论文摘要
目的研究miR-124靶向镁转运蛋白1（MagT1）可否调控活化后T细胞功能耗竭。方法 1)分离外周血单个核细胞,用IFN-γ、IL-2、抗-CD3抗体、抗-CD28抗体和IL-1α活化T细胞;流式细胞仪检测T细胞活化标记分子CD25和CD69所占的比例。2)构建miR-124/miR-124 sponge慢病毒载体;包装慢病毒后感染活化T细胞,用RT-qPCR检测感染后T细胞内miR-124和MagT1基因表达。3)生物信息学分析miR-124与MagT1的靶向位点,并用双荧光素酶报告基因系统鉴定。4)Western blot法检测慢病毒感染前后T细胞MagT1和PD-1蛋白水平。5)CCK8法检测慢病毒感染前后T细胞增殖能力;ELISA法检测细胞T分泌细胞因子TNF-α和TGF-β的能力。结果流式细胞仪检测表明T细胞活化成功。RT-qPCR检测表明慢病毒构建成功,miR-124/miR-124 sponge载体分别显著上调或下调miR-124的表达（P<0.01）。双荧光素酶报告基因系统证实miR-124靶向MagT1 3′UTR并抑制其表达。Western blot表明miR-124过表达组MagT1蛋白水平低于对照组（P<0.05）,PD-1蛋白水平高于对照组（P<0.05）,抑制miR-124后,MagT1蛋白水平高于对照组（P<0.05）,PD-1蛋白水平低于对照组（P<0.05）。miR-124过表达使T细胞增殖能力和分泌TNF-α能力显著降低,而抑制miR-124使T细胞增殖能力和分泌TGF-β能力显著升高（P<0.01）。结论 miR-124可以负向调节靶基因MagT1的表达,并对活化后T细胞功能耗竭具有重要的调节作用。
论文目录
文章来源
类型: 期刊论文
作者: 袁紫林,刁波
关键词: 微小,镁转运蛋白,细胞耗竭
来源: 基础医学与临床 2019年10期
年度: 2019
分类: 医药卫生科技,基础科学
专业: 生物学,基础医学
单位: 中国人民解放军中部战区总医院医学实验科,中国人民解放军中部战区总医院中枢神经系统肿瘤发生与干预湖北省重点实验室
基金: 湖北省卫生健康委员会面上项目(WJ2019M263)
分类号: R392
DOI: 10.16352/j.issn.1001-6325.2019.10.006
页码: 1404-1409
总页数: 6
文件大小: 1099K
下载量: 66
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