利用E.coli表达系统制备猪细小病毒NS1抗原表位区蛋白的研究

利用E.coli表达系统制备猪细小病毒NS1抗原表位区蛋白的研究

论文摘要

为通过E.coli表达系统制备猪细小病毒NS1抗原表位区蛋白,本试验利用DNAstar软件确定含有抗原表位的NS1蛋白片段,然后运用PCR方法从含有NS1基因的载体中扩增NS1抗原表位区基因片段,并将该基因片段插入到原核表达载体pGEX-4T-1中,构建成与GST标签融合的NS1抗原表位基因的表达载体pGEX-GST-NS1,将表达载体转化BL21大肠杆菌筛选出工程菌。经IPTG诱导表达NS1融合蛋白,经GST-琼脂糖凝胶磁珠分离纯化,制备出与GST融合的NS1抗原表位蛋白。经SDS-PAGE以及Western blot鉴定,制备的NS1融合蛋白分子量和预期一致,并且可以和抗GST标签抗体进行特异反应,表明NS1抗原蛋白已成功制备,为下一步NS1抗体的研制提供了必要的条件。

论文目录

  • 1 材料和方法
  •   1.1 菌种、质粒
  •   1.2 主要试剂及仪器
  •   1.3 猪NS1抗原表位基因的扩增及表达载体的构建
  •   1.4 NS1抗原表位基因的诱导表达
  •   1.5 目的蛋白的纯化与鉴定
  •   1.6 SDS-PAGE和Western blot鉴定
  •   1.7 NS1融合蛋白表达条件的优化
  •   1.8 统计分析
  • 2 结果与分析
  •   2.1 猪NS1抗原表位基因的扩增及表达载体的构建
  •   2.2 NS1抗原表位基因的诱导表达、纯化及鉴定
  •   2.3 对NS1融合蛋白诱导表达时间的优化
  •   2.4 对NS1融合蛋白诱导IPTG用量的优化
  • 3 讨论与结论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 王幸,张建楼,霍珊珊,仲飞,张辉

    关键词: 猪细小病毒,蛋白,抗原表位,分离纯化

    来源: 河北农业大学学报 2019年01期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,基础科学

    专业: 生物学,畜牧与动物医学

    单位: 吉林农业大学动物科学技术学院,河北农业大学动物医学院/河北兽医生物技术工程技术研究中心

    基金: 河北省高等学校科学技术研究项目(QN2016189)

    分类号: S852.65

    DOI: 10.13320/j.cnki.jauh.2019.0015

    页码: 90-95

    总页数: 6

    文件大小: 252K

    下载量: 75

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