集成化糖蛋白质组学方法的发展

论文摘要

蛋白质糖基化是一种重要的翻译后修饰,糖链与蛋白质氨基酸连接的位点称为糖基化位点。糖蛋白质组学的分析一般包括糖基化位点的检测,糖链结构的解析和完整糖肽鉴定。糖蛋白组学分析的样品处理步骤一般包括蛋白质的酶解、糖蛋白或糖肽的富集、去糖基化和脱盐等。然而目前的大多数方法只能单一地分析糖基化位点和糖链,不仅操作耗时并受到毫克级蛋白质起始量的限制。本论文基于枪头设计了一种简单、集成化的糖蛋白质组学技术（simple and integrated spintip-based glycoproteomics technology,Glyco-SISPROT）。该技术可以实现对毫克级别微量蛋白质样品的处理,并在较短的处理时间内实现糖蛋白质组的全面分析。通过将强阳离子交换填料SCX,C18填料和伴刀豆球蛋白凝集素填料ConA整合到枪头内,并优化用量和填充方式形成了Glyco-SISPROT技术。该技术能高效地处理组织样品来源的蛋白质和多肽样品,并实现完整糖肽、糖链和去糖肽的同时大规模蛋白质组学分析。通过使用多种糖苷酶组合,约1770个去糖肽和1850个糖基化位点可以被成功地从100微克的小鼠肝脏蛋白质或100微克的小鼠肝脏多肽中检测到。其中,PNGase F糖苷酶和Endos糖苷酶都能检测到的糖基化位点约占30%。此外,以蛋白质为起始原料,Glyco-SISPROT技术能将几天的处理时间缩短到6个小时左右,并具有良好的操作重现性（单针小鼠肝样品Pearson相关系数>0.92）。总之,Glyco-SISPROT技术是使用有限的蛋白质作为起始原料得到最全面的糖蛋白质组信息的方法之一。该技术适用于稀有生物样品的高灵敏度,全方面的糖蛋白质组学分析。

论文目录

文章来源

类型: 硕士论文

作者: 李红杰

导师: 田瑞军

关键词: 糖蛋白质组学,糖肽,糖链,集成化样品制备

来源: 哈尔滨工业大学

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: 哈尔滨工业大学

分类号: Q51

DOI: 10.27061/d.cnki.ghgdu.2019.004862

总页数: 62

文件大小: 2458K

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