乙型脑炎病毒野毒株SA14包膜蛋白K279M突变对其神经毒力的影响

乙型脑炎病毒野毒株SA14包膜蛋白K279M突变对其神经毒力的影响

论文摘要

目的构建乙型脑炎病毒野毒株SA14包膜蛋白K279M突变株感染性克隆并拯救病毒,探索K279M突变对其毒力的影响。方法应用重叠延伸PCR和分子克隆技术构建含有K279M突变的乙脑突变病毒全长cDNA质粒,经酶切鉴定后,以其为模板体外转录获得RNA,电转染BHK21细胞,得到恢复病毒JEV SA14 (K279M)。分别用野毒株JEV SA14和JEV SA14 (K279M)接种BHK21细胞和脑内接种昆明鼠,比较突变株与野毒株的蚀斑大小、生长特点以及对昆明鼠的神经毒力。结果酶切鉴定表明,突变病毒感染性克隆成功构建。病毒蚀斑试验显示,JEV SA14 (K279M)的蚀斑直径约为2~3 mm,大于野毒株蚀斑直径的1~2 mm。突变株病毒LD50为0.21PFU,大于野毒株病毒LD50的0.05PFU。结论乙脑包膜蛋白K279M突变增大了病毒的蚀斑,但降低了病毒的脑内神经毒力。

论文目录

  • 材料与方法
  •   1 材料
  •     1.1 菌株、质粒、细胞及实验动物
  •     1.2 主要试剂
  •   2 方法
  •     2.1 重叠延伸PCR扩增含K279M突变的prM/E片段
  •     2.2 乙脑E蛋白279位氨基酸突变病毒JEV SA14(K279M)感染性克隆的构建
  •     2.3 病毒cDNA质粒的酶切鉴定
  •     2.4 JEV SA14 (K279M)病毒的拯救及传代
  •     2.5 病毒的测序鉴定
  •     2.6 病毒蚀斑形成比较
  •     2.7 拯救病毒生长特性观察
  •     2.8 恢复病毒神经毒力的检测
  • 结 果
  •   1 重叠延伸PCR扩增含E279 突变的prM/E片段
  •   2 pACNR-JEV SA14 (K279M)-5'质粒的酶切鉴定
  •   3 全长质粒pACNR-JEV SA14 (K279M)的酶切鉴定
  •   4 病毒测序鉴定
  •   5 病毒蚀斑形成试验
  •   6 病毒的生长曲线
  •   7 恢复病毒的神经毒力
  • 讨 论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 冯亚岚,刘超越,李玥珂,黄荣,袁磊,唐丽萍,杨健

    关键词: 乙脑病毒,正向突变,神经毒力

    来源: 中国病原生物学杂志 2019年09期

    年度: 2019

    分类: 医药卫生科技,基础科学

    专业: 生物学,基础医学

    单位: 川北医学院基础医学院,川北医学院附属医院感染科

    基金: 南充市川北医学院校地合作项目(No.NSMC20170406)

    分类号: R373.31

    DOI: 10.13350/j.cjpb.190909

    页码: 1029-1033

    总页数: 5

    文件大小: 2221K

    下载量: 41

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