作用,进而抑制细胞凋亡的线粒体凋亡途径,减轻心肌缺血再灌注损伤。方法将24只SD大鼠随机分为叁组:假手术组6只,模型组9只,加减枳实薤白桂枝汤组9只,给药14天后结扎冠状动脉前降支造模,观察各组心电图ST段、心肌酶(肌酸激酶同工酶MB、乳酸脱氢酶)及线粒体超微结构的改变,采用伊文思蓝/红四氮唑双重染色比较模型组及加减枳实薤白桂枝汤组心肌梗死面积,组织制备单细胞悬液后经罗丹明123染色,以流式细胞仪检测各组线粒体膜电位,Western blot检测各组大鼠线粒体中缝隙连接蛋白43(Cx43)、蛋白激酶C-ε型(PKC-ε)及内向整流钾通道6.2(Kir6.2)的表达,甲基麝香草酚蓝微板法检测各组大鼠线粒体内钙含量。结果加减枳实薤白桂枝汤能有效减轻心肌缺血再灌注导致的ST段及心肌酶的改变,缩小心肌梗死面积,减轻线粒体超微结构及膜电位的改变,增强线粒体内Cx43、PKC-ε及Kir6.2的表达,减轻线粒体钙超载。结论加减枳实薤白桂枝汤能通过上调线粒体内Cx43及PKC-ε的表达激活线粒体ATP敏感性钾通道产生线粒体保护效应,进而减少细胞色素C从线粒体释放,抑制了天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶家族相关蛋白的级联反应进而降低心肌细胞凋亡率,减轻心肌缺血再灌注损伤。(本文来源于《中国动脉硬化杂志》期刊2019年10期）
李军,高晶萍,张雅琪,罗强,梁亭[2]（2019）在《TRPM2离子通道在H9N2流感病毒感染小鼠肺微血管内皮细胞线粒体损伤中的作用》一文中研究指出旨在探讨瞬时电位受体M2离子通道(TRPM2)在H9N2流感病毒感染小鼠肺微血管内皮细胞(PMVEC)导致线粒体损伤过程中的作用。在已建立TRPM2 shRNA PMVEC的基础上,采用5MOI H9N2猪流感病毒感染细胞,在病毒作用后24和48 h提取各组细胞的线粒体进行蛋白定量,检测各组细胞线粒体超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、一氧化氮合成酶(NOS)、线粒体呼吸链复合物Ⅳ活性和ATP酶水平;利用激光共聚焦显微镜观察线粒体膜电位变化(JC-1染色)及细胞凋亡(Annexin V-FITC/PI双染色法)情况。结果表明:H9N2-SIV感染后TRPM2 shRNA PMVEC内SOD活性、GSH水平和Na~+-K~+-ATP、线粒体呼吸链复合物Ⅳ活性显着高于对照shRNA PMVEC(P<0.05或P<0.01);mtNOS活性则极显着低于shRNA PMVEC(P<0.01)。JC-1染色显示TRPM2-siRNA PMVEC线粒体膜电位水平高于对照shRNA PMVEC,但是AnnexinV-FITC/PI染色显示细胞凋亡则低于H9N2感染对照shRNA PMVEC。结果提示:TRPM2基因沉默有效减缓H9N2感染导致NOS产生,显着降低SOD、GSH、线粒体呼吸链复合物Ⅳ、Na~+-K~+-ATP的消耗以及线粒体膜电位的下降程度,进而有效缓解PMVEC线粒体损伤及细胞凋亡。(本文来源于《畜牧兽医学报》期刊2019年10期）
张海波,李运丽,艾景雪,高瑞,宋志明[3]（2019）在《从线粒体膜稳定作用探讨线粒体K(MITO-KATP)通道开放剂改善老年冠心病大鼠心肌缺血再灌注损伤的机制》一文中研究指出目的从线粒体膜稳定作用探讨线粒体K+ATP(MITO-KATP)通道开放剂尼可地尔(Nicorandil,Nic)改善老年冠心病大鼠心肌缺血再灌注损伤的机制。方法选取60只健康雄性SD老年大鼠(18～20个月),体重400～600 g,随机分为3组:假手术(Sham)组、模型(Model)组和尼可地尔(Nic)组,每组10只。建立老年冠心病大鼠心肌缺血再灌注(MI/R)模型,尼可地尔(Nic)组在再灌注之前,股静脉注射尼可地尔5 mg/kg,假手术组和模型组注射等量的生理盐水。3组大鼠在术后24 h进行腹主动脉取血,分别检测大鼠血清中,肌酸磷酸激酶同工酶(CK-MB)和乳酸脱氢酶(LDH)的水平变化;采用流式细胞仪测定大鼠心肌细胞线粒体膜电位的变化情况;采用Western Blot法测定心肌细胞线粒体中p-Cx43蛋白变化情况,心肌组织中Bcl-2和Bax蛋白表达情况的变化。结果与Sham组相比,模型组大鼠血清中CK-MB和LDH的含量增加(P<0.05),说明心肌缺血再灌注会导致心肌细胞损伤;与模型组相比,尼可地尔组大鼠血清中CK-MB和LDH的含量下降(P<0.05),说明尼可地尔有抗心肌缺血的作用。采用阳离子绿色荧光染料罗丹明123对线粒体的膜电位进行检测,与Sham组相比,模型组大鼠心肌线粒体膜电位降低(P<0.05),而尼可地尔组大鼠心肌线粒体膜电位高于模型组(P<0.05),说明心肌细胞凋亡时会导致线粒体膜电位降低以及功能变化,而线粒体K+ATP通道开放剂尼可地尔可以缓解线粒体的损伤情况。Western Blot结果表明,与Sham组相比,模型组大鼠心肌线粒体p-Cx43的蛋白表达下调,而尼可地尔组大鼠心肌线粒体p-Cx43的蛋白表达高于模型组,说明尼可地尔能够上调心肌线粒体p-Cx43的蛋白表达,维持线粒体的稳定性。与Sham组相比,模型组大鼠心肌组织中Bcl-2的蛋白表达下调,Bax蛋白表达上调;而尼可地尔组大鼠心肌组织中Bcl-2的蛋白表达上调,Bax蛋白表达下调,说明线粒体K+ATP通道开放剂尼可地尔可有效抑制心肌缺血再灌注导致的心肌细胞凋亡。结论线粒体K+ATP通道开放剂尼可地尔对心肌缺血再灌注损伤有保护作用,其机制可能是通过降低大鼠血清中CK-MB和LDH的含量,维持线粒体膜稳定性,抑制心肌细胞的凋亡。(本文来源于《中国循证心血管医学杂志》期刊2019年05期）
孙朝阳,周坤,马翔[4]（2019）在《线粒体ATP敏感性钾离子通道开放剂改善冠心病大鼠模型心肌氧化应激损伤的分子机制》一文中研究指出目的探索线粒体ATP敏感性钾离子通道(mito KATP)开放剂改善冠心病大鼠模型心肌氧化应激损伤的分子机制。方法选取40只SD大鼠随机分为4组:正常对照组(不造模且不给予二氮嗪药物干预)、假手术组(仅切皮不进行造模手术)、模型组(制作冠心病大鼠模型,但不给予二氮嗪药物干预)和药物组(制作冠心病大鼠模型,给予二氮嗪药物3 mg/kg干预),每组10只。利用实时荧光定量聚合酶链式反应及Western blotting实验测定各组血管生成因子[成纤维细胞生长因子2(FGF-2)和血管内皮生长因子(VEGF)]m RNA及相关蛋白的表达量,同时比较各组大鼠细胞内的乳酸脱氢酶、线粒体膜电位(MMP)和细胞死亡率。采用SPSS 22.0软件进行数据处理。组间比较采用方差分析或者t检验。结果与模型组相比,药物组大鼠FGF-2[(100. 21±12. 33)×103vs (120. 43±10. 33)×103IU]与VEGF [(163. 31±9. 33)×10~3vs (181. 33±11. 13)×10~3IU]m RNA转录水平、FGF-2 [(0. 69±0. 33) vs (1. 32±0. 33)与VEGF [(0. 68±0. 33) vs (1. 20±0. 13)]表达水平、乳酸脱氢酶[(49. 32±3. 51) vs (156. 12±10. 18) U/L]表达均显着降低(P <0. 05)。与模型组相比,药物组细胞死亡率显着降低[(30. 32±3. 48)%vs (66. 12±3. 23)%],而荧光强度显着增加[(780. 12±9. 20) vs (220. 24±6. 15),P<0. 05]。结论 mito KATP通道开放剂可通过促进冠心病大鼠血管FGF-2和VEGF增加,增强乳酸脱氢酶活性,降低MMP、细胞死亡率和冠心病大鼠心肌氧化应激损伤。(本文来源于《中华老年多器官疾病杂志》期刊2019年02期）
田绍泽,刘思禹,王坤,殷倩,岳远征[5]（2019）在《植物线粒体电压依赖性阴离子通道蛋白VDACs综述》一文中研究指出线粒体电压依赖性阴离子通道蛋白(voltage-dependent anion channels, VDACs)是广泛存在于真核生物中的一种孔蛋白,主要定位于线粒体外膜,参与线粒体内外物质和能量的传输以及线粒体介导的细胞程序性死亡过程。本综述对近年来植物VDACs的研究进行了全面的总结和分析:植物VDACs的序列上存在区别于其它真核生物的特有基序;不同植物中都存在不同数目的 VDACs异构体,但其二级结构高度保守;植物VDACs不仅仅定位于线粒体外膜,它们非线粒体外膜的共定位预示着功能的多样性;植物VDACs在不同物种、不同器官以及不同发育阶段的表达模式存在着明显的差异;在参与胁迫应答和防御反应、调控生长发育及育性等方面植物VDACs发挥着重要的功能。这些关于植物VDACs的研究对于农作物和园艺产品产量的增加、品质的提高有着重要的意义,对于植物抗性研究及基因工程育种具有一定的参考价值。(本文来源于《分子植物育种》期刊2019年22期）
肖雯婧,侯君,呼永河[6]（2018）在《线粒体大电导钙离子激活钾通道的研究进展》一文中研究指出线粒体由内外两层膜封闭而成,其中线粒体内膜作用极为重要,呼吸链蛋白复合体附着于线粒体内膜,同时于此完成其生理功能。目前,线粒体内膜已鉴定出多种钾离子通道蛋白,如线粒体选择性钾离子通道,包括ATP依赖钾通道(mitoK_(ATP))、电压依赖性钾通道(mitoKv 1.3)、小电导钙离子激活钾通道(mitoSK_(Ca))、中电导钙离子激活钾通道(mitoIK_(Ca))、大电导钙离子激活钾通道(mitoBK_(Ca))、pH依赖(本文来源于《西南国防医药》期刊2018年08期）
王天奇,原大江[7]（2018）在《降钙素基因相关肽介导的心肌缺血再灌注损伤保护与线粒体叁磷酸腺苷敏感型钾通道的关系》一文中研究指出缺血再灌注损伤是致死性心脏损伤的主要原因之一,其病理机制一直还未被阐明。降钙素基因相关肽(CGRP)被认为具有抗缺血再灌注损伤的作用,本文就CGRP抗缺血再灌损伤的机制综述如下。1线粒体叁磷酸腺苷(ATP)转运和K+循环1.1线粒体ATP转运:线粒体是生物细胞内的一种重要的细胞器,其功能是将有氧呼吸所产生的能量转化为ATP,为生命活动提供可利用的能量。线粒体有两层生物膜包绕,外膜和内(本文来源于《中国药物与临床》期刊2018年08期）
施宁华,韩江全,邓才洪,何婧[8]（2018）在《线粒体ATP敏感性钾通道在糖尿病合并脑缺血损伤中作用的研究进展》一文中研究指出糖尿病是脑血管疾病重要的独立危险因素,大量的临床和实验研究证实,糖尿病可加重脑缺血损伤,但其机制尚不十分清楚。线粒体ATP敏感性钾通道(mitoK_(ATP))是位于线粒体内膜上一种重要的离子通道,在许多生理病理过程中发挥重要功能。近年来,不断有研究表明,mitoK_(ATP)对脑缺血损伤有保护作用,而糖尿病可使其启动的正常保护机制受损,mitoK_(ATP)与糖尿病合并脑缺血损伤的关系受到大家越来越多的关注。本文就mitoK_(ATP)在糖尿病合并脑缺血损伤中的作用作一综述。(本文来源于《天津医药》期刊2018年07期）
王志桐,王晓良[9]（2018）在《线粒体阴离子通道VDAC1作为阿尔茨海默病潜在药物靶标的研究进展》一文中研究指出电压依赖性阴离子通道(voltage-dependent anion channels,VDACs)位于线粒体外膜,在调节线粒体能量代谢和线粒体介导细胞凋亡中起着关键作用,被认为是肿瘤治疗的潜在靶点。研究表明,阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)等神经退行性疾病普遍会导致线粒体功能障碍。在此过程中,VDAC1表达发生改变,并与疾病相关分子存在相互作用,参与了疾病的发生、发展过程。本综述阐述了VDAC1的特征、生理功能,目前报道较多的重要结构单元及其在细胞凋亡中的作用,着重介绍了VDAC1在AD中的研究进展,以及调节VDAC1表达或功能对学习记忆相关功能的影响。(本文来源于《药学学报》期刊2018年08期）
胡兆丽[10]（2018）在《星形胶质细胞Kir6.1/K-ATP通道调节线粒体功能参与帕金森病的发生》一文中研究指出帕金森病(Parkinson’s disease,PD)发病率仅次于阿尔茨海默病,是全球第二大衰老相关的神经退行性病变。PD呈慢性、进行性发展,其主要的临床症状表现为:静止性震颤、运动迟缓、肌强直、步态障碍等。随着疾病的发展,非运动症状如失眠、情感淡漠、抑郁及认知障碍逐渐占居主导地位,造成沉重的社会负担。PD患者中脑黑质区(Substantia nigra,SN)多巴胺能神经元进行性缺失,伴随纹状体多巴胺(Dopamine,DA)耗竭,尚存的DA能神经元中出现Lewy小体(lewy body,LB),以上为PD的主要病理学标志。现阶段临床上PD的治疗策略为左旋多巴(1evodopa,L-DOPA)替代治疗,尽管能够缓解大多数PD患者的症状,但却无法阻止DA能神经元进行性死亡的病理进程,长期应用还会产生运动障碍等严重并发症。近年来大量的研究表明,PD是环境因素、遗传因素和衰老长期共同作用的结果。已提出的PD发病机制主要包括兴奋性毒性、线粒体功能障碍、炎症反应、氧化应激和错误折迭蛋白处理障碍等。然而根据目前提出的假说而研发的多种药物如NMDA受体拮抗剂、抗氧化剂及凋亡抑制剂等神经保护剂在临床研究中并未显现有效的神经保护作用。因此,全面深入地了解帕金森病的发病机制,将有助于寻找减缓或阻止帕金森病的治疗方法。PD病理机制尚未明了,目前认为包括帕金森在内的神经退行性疾病的一个共同特征是神经炎症反应的发生,表现为神经胶质细胞,主要是小胶质细胞和星形胶质细胞的激活。星形胶质细胞是中枢神经系统中数量最多的细胞,具有广泛的生理功能,主要包括调节神经元的外部环境、给予神经元营养、能量代谢支持等。在PD发病脑区的微环境中,神经元-星形胶质细胞-小胶质细胞所形成的神经网络存在动态平衡,当星形胶质细胞表型从静息态转变为激活状态,星形胶质细胞会根据其周围环境多样性信号改变自身表型,其功能包括分泌促炎因子、参与细胞修复和细胞外基质重塑的神经营养物质的释放等一系列细胞内分子事件。在此过程中星形胶质细胞呈现出高的能量需求,因此,其线粒体功能正常与否关系到星形胶质细胞正常功能的维持,且这种星形胶质细胞功能稳态在帕金森等神经退行性疾病的发生及疾病进展过程中起到重要作用。所以,加强对星形胶质细胞在PD中的功能探讨,通过靶向星形胶质细胞的线粒体功能来调节星形胶质细胞的活动是干预PD的一种新思路。ATP敏感性钾通道(ATP-sensitive potassium channel,K-ATP通道)是一类耦联细胞代谢和电活动、非电压依赖性的钾离子通道。K-ATP通道在与帕金森病相关的黑质、纹状体脑区高度表达,并参与调节多种与PD相关的神经递质如DA和谷氨酸(glutamate,Glu)的释放。包括本实验室在内多个研究小组前期研究显示,K-ATP通道开放剂对多种毒素引起的PD样神经损伤具有神经保护作用,其机制包括恢复线粒体功能、抗兴奋性毒性、抗凋亡和抑制神经炎症等。表达Kir6.2/SUR1的DA神经元对鱼藤酮毒性最敏感。Kir6.2敲除能取消MPTP联合丙磺舒所致PD慢性模型小鼠黑质DA神经元的损伤作用。本课题组近期报道了表达在小胶质细胞的Kir6.1/K-ATP通道参与调节小胶质细胞表型变化,在PD进程中发挥神经保护作用。以上研究结果提示,K-ATP通道可能是研发理想神经保护剂的重要靶标。中枢神经系统广泛分布的星形胶质细胞主要表达Kir6.1构成的K-ATP通道,但是该通道是否参与PD的发生发展及其具体机制尚不清楚。另外线粒体膜上也有该类型通道的分布,且文献及本实验室前期研究显示线粒体K-ATP通道可能在PD毒素所致的星形胶质细胞的功能损伤过程中发挥保护作用,但具体的调节机制亦未明了。基于此,本文第一部分工作应用Kir6.1~(loxp/loxp)和Kir6.1~(loxp/loxp)GFAP~(cre/+)小鼠:分别制备LPS急性PD模型、MPTP急性模型、MPTP/p慢性模型,观察星形胶质细胞Kir6.1基因敲除对不同PD模型小鼠中脑神经损伤的影响。研究结果表明:星形胶质细胞Kir6.1基因敲除加重上述多种PD动物模型中脑PD样神经损伤,促进中脑多种应激反应通路的激活,包括内质网应激反应、炎症反应、凋亡通路的激活以及自噬通路的抑制。由于第一部分研究结果显示PD动物模型中星形胶质细胞Kir6.1基因敲除引起中脑广泛的应激反应,我们推测可能是星形胶质细胞Kir6.1基因敲除加剧星形胶质细胞在病理条件下的功能改变,削弱了其对抗损伤的能力。近年来的研究表明星形胶质细胞线粒体功能障碍在PD的发生发展中发挥关键作用,我们实验室前期研究发现开放K-ATP通道能够维持星形胶质细胞线粒体功能,抑制其凋亡,提示星形胶质细胞Kir6.1/K-ATP通道可能通过调控线粒体功能稳态参与PD的发生。因此第二部分工作首先培养两基因型小鼠的中脑原代星形胶质细胞,研究在PD细胞模型中星形胶质细胞Kir6.1/K-ATP通道敲除对其自身功能及对线粒体功能稳态的影响及机制。结果表明星形胶质细胞Kir6.1/K-ATP通道缺失加重MPP+刺激引起的星形胶质细胞损伤、线粒体功能受损,促进炎症反应。进一步研究发现星形胶质细胞尤其是线粒体上的Kir6.1敲除,抑制线粒体自噬,加重线粒体功能紊乱诱发星形胶质细胞的毒性效应,进而导致了中脑神经元的损伤。第一部分星形胶质细胞Kir6.1/K-ATP通道在PD动物模型小鼠神经损伤中的作用目的:应用星形胶质细胞Kir6.1/K-ATP通道敲除小鼠,研究星形胶质细胞Kir6.1/K-ATP通道在PD模型小鼠中脑神经损伤中的作用。方法:应用3-4月龄Kir6.1~(loxp/loxp)和Kir6.1~(loxp/loxp)GFAP~(cre/+)雄性小鼠,制备PD急性模型((1)LPS急性PD模型:根据paximas和watson图谱定位中脑黑质坐标位点,注射5.0μg LPS(2)MPTP急性模型:腹腔注射MPTP 20 mg/kg,一日4次,两次之间间隔1小时)。应用酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)、胶质纤维酸性蛋白(Glial fibrillary acidic protein,GFAP)及离子钙结合蛋白l(ionized calcium-binding adapter molecule 1,Iba-1)进行免疫组织化学染色,联合应用体视学计数法对小鼠中脑SNc区DA能神经元、星形胶质细胞和小胶质进行定量,评价星形胶质细胞Kir6.1/K-ATP通道敲除对PD急性模型中脑神经损伤的影响。应用3-4月龄两基因型雄性小鼠,制备PD慢性模型(皮下注射MPTP,20 mg/kg。1小时后腹腔注射丙磺舒,250 mg/kg,3.5日一次,连续5周)。应用转棒、爬杆和开场等行为学检测手段评价星形胶质细胞Kir6.1/K-ATP通道敲除对MPTP/p所致小鼠运动功能的影响。分别应用TH免疫组化染色法、尼氏染色法,联合应用体视学计数法对小鼠中脑SNc DA能神经元数量进行定量;应用多巴胺转运体(dopamine transportor,DAT)免疫组化染色法对小鼠中脑SNc区、及纹状体DA能神经元数量及功能进行评价。应用GFAP、Iba-1进行免疫组织化学染色,联合应用体视学计数法对小鼠黑质区DA能神经元、星形胶质细胞和小胶质进行定量,评价中脑黑质区胶质细胞增殖活化情况。应用高效液相色谱法(Highperfomance Liquid Chromatography,HPLC)检测MPTP在两种基因型小鼠体内代谢情况,以评价星形胶质细胞Kir6.1/K-ATP通道敲除对MPTP在小鼠体内代谢的影响。应用ELISA检测小鼠血清及中脑组织中MPTP代谢酶──单胺氧化酶B(MAO-B)的酶活性,以评价星形胶质细胞Kir6.1/K-ATP通道敲除在MPTP/p慢性模型中对MAO-B活性的影响。应用HPLC法检测两种基因型小鼠造模后纹状体内及海马内单胺类递质和氨基酸类神经递质水平变化。应用ELISA法检测小鼠血清中促炎因子IL-1β、IL-6及TNF-α的含量。应用Western blot检测造模后两种基因型小鼠中脑黑质区应激反应,包括炎症反应相关蛋白、内质网应激相关蛋白、自噬相关蛋白、凋亡通路相关蛋白。另外还检测中脑组织中叁种营养因子BDNF、GDNF、FGF-2的蛋白水平。结果:1)基础状态下,两种基因型小鼠中脑SNc区TH阳性神经元数目无显着性差异。LPS及MPTP急性模型制备后,两种基因型小鼠SNc区TH阳性神经元均显着性丢失,且Kir6.1~(loxp/loxp)GFAP~(cre/+)小鼠的丢失更为显着。2)基础状态下,两种因型小鼠中脑SNc区胶质细胞(星形胶质细胞和小胶质细胞)数目无显着性差异。LPS及MPTP急性模型制备后,两种基因型小鼠SNc区胶质细胞均显着活化,且条敲组小鼠的胶质细胞增殖活化更为明显。3)MPTP在两种基因型小鼠的血浆、纹状体、肝、肾内代谢均无显着差异。4)MPTP/p慢性造模后,MAO-B在两种基因型小鼠的血清、中脑组织的酶活性无显着差异。5)基础状态下,两种基因型小鼠纹状体DA及其代谢产物水平无显着差异;MPTP/p慢性模型制备成功后,Kir6.1~(loxp/loxp)GFAP~(cre/+)小鼠纹状体内DA含量降低更为显着。另外无论是基础状态下还是MPTP/p模型,两种基因型小鼠纹状体的氨基酸类神经递质水平都无显着差异。6)MPTP/p慢性模型制备后,星形胶质细胞Kir6.1的缺失加重小鼠的运动协调能力障碍,但不影响小鼠的运动速度。7)星形胶质细胞Kir6.1基因敲除加重MPTP/p慢性模型小鼠中脑SNc DA能神经元丢失,加重SNc胶质细胞(星形胶质细胞和小胶质细胞)的增殖和活化。8)星形胶质细胞Kir6.1基因敲除促进MPTP/p慢性模型小鼠血清中IL-1β的分泌。9)星形胶质细胞Kir6.1/K-ATP通道的敲除上调小鼠中脑的炎症反应相关蛋白表达:p65、NLRP3、Caspase-1、pro IL-1β和IL-1β。10)星形胶质细胞Kir6.1/K-ATP通道的敲除增加小鼠中脑的内质网应激相关蛋白GRP78、CHOP、Caspase12的表达水平。11)星形胶质细胞Kir6.1/K-ATP通道的敲除抑制小鼠中脑的自噬通路。12)星形胶质细胞Kir6.1/K-ATP通道的敲除显着上调小鼠中脑的促凋亡通路相关蛋白Bax、AIF的蛋白表达,显着下调抑凋亡蛋白Bcl-2的表达水平。13)星形胶质细胞Kir6.1/K-ATP通道的缺失不影响小鼠中脑BDNF、GDNF、FGF-2的蛋白表达。结论:1)星形胶质细胞Kir6.1/K-ATP通道敲除加重PD动物模型加重中脑DA能神经元的丢失,促进星形胶质细胞和小胶质细胞的增殖活化。2)星形胶质细胞Kir6.1基因敲除促进MPTP/p诱导的中脑内多种细胞应激反应。3)星形胶质细胞Kir6.1/K-ATP通道在PD发生发展中发挥保护作用。第二部分星形胶质细胞Kir6.1/K-ATP通道对线粒体功能的调节作用及其机制研究目的:阐明星形胶质细胞Kir6.1/K-ATP通道在线粒体功能稳态中的作用及其机制方法:应用出生3天内的两基因型新生小鼠,提取中脑原代星形胶质细胞进行离体培养。给予上述两种星形胶质细胞100μM MPP十刺激,收集细胞上清及细胞用于后续实验。应用DHE(Dihydroethidium,二氢乙啶)荧光探针检测星形胶质细胞Kir6.1/K-ATP通道缺失对MPP+介导的原代星形胶质细胞内ROS生成的影响。应用LDH试剂盒检测星形胶质细胞Kir6.1/K-ATP通道缺失对MPP+介导的原代星形胶质细胞LDH释放的影响。应用细胞免疫荧光、Western blot方法检测星形胶质细胞Kir6.1/K-ATP通道缺失对MPP+介导的原代星形胶质细胞凋亡的影响。应用Western blot检测MPP+对两种基因型星形胶质细胞中炎症因子IL-1β、TNF-α、IL-6蛋白水平和营养因子BDNF、GDNF、FGF2转录水平的影响。应用Western blot方法检测MPP+对两种基因型星形胶质细胞中炎症信号(P65、NLRP3、补体C3、Caspase-1)水平的影响。应用线粒体荧光探针Mito Tracker Green进行染色,经流式细胞仪检测星形胶质细胞Kir6.1/K-ATP通道缺失对MPP+介导的原代星形胶质细胞线粒体数量的影响。应用线粒体荧光探针Mito Tracker-Green、Mito Deep-red进行免疫荧光双标,通过流式细胞仪检测星形胶质细胞Kir6.1/K-ATP通道缺失对MPP+介导的原代星形胶质细胞线粒体膜电位的影响。应用线粒体荧光染料JC-1进行染色,通过细胞免疫荧光法及流式细胞仪检测星形胶质细胞Kir6.1/K-ATP通道缺失对MPP+介导的原代星形胶质细胞线粒体膜电位的影响。应用线粒体生成ROS的特异荧光探针Mito-SOX,通过细胞免疫荧光法及流式细胞仪检测星形胶质细胞Kir6.1/K-ATP通道缺失对MPP+介导的原代星形胶质细胞线粒体来源的ROS含量的影响。对TOM20及Kir6.1两种蛋白进行细胞免疫荧光双标,检测星形胶质细胞Kir6.1的分布及在线粒体上的表达情况。应用MPP+刺激离体培养的两种基因型小鼠中脑原代星形胶质细胞,结合工具药线粒体K-ATP通道的特异阻断剂5-羟基癸酸(5-HD)、开放剂二氮嗪(Diazoxid),检测线粒体的ROS及线粒体的膜电位变化,结合ELISA检测上述不同处理组的细胞培养上清中TNF-α、IL-6、IL-1β三种炎症因子的变化。应用分子克隆技术扩增并纯化GFP-LC3及mito DSRed2质粒,共转染体外培养的两种基因型的原代星形胶质细胞,通过细胞免疫荧光检测星形胶质细胞Kir6.1/K-ATP通道缺失对MPP+介导的原代星形胶质细胞线粒体自噬的影响。应用线粒体分离试剂盒分离离体培养的两种基因型星形胶质细胞线粒体蛋白和除去线粒体部分的胞浆蛋白,结合Western blot方法检测星形胶质细胞Kir6.1/K-ATP通道缺失对MPP+介导的原代星形胶质细胞线粒体自噬相关蛋白(PINK1/PARKIN、P62、LC3II/I)的影响。应用离体培养的两种基因型小鼠中脑原代星形胶质细胞,预孵育自噬诱导剂雷帕霉素(Rapamycin),再给予100μM MPP十刺激,48h后收集细胞上清,作为条件培养基(Condition Medium,CM)刺激Kir6.1~(loxp/loxp)小鼠原代中脑神经元(星形胶质细胞上清与神经元培养基1:2混合)孵育6 h,明场摄片及TH免疫组化观察星形胶质细胞上清对中脑DA能神经元数目及轴突长度的影响。结果:1)MPP+刺激引起原代星形胶质细胞ROS释放增多,Kir6.1~(loxp/loxp)GFAP~(cre/+)小鼠中脑原代星形胶质细胞的ROS增加更为显着。2)星形胶质细胞Kir6.1/K-ATP通道缺失促进MPP+诱导的原代星形胶质细胞的LDH的释放。3)星形胶质细胞Kir6.1/K-ATP通道缺失加重MPP+诱导的原代星形胶质细胞的凋亡。4)星形胶质细胞Kir6.1基因缺失,显着上调IL-1β、TNF-α的蛋白水平。5)星形胶质细胞Kir6.1基因缺失促进星形胶质细胞中炎症信号通路(P65、补体C3、Caspase-1)的激活。6)MPP+刺激引起原代星形胶质细胞线粒体数量增多,Kir6.1~(loxp/loxp)GFAP~(cre/+)小鼠的星形胶质细胞的线粒体数量增加更为明显。7)MPP+刺激引起原代星形胶质细胞线粒体膜电位下降,Kir6.1~(loxp/loxp)GFAP~(cre/+)小鼠的星形胶质细胞的线粒体膜电位下降更为明显。8)MPP+刺激引起原代星形胶质细胞线粒体来源的ROS生成增加,Kir6.1~(loxp/loxp)GFAP~(cre/+)小鼠的星形胶质细胞的线粒体来源的ROS生成增加更为明显。9)TOM20及Kir6.1抗体进行Western blot、细胞免疫荧光双标,结果显示星形胶质细胞Kir6.1在线粒体内有分布。10)Kir6.1~(loxp/loxp)小鼠原代中脑星形胶质细胞,预孵育5-HD后再给予MPP+,能进一步降低线粒体膜电位;同时孵育5-HD和DIAZ后再给予MPP+不能恢复膜电位水平。Kir6.1~(loxp/loxp)小鼠原代中脑星形胶质细胞,预孵育5-HD后再给予MPP+,能进一步增加线粒体来源的ROS水平;同时孵育5-HD和DIAZ后再给予MPP+不能恢复线粒体来源ROS的水平。11)共转染GFP-LC3及Mito-Ds Red2质粒,免疫荧光结果显示:星形胶质细胞Kir6.1/K-ATP通道缺失下调MPP+引起的星形胶质细胞线粒体自噬水平。12)分离两种基因型星形胶质细胞的线粒体蛋白和去除线粒体部分的胞浆蛋白,Western blot结果显示:星形胶质细胞Kir6.1基因缺失,抑制PINK1/parkin介导的线粒体自噬水平。13)Kir6.1~(loxp/loxp)GFAP~(cre/+)小鼠原代中脑星形胶质细胞,预孵育Rapamycin后再给予MPP+,能显着恢复MPP+诱导的线粒体膜电位和线粒体来源的ROS水平。14)MPP+刺激原代两种基因型小鼠中脑星形胶质细胞,收集上清作为条件培养基,孵育原代中脑神经元,神经元数量及突起长度显着减少,星形胶质细胞Kir6.1基因缺失组条件培养基刺激后的神经元数量及突起长度减少更为明显。预孵育Rapamycin条敲组的CM,可以逆转上述神经元的损伤。结论:1)星形胶质细胞Kir6.1基因缺失加剧MPP+引起的星形胶质细胞损伤、线粒体功能损伤及炎症反应的上调。2)星形胶质细胞尤其是线粒体Kir6.1/K-ATP通道缺失抑制线粒体自噬,加重MPP+引起的线粒体功能紊乱,促进原代中脑DA能神经元的损伤。3)星形胶质细胞在MPP+诱导的星形胶质细胞线粒体自噬的调节中发挥重要作用。综上所述,本文工作的主要创新之处在于:创新之处1、揭示星形胶质细胞Kir6.1/K-ATP通道在PD神经损伤中发挥重要作用。本研究应用星形胶质细胞Kir6.1条件敲除小鼠,制备PD急性和慢性模型,发现星形胶质细胞Kir6.1基因缺失加重小鼠PD急性和慢性模型中DA能神经元丢失和胶质细胞增殖活化的现象。其机制涉及自噬反应的抑制,内网应激反应、炎症反应、凋亡信号的激活。结果表明星形胶质细胞Kir6.1/K-ATP通道是参与PD发生发展过程中具有重要作用的靶点。2、阐明星形胶质细胞Kir6.1/K-ATP通道通过调节线粒体自噬维持星形胶质细胞线粒体功能参与PD发生发展的分子机制。本研究揭示,星形胶质细胞Kir6.1基因缺失加剧MPP+所致星形胶质细胞的损伤及线粒体功能的损伤,诱导了星形胶质细胞的炎症反应,加剧DA能神经元损伤。并进一步阐明星形胶质细胞尤其是线粒体上的Kir6.1/K-ATP通道参与调控线粒体自噬,调节星形胶质细胞线粒体功能发挥保护作用。为研发靶向于星形胶质细胞线粒体功能调节的神经保护剂提供了新的靶标。(本文来源于《南京医科大学》期刊2018-06-01）
线粒体通道论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
旨在探讨瞬时电位受体M2离子通道(TRPM2)在H9N2流感病毒感染小鼠肺微血管内皮细胞(PMVEC)导致线粒体损伤过程中的作用。在已建立TRPM2 shRNA PMVEC的基础上,采用5MOI H9N2猪流感病毒感染细胞,在病毒作用后24和48 h提取各组细胞的线粒体进行蛋白定量,检测各组细胞线粒体超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、一氧化氮合成酶(NOS)、线粒体呼吸链复合物Ⅳ活性和ATP酶水平;利用激光共聚焦显微镜观察线粒体膜电位变化(JC-1染色)及细胞凋亡(Annexin V-FITC/PI双染色法)情况。结果表明:H9N2-SIV感染后TRPM2 shRNA PMVEC内SOD活性、GSH水平和Na~+-K~+-ATP、线粒体呼吸链复合物Ⅳ活性显着高于对照shRNA PMVEC(P<0.05或P<0.01);mtNOS活性则极显着低于shRNA PMVEC(P<0.01)。JC-1染色显示TRPM2-siRNA PMVEC线粒体膜电位水平高于对照shRNA PMVEC,但是AnnexinV-FITC/PI染色显示细胞凋亡则低于H9N2感染对照shRNA PMVEC。结果提示:TRPM2基因沉默有效减缓H9N2感染导致NOS产生,显着降低SOD、GSH、线粒体呼吸链复合物Ⅳ、Na~+-K~+-ATP的消耗以及线粒体膜电位的下降程度,进而有效缓解PMVEC线粒体损伤及细胞凋亡。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
线粒体通道论文参考文献
[1].张恒,刘春晓,李媛媛,石月萍.加减枳实薤白桂枝汤通过激活线粒体ATP敏感性钾通道抑制缺血再灌注心肌线粒体凋亡途径[J].中国动脉硬化杂志.2019
[2].李军,高晶萍,张雅琪,罗强,梁亭.TRPM2离子通道在H9N2流感病毒感染小鼠肺微血管内皮细胞线粒体损伤中的作用[J].畜牧兽医学报.2019
[3].张海波,李运丽,艾景雪,高瑞,宋志明.从线粒体膜稳定作用探讨线粒体K(MITO-KATP)通道开放剂改善老年冠心病大鼠心肌缺血再灌注损伤的机制[J].中国循证心血管医学杂志.2019
[4].孙朝阳,周坤,马翔.线粒体ATP敏感性钾离子通道开放剂改善冠心病大鼠模型心肌氧化应激损伤的分子机制[J].中华老年多器官疾病杂志.2019
[5].田绍泽,刘思禹,王坤,殷倩,岳远征.植物线粒体电压依赖性阴离子通道蛋白VDACs综述[J].分子植物育种.2019
[6].肖雯婧,侯君,呼永河.线粒体大电导钙离子激活钾通道的研究进展[J].西南国防医药.2018
[7].王天奇,原大江.降钙素基因相关肽介导的心肌缺血再灌注损伤保护与线粒体叁磷酸腺苷敏感型钾通道的关系[J].中国药物与临床.2018
[8].施宁华,韩江全,邓才洪,何婧.线粒体ATP敏感性钾通道在糖尿病合并脑缺血损伤中作用的研究进展[J].天津医药.2018
[9].王志桐,王晓良.线粒体阴离子通道VDAC1作为阿尔茨海默病潜在药物靶标的研究进展[J].药学学报.2018
[10].胡兆丽.星形胶质细胞Kir6.1/K-ATP通道调节线粒体功能参与帕金森病的发生[D].南京医科大学.2018
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