液相色谱串联质谱快速检测昆虫体内多胺方法的建立和应用

论文摘要

多胺是一类含有两个以上氨基的脂肪烃阳离子化合物,对原核生物和真核生物的生长和发育至关重要。多胺在昆虫的生长过程中扮演着重要的角色,参与了胚胎发育、卵黄蛋白合成、生长、变态、激素代谢和行为等过程。尽管多胺对昆虫的各种生理和发育过程来说是必不可少的,但有关昆虫体内多胺的检测方法报道较少。本试验借助超高效液相色谱-三重四级杆串联质谱法和液相提取法建立了 一种简单、快速、灵敏和高效的同时检测昆虫体内七种多胺的方法,并分析了不同实验条件下昆虫体内多胺含量的变化,得到以下结果:（1）本研究用超高效液相色谱串联质谱法,结合亲水色谱柱对多胺进行分离和检测,不需要衍生程序。在最优条件下,所建立的方法能在5分钟内检测到7个尖锐且对称的多胺信号峰,检测多胺的总时间（包括样品制备、分离和检测）约为15分钟。所建立方法对七种多胺的仪器检出限为0.11-0.29 nM,仪器定量限为0.36-0.96 nM,日内和日间精密度范围分别为1.66-4.19%和1.70-4.72%。以0.8MHC1O4溶液作为提取溶剂,对黑尾叶蝉样品进行提取和检测,各多胺的平均回收率在86-115%之间,相对标准偏差在2-6%之间。（2）二氟甲基鸟氨酸对黑尾叶蝉体内多胺的影响。二氟甲基鸟氨酸是一种鸟胺酸去羧化酶的抑制剂,能够抑制细胞内腐胺、亚精胺和精胺的生成。用所建立的方法检测饲喂不同浓度二氟甲基鸟氨酸的黑尾叶蝉,结果表明黑尾叶蝉体内腐胺、亚精胺和精胺含量随着饲喂二氟甲基鸟氨酸浓度的上升而下降,而其它多胺的含量没有明显变化。说明所建立的方法能够用于检测昆虫体内多胺水平的真实变化。（3）不同种类的昆虫体内多胺浓度随虫龄的变化。用所建立的方法分别对黑尾叶蝉和豌豆蚜虫体内的多胺水平进行检测。检测结果表明在黑尾叶蝉体内能检测到全部七种多胺,浓度范围从1.27 ng/mg（硫酸胍基丁胺）到314.1 ng/mg（腐胺）,其中1,3-丙二胺浓度随虫龄的增加而增加,腐胺浓度在4龄时达到一个较高值,其它多胺含量都是随着虫龄增加而下降;雌虫黑尾叶蝉体内尸胺,1,3-丙二胺和3,3-二氨基二丙胺含量均显著高于雄虫。而在豌豆蚜虫体内只能检测到其中三种多胺（腐胺、亚精胺和精胺）,浓度范围从30.22 ng/mg（腐胺）到1679.98 ng/mg（亚精胺）,浓度随着虫龄增加而下降。

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文章来源

类型: 硕士论文

作者: 吕炜炜

导师: 王宗文

关键词: 液相色谱串联质谱,亲水性色谱,昆虫多胺,龄期

来源: 福建农林大学

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: 福建农林大学

分类号: Q966

DOI: 10.27018/d.cnki.gfjnu.2019.000210

总页数: 54

文件大小: 3193K

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