人Annexin A2基因真核表达的构建及活性

人Annexin A2基因真核表达的构建及活性

论文摘要

为了构建人Annexin A2基因真核表达载体。通过TRIzol法提取Hela宫颈癌细胞中总RNA,采用RT-PCR技术(逆转录-聚合酶链反应)扩增Annexin A2的基因片段,并成功构建成VR1012-Annexin A2-HA重组质粒。经酶切、测序检测其构建的正确性,将质粒瞬时转染到293T人胚肾细胞,使用免疫荧光和蛋白印迹(Western blot)法检测基因表达,使用流式细胞术检测转染后细胞凋亡率。结果表明实验成功构建了具有表达活性的Annexin A2真核表达质粒,为进一步研究Annexin A2的抗凋亡作用奠定了基础。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料
  •   1.2 方法
  •     1.2.1 Hela细胞cDNA的获取
  •     1.2.2 Annexin A2基因的PCR扩增和亚克隆载体构建
  •     1.2.3 真核表达载体构建和鉴定
  •     1.2.4 细胞培养和转染
  •     1.2.5 免疫印迹
  •     1.2.6 免疫荧光
  •     1.2.7 流式细胞术
  • 2 结果与分析
  •   2.1 Annexin A2 cDNA的PCR扩增
  •   2.2 亚克隆载体p MD-20T-Annexin A2-HA和真核表达载体VR1012-Annexin A2-HA的鉴定
  •   2.3 免疫印迹分析
  •   2.4 免疫荧光分析
  •   2.5 流式细胞术分析
  • 3 讨论
  • 4 结论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 边帅,王佳雯,赵月,李芳宇,赵大庆,王泽玉

    关键词: 质粒构建,转染,抗凋亡作用

    来源: 科学技术与工程 2019年16期

    年度: 2019

    分类: 工程科技Ⅱ辑,基础科学

    专业: 生物学

    单位: 长春中医药大学吉林省人参科学研究院

    基金: 中国博士后科学基金面上项目(2017M621181)资助

    分类号: Q78

    页码: 82-86

    总页数: 5

    文件大小: 286K

    下载量: 43

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