呋喃它酮代谢物的可视化免疫亲和凝胶柱检测分析

论文摘要

为了建立一种用于检测动物源性食品中呋喃它酮代谢物（AMOZ）的可视化免疫亲和凝胶柱检测方法,利用对醛基苯甲酸（CPA）对AMOZ进行衍生处理得到衍生物CPAMOZ,制备CPAMOZ完全抗原,并通过免疫小鼠获取CPAMOZ多克隆抗体,使用间接ELISA法对抗体的效价及特异性进行测定。实验采用恒温振荡法将溴化氰活化的琼脂糖凝胶分别与CPAMOZ抗体、HRP抗体偶联制得CPAMOZ抗体胶和HRP抗体胶,作为亲和凝胶柱的检测层与质控层。建立AMOZ可视化免疫亲和凝胶柱分析方法,确定了该方法在酶标抗原的稀释倍数为5000、HRP胶稀释20倍、CPAMOZ抗体胶稀释15倍的条件下,达到最佳工作状态。实验结果表明CPAMOZ多克隆抗体效价为1:64000,IC50值为2.19μg/L,具有良好的灵敏度及特异性。建立的AMOZ可视化免疫亲和凝胶检测柱方法检测限为4μg/L,动物源实际样品中AMOZ的检测限为2μg/kg。该方法快速便捷,符合我国高通量筛选食品中AMOZ的要求。

论文目录

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

1.2 仪器与设备

1.3 方法

1.3.1 人工半抗原CPAMOZ的合成

1.3.2 CPAMOZ完全抗原的合成及鉴定

1.3.3 CPAMOZ多克隆抗体的制备

1.3.4 多克隆抗体的鉴定

1.3.5 CPAMOZ酶标抗原的制备

1.3.6 封闭胶的制备

1.3.7 抗体胶和HRP抗体胶的制备

1.3.8 AMOZ可视化免疫凝胶柱分析方法的建立

1.3.8. 1 免疫亲和凝胶检测柱的组装及检测步骤

1.3.8. 2 酶标抗原的优化

1.3.8. 3 凝胶柱检测层的优化

1.3.8. 4 凝胶柱质控层的优化

1.3.8. 5 AMOZ可视化免疫凝胶柱检出限的确定

1.3.8. 6 AMOZ可视化免疫凝胶柱特异性的确定

1.3.8. 7 实际样品的检测

1.3.8. 8 凝胶柱稳定性的检测

1.3.9 数据统计分析

2 结果与分析

2.1 完全抗原的鉴定

2.2 CPAMOZ多克隆抗体的鉴定

2.3 AMOZ可视化免疫凝胶柱酶标抗原的确定

2.4 AMOZ可视化免疫凝胶柱检测层的确定

2.5 AMOZ可视化免疫凝胶柱质控层的确定

2.6 AMOZ可视化免疫凝胶柱检测限的确定

2.7 AMOZ可视化免疫凝胶柱特异性的确定

2.8 实际样品的检测结果

2.9 凝胶柱稳定性的检测

3 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 张冬昊,赵桐桐,魏东,李佳仪,何扩

关键词: 呋喃它酮,抗体,凝胶柱,特异性

来源: 现代食品科技 2019年09期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑

专业: 轻工业手工业

单位: 河北北方学院河北省农产品食品质量安全分析检测重点实验室,唐山市食品药品综合检验检测中心

基金: 河北省科技攻关重点研发项目(16236802D-5),河北省教育厅科技研发项目(QN206242),河北省重点研发计划项目(18227148)

分类号: TS207.3

DOI: 10.13982/j.mfst.1673-9078.2019.9.040

页码: 304-310

总页数: 7

文件大小: 1489K

下载量: 57

呋喃它酮代谢物的可视化免疫亲和凝胶柱检测分析

论文摘要

论文目录

文章来源

相关论文文献

猜你喜欢