桑树几丁质酶基因Machi1的克隆及原核表达

论文摘要

以桑品种云桑2号的健康叶片为材料,通过反转录PCR结合RACE方法克隆到桑树几丁质酶基因Machi1（GenBank登录号:MK783295）。Machi1基因的完整ORF序列长度为972 bp,编码323个氨基酸残基,预测Machi1蛋白分子质量为349kD,理论等电点（pI）为684。结构分析显示Machi1蛋白含有一个信号肽,无跨膜结构域。Machi1蛋白属于糖苷水解酶19家族,含有保守的ChtBD1结构域,预测具有几丁质酶活性。多序列比对结果表明,Machi1蛋白与川桑几丁质酶Mnchi19一致性最高为935%,系统进化树结果与之相一致。组织表达模式分析结果表明,Machi1基因在桑树叶片中的表达量最高。随后通过原核表达系统获得了重组目的蛋白并进行了纯化,用纯化的蛋白质免疫新西兰大白兔制备Anti-Machi1多克隆抗体。利用间接ELISA法测定其效价在1∶80 000以上,并经Western blotting验证了该多克隆抗体的特异性,为后续研究Machi1的抗病机制及生物学功能奠定了基础。

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类型: 期刊论文

作者: 肖圣燕,朱峰,冉瑞法,李镇刚,张永红,邵榆岚,唐芬芬,白兴荣

关键词: 桑树,几丁质酶,基因克隆,原核表达,多克隆抗体

来源: 蚕业科学 2019年05期

年度: 2019

分类: 农业科技

专业: 蚕蜂与野生动物保护

单位: 云南省农业科学院蚕桑蜜蜂研究所

基金: 国家自然科学基金项目(No.31560675,31960684),云南省农业基础研究联合专项青年项目(No.2018FG001-105),云南蚕桑蜜蜂研究专项(No.2018CF01)

分类号: S888.7

DOI: 10.13441/j.cnki.cykx.2019.05.002

页码: 634-642

总页数: 9

文件大小: 3214K

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标签：桑树论文;  几丁质酶论文;  基因克隆论文;  原核表达论文;  多克隆抗体论文;