论文摘要
内含肽是一种能够介导蛋白质分子从前体分子中自我切除,同时将其双侧的外显肽蛋白通过肽键连接起来的功能性蛋白质,其中断裂型内含肽在抗体连接领域有着广泛应用。但由于天然断裂型内含肽C端可特异性识别外显肽的前3位氨基酸序列——半胱氨酸、苯丙氨酸和天冬酰胺（CFN）,因此在蛋白剪接反应后不可避免的会引入外源氨基酸。由于本课题组前期开发出的断裂内含肽介导的双特异性抗体药物装配平台也存在该缺陷,因此本研究尝试采用抗体铰链区的半胱氨酸、天冬氨酸和赖氨酸（CDK）取代"CFN"作为内含肽的识别位点,并构建突变型断裂内含肽Npu*GEPDnaE。结果表明,突变体可以识别"CDK"并成功发生了内含肽剪接反应。进而对影响该内含肽剪接反应平台的各因素如NaCl浓度、DTT浓度、pH和温度等进行了考察,结果表明在所考察的范围内断裂内含肽的剪接反应均可很好的进行。该内含肽剪接反应平台的建立将有助于减少外源氨基酸的引入,进一步拓展了内含肽底物宽泛性,为内含肽应用于抗体药物特别是双特异性抗体药物的装配提供了技术支持。
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文章来源
类型: 期刊论文
作者: 窦同璐,陈浩,曹津,陈俊升,朱建伟
关键词: 断裂内含肽,外显肽,双特异性抗体药物,蛋白质剪接,外源氨基酸
来源: 中国药科大学学报 2019年05期
年度: 2019
分类: 医药卫生科技,基础科学
专业: 生物学
单位: 上海交通大学药学院细胞工程及抗体药物教育部工程研究中心
基金: 国家自然科学基金资助项目(No.81773621)~~
分类号: Q78
页码: 606-613
总页数: 8
文件大小: 1445K
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标签：断裂内含肽论文; 外显肽论文; 双特异性抗体药物论文; 蛋白质剪接论文; 外源氨基酸论文;