SETD8–/–抑制人胚胎干细胞向造血分化

SETD8–/–抑制人胚胎干细胞向造血分化

论文摘要

表观遗传调控作为一种广泛的基因表达调控方式,已被报道可以参与干细胞多能性、谱系分化等生物学过程。虽然许多表观遗传调控因子的功能已被解析,但仍有一些并未被深入研究。SETD8(赖氨酸甲基转移酶5A, lysine methyltransferase 5A)作为一种甲基化转移酶,已被证实能够介导组蛋白H4第20位赖氨酸的单甲基化,并且可以参与细胞周期、P53介导的DNA损伤等过程。但是, SETD8是否可以直接调控人胚胎干细胞的多能性及其谱系分化还没有报道。该研究首先利用CRISPR/Cas9基因编辑技术在人的胚胎干细细胞中敲除SETD8。功能研究表明,敲除SETD8显著降低了多能性基因OCT4和NANOG的表达水平,并且抑制了体外造血发育过程。接着利用了siRNA在造血发育不同时期敲低STED8,发现均可以抑制造血发育过程,进一步证实了SETD8可以在各个阶段调控体外造血发育。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料试剂与仪器
  •   1.2 细胞培养
  •   1.3 针对SETD8设计特异性向导RNA(sgRNA)
  •     1.3.1 质粒构建
  •     1.3.2 慢病毒包装
  •     1.3.3 ES细胞感染病毒
  •     1.3.4 稳定敲除SETD8 H1细胞株的筛选及鉴定
  •   1.4 RNA干扰(RNAi)技术介导靶基因SETD8的序列特异性沉默
  •   1.5 单层造血分化模型
  •   1.6 流式细胞术检测
  •   1.7 统计学分析
  • 2 结果
  •   2.1 单层造血分化体系中SETD8表达呈动态变化
  •   2.2 利用CRISPR/Cas9技术建立敲除SETD8基因的H1细胞株
  •   2.3 敲除SETD8后影响hESC的多能性
  •   2.4 敲除SETD8抑制hESC向造血分化进程
  •   2.5 SETD8调控生血内皮及造血干祖细胞的产生
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 王鼎,李亚朴,黄鑫,马艺戈,郭青,赵艳红,王冰蕊,徐长禄,张英楠,石莉红

    关键词: 技术,细胞,多能性,单层分化

    来源: 中国细胞生物学学报 2019年08期

    年度: 2019

    分类: 基础科学

    专业: 生物学

    单位: 中国医学科学院北京协和医学院血液病医院(血液学研究所)实验血液学国家重点实验室

    基金: 国家重点研发计划(批准号:2016YFA0102300,2017YFA0103102),国家自然科学基金(批准号:81870089,81700105),中国医学科学院医学与健康科技创新工程(批准号:2016-I2M-1-018,2016-I2M-3-002,2017-I2M-1-015),中国医学科学院中央级公益性科研院所基本科研业务费(批准号:2018PT31033),国家重点实验室自主课题(批准号:157-z18-07)资助的课题~~

    分类号: Q78

    页码: 1578-1587

    总页数: 10

    文件大小: 4061K

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