导读:本文包含了编辑酶论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:脱氨酶,编辑,脂蛋白,胞嘧啶,腺苷,多肽,病毒。
编辑酶论文文献综述
张梦然[1]（2019）在《新型编辑酶：“CRISPR工具箱”又一利器》一文中研究指出科技日报北京2月10日电 （记者张梦然）英国《自然》杂志近日发表了一项遗传学最新研究：美国加州大学伯克利分校科学家报告了一种能调控人类基因组的新型酶CasX，其编辑功能与先前已描述的CRISPR-Cas系统都不相同，这为人类的“CRISPR工具箱”再添一(本文来源于《科技日报》期刊2019-02-11）
魏小乐,王晓霞,贾怀杰,景志忠,王永祥[2]（2018）在《载脂蛋白B mRNA编辑酶催化亚基3A的表达及其DNA去甲基化功能鉴定》一文中研究指出目的真核细胞内,DNA甲基化调控在转座子沉默、基因表达调控、甚至病毒感染过程中起关键作用,其中HIV-1启动子的甲基化修饰在病毒潜伏感染中扮演重要角色。为明确载脂蛋白B mRNA编辑酶催化亚基3A(APOBEC3A,A3A)对HIV-1启动子5'LTR上CpG岛甲基化程度的调节作用,本研究构建并筛选出A3A异构体A3A Isotype a(A3Aa)和A3A Isotype b(A3A-b)高表达真核载体,分析其去甲基化功能。方法从THP-1细胞mRNA中扩增得到A3A-a和A3A-b的c DNA,分别克隆至真核表达载体pASIB-HA和pCAGGS-HA。转染HEK-293T细胞,蛋白印迹法检测A3A-a和A3A-b的蛋白表达,并筛选出A3A-a和A3A-b的高表达载体。接着将A3A-a和A3A-b高表达载体与实验室构建并修饰的HIV-1启动子甲基化载体p-me LTR-EGFP共转染HEK-293T,检测指示蛋白EGFP在细胞水平中的表达,评价A3A-a和A3A-b的去甲基化调节作用。结果 PCR结果、酶切鉴定和测序结果均表明A3A真核表达载体pASIB-HA-A3A1-a、pCAGGS-HA-A3A2-a、pASIB-HA-A3A1-b、pCAGGS-HA-A3A2-b构建成功。经过筛选,pCAGGS-HA-A3A2-a和pCAGGS-HA-A3A2-b中A3A蛋白表达量最高,并用于后续实验。甲基化载体共转染实验显示,相较于对照A3G转染组,A3A-a和A3A-b组中EGFP的表达量明显上调。结论本研究在细胞水平上证实A3A分子Isotype a和Isotype b均可识别DNA中5-甲基化胞嘧啶,催化HIV-1启动子CpG岛去甲基化,为后续研究A3A对HIV潜伏感染调控奠定了基础。(本文来源于《兰州大学学报(医学版)》期刊2018年03期）
袁琳,杨生永,胡源,胡接力,段晓琼[3]（2018）在《RNA编辑酶ADAR1在Huh7.5.1细胞中抑制HCV复制的研究》一文中研究指出目的:探究干扰素在Huh7.5.1细胞中对RNA编辑酶(adenosine deaminases acting on RNA 1,ADAR1)表达的影响,以及ADAR1对丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)复制的调控作用。方法:干扰素(IFN-α,30 IU/m L)刺激Huh7.5.1细胞后,利用real-time PCR和Western blot检测ADAR1表达水平的变化,同时HCV以一定滴度(0.2 MOI)感染Huh7.5.1细胞,观察IFN-α对HCV复制的影响;利用si RNA降低ADAR1表达,过表达质粒(ADAR1 p110和p150)增加ADAR1表达,并进一步利用基因编辑技术建立ADAR1稳定敲除细胞株,明确ADAR1与HCV的复制关系。结果:IFN-α诱导Huh7.5.1细胞ADAR1 p150表达(48 h:t=10.400,P=0.007;72 h:t=19.390,P=0.002),而不影响ADAR1 p110表达(48 h:t=0.806,P=0.472;72 h:t=1.929,P=0.133),同时IFN-α可显著抑制HCV复制(48 h:t=10.170,P=0.001;72 h:t=35.810,P=0.000)。ADAR1 p110和p150过表达48 h后,HCV病毒核酸和蛋白水平均明显低于空白对照(P=0.004,P=0.015);ADAR1 si RNA干扰后,HCV复制增加了2倍以上,差异显着(t=13.530,P=0.000);利用Crispr-cas9技术敲除掉Huh7.5.1中的ADAR1后,HCV复制也明显增加(t=5.259,P=0.023);ADAR1干扰后IFN-α仍然存在对HCV明显的抑制作用(t=9.146,P=0.001)。结论:IFN诱导蛋白ADAR1可以抑制HCV复制,且ADAR1部分介导了IFN-α对HCV复制的抑制。(本文来源于《重庆医科大学学报》期刊2018年05期）
周昕,安东建,胡锦跃[4]（2018）在《泛素编辑酶A20改变炎症状态及调控NF-κB信号通路逆转癌症的研究进展》一文中研究指出近来的研究数据极大地支持了慢性炎症是癌症发展的关键组成部分的概念。许多癌症来自感染部位,促炎细胞因子协调肿瘤微环境并参与肿瘤过程,通过促进肿瘤细胞增殖、存活、侵袭和转移。A20(也称为RNFAIP3)是泛素编辑酶,作为有效的抗炎信号分子,可以限制多个细胞内信号级联。最近的报道已将A20鉴定为各种癌症中关键的肿瘤抑制因子。本文就A20在炎症信号级联调控中的作用作一综述,并解释了A20如何通过抑制炎症反应来调节癌症进展。(本文来源于《现代肿瘤医学》期刊2018年09期）
魏小乐[5]（2018）在《载脂蛋白B mRNA编辑酶催化亚基3A（APOBEC3A）对HIV-1启动子甲基化的调节》一文中研究指出目的:HIV-1感染机体导致的潜伏感染是艾滋病(AIDS)无法治愈的主要原因之一,如何有效激活HIV-1潜伏病毒进而清除,是治愈AIDS的关键措施。其中HIV-1病毒潜伏库形成和维持的主要因素与HIV-1 5'LTR中CpG甲基化相关。APOBEC3A(A3A)是载脂蛋白B m RNA编辑酶催化亚基3(APOBEC3)家族成员之一,目前已经证实A3A能够识别甲基化胞嘧啶(methylcytosine,mC),参与DNA甲基化修饰的调节。A3A可以有效地激活HIV-1潜伏病毒,推测与A3A具有甲基化胞嘧啶脱氨酶活性有关,借助甲基化胞嘧啶脱氨酶活性催化5'LTR中的甲基化CpG去甲基化。为明确A3A对HIV-1启动子5'LTR上CpG岛甲基化的调节作用,通过构建并修饰携带有HIV-1启动子的甲基化载体,构建并筛选A3A异构体a(A3A Isotype a,A3A-a)和A3A异构体b(A3A Isotype b,A3A-b)高表达真核载体,分析A3A去甲基化功能,并探索其分子机制,为新型HIV病毒激活剂的研发奠定基础。方法:1.构建携带有HIV-1启动子5'LTR序列的载体p LTR-Luc2P-EGFP,CpG甲基化酶M.Sss I处理载体p LTR-Luc2P-EGFP,得到甲基化指示载体pmeLTR-Luc2P-EGFP,用亚硫酸氢盐修饰PCR测序和甲基化敏感的限制性内切酶酶切对甲基化载体进一步鉴定。2.HIV-1的5'LTR序列含有八个Cp G岛,易被甲基化,载体pmeLTR-Luc2P-EGFP的甲基化位点位于载体启动子区域,并携带Luc2P和EGFP两个指示标志,因此分别用叁种方法检测甲基化水平:(1)蛋白印迹(Western Blotting,WB)方法检测EGFP的表达,(2)荧光素酶方法检测相对荧光素酶活性和相对荧光素酶比值,(3)Real-Time PCR方法进行Hpa II敏感性分析。分别转染甲基化质粒pmeLTR-Luc2P-EGFP和未甲基化质粒pLTR-Luc2P-EGFP,验证初步选取的叁种甲基化检测方法可行;转染不同甲基化程度(100%、75%、50%、25%、0%)的质粒,验证叁种甲基化检测方法能检测不同的甲基化梯度,结果进行Pearson相关性分析,将0%、25%、50%、75%、100%设定为相应甲基化程度(100%、75%、50%、25%、0%)的标准值,对叁种方法的测得值和标准值之间的相关性进行评价。3.从THP-1细胞mRNA中扩增得到A3A-a和A3A-b的cDNA,分别克隆至真核表达载体pASIB-HA和pCAGGS-HA。转染HEK-293T细胞,蛋白印迹检测A3A-a和A3A-b的蛋白表达,并筛选出A3A-a和A3A-b的高表达载体。4.将A3A-a、A3A-b高表达载体和阴性对照载体pASIB-HA-A3G与甲基化载体pmeLTR-Luc2P-EGFP分别共转染HEK-293T,在细胞水平中,WB方法检测指示蛋白EGFP表达和荧光素酶方法检测相对荧光素酶活性,评价A3A-a和A3A-b的去甲基化调节作用。5.将A3A-a高表达载体转染HEK-293T细胞,免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,Co-IP)检测A3A和胸腺嘧啶糖苷酶(Thymine DNA glycosylase,TDG)的相互作用,研究A3A去甲基化分子机制。结果:1.经双酶切和测序鉴定携带有HIV-1启动子5'LTR序列的载体p LTR-Luc2P-EGFP成功构建;CpG甲基化酶M.Sss I处理,成功得到甲基化指示载体pmeLTR-Luc2P-EGFP;经亚硫酸氢盐修饰PCR测序和甲基化敏感的限制性内切酶酶切鉴定,证实甲基化处理有效。2.用WB、荧光素酶和Real-Time PCR方法检测甲基化水平。与未甲基化质粒p LTR-Luc2P-EGFP转染组相比发现,甲基化指示载体pmeLTR-Luc2P-EGFP转染组:(1)EGFP蛋白表达水平明显减弱;(2)相对荧光素酶活性明显减弱;(3)Hpa II的敏感性明显减弱。这些结果证实,甲基化指示载体pmeLTR-Luc2P-EGFP的甲基化处理有效,并验证了上述叁种方法可以用于甲基化检测。通过转染不同甲基化程度的质粒,随着甲基化程度的减弱:(1)EGFP蛋白表达水平逐渐增高;(2)相对荧光素酶活性和相对荧光素酶比值逐渐增强;(3)Hpa II的敏感性逐渐增高;Pearson相关性分析,结果显示上述叁种方法的测得值和标准值之间均呈较强正相关,Real-Time PCR方法相关性最好,WB方法次之,荧光素酶方法相对较低;这些结果验证了叁种方法可以用于检测不同程度的甲基化水平。3.PCR、酶切鉴定和测序结果均表明A3A真核表达载体pASIB-HA-A3A1-a/b、pCAGGS-HA-A3A2-a/b构建成功。经过WB筛选,pCAGGS-HA-A3A3-a和pCAGGS-HA-A3A3-b中A3A蛋白表达量较高,并用于后续实验。4.甲基化载体共转染结果显示,相较于对照A3G转染组,A3A-a和A3A-b组中EGFP的表达量明显上调,相对荧光素酶活性明显增强。5.Co-IP结果显示,在A3A和TDG蛋白位置处有明显条带,提示A3A与TDG蛋白存在相互作用。结论:1.在细胞水平上证实A3A分子异构体a和异构体b均可识别DNA中5-甲基胞嘧啶,催化HIV-1启动子CpG岛去甲基化,为进一步研究A3A对HIV潜伏感染调控奠定基础。2.A3A与TDG存在相互作用,提示A3A可能通过TDG依赖的活性DNA去甲基化途径参与5-甲基胞嘧啶去甲基化。(本文来源于《兰州大学》期刊2018-04-01）
王建军,赵平,靳雪原,程勇前,闫涛[6]（2018）在《慢性乙型肝炎患者外周血单核细胞中载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽3G的表达及其临床意义》一文中研究指出目的探讨载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽3G感染的不同阶段及应用不同抗病毒药物治疗期间水平的差异,推测固有免疫在抗病毒治疗中的作用。方法选择应用聚乙二醇化干扰素α-2a抗病毒治疗的慢性乙型肝炎(CHB)患者30例,口服恩替卡韦抗病毒治疗的CHB患者30例,未应用抗病毒治疗的CHB患者和乙型肝炎肝硬化代偿期患者各20例;健康成人20例为健康对照。检测CHB患者不同感染阶段及应用不同抗病毒药物期间的HBV DNA载量、ALT水平,应用荧光定量RT-PCR分析外周血单个核细胞(PBMC)中APOBEC3G mRNA的含量。结果与健康成人比较,CHB、肝硬化患者应用恩替卡韦及干扰素抗病毒治疗期间,患者PBMC中APOBEC3G mRNA的含量分别升高1.4倍(t=-3.166、P=0.003)、1.37倍(t=-2.206、P=0.0335)、1.44倍(t=-3.381、P=0.0014)和3.95倍(t=-4.790、P=0.0002)。未应用抗病毒治疗的CHB患者血中的APOBEC3G mRNA的含量与应用恩替卡韦治疗患者差异无统计学意义(t=-0.242、P=0.8097)。应用干扰素治疗的CHB患者PBMC中APOBEC3G mRNA的含量分别是未经治疗的CHB患者及应用恩替卡韦治疗患者的2.36倍(t=4.085、P=0.0002)和2.40倍(t=4.9、P<0.0001)。CHB炎患者ALT水平升高者PBMC中APOBEC3G mRNA的含量增高1.35倍,差异具有统计学意义(t=2.667、P=0.0112)。HBV DNA载量高低与A3G mRNA含量无关(F=0.2124、P=0.8871)。结论APOBEC3G在干扰素抗病毒治疗中起着重要作用。(本文来源于《中华实验和临床感染病杂志(电子版)》期刊2018年01期）
成珊[7]（2017）在《载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽3A(APOBEC3A)的克隆表达及其生物学功能研究》一文中研究指出背景:人类载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白3A(apolipoprotein B mRNA-editing catalytic polypeptide 3A,APOBEC3A,A3A),属人类载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白3家族中的7个成员(A3A,A3B,A3C,A3D,A3F,A3G和A3H)之一。A3A是一种先天宿主限制因子,具有抑制反转录病毒和内源性反转录因子的活性,也能够抑制外源DNA复制,具有抗HBV、HPV等DNA病毒的作用,在人类固有免疫应答中发挥重要作用。A3A主要在外周血单核细胞中表达,如CD14~+单核细胞和巨噬细胞。肝细胞中A3A表达量很低,但IFN-α可诱导肝细胞表达A3A。近年发现IFN-α诱导的A3A可使HBV cccDNA中的C碱基脱氨基变为U碱基,进而可引起HBV cccDNA特异性降解。这一发现为清除细胞核内HBV cccDNA的抗病毒研究带来希望。然而A3A引起cccDNA降解的机制、是否对基因组DNA造成损伤以及A3A表达量增加对细胞蛋白水平的影响还需进一步研究。目的:为了给研究A3A引起cccDNA降解的机制提供帮助,我们首先研究A3A体外酶活性及其对细胞基因水平和蛋白质水平的影响。方法:1.构建A3A真核表达载体pcDNA3.0-A3A,转染HEK239T和HepG2细胞,Western blotting鉴定A3A蛋白的表达,免疫荧光分析A3A在HEK239T和HepG2细胞内的定位,利用His标签蛋白纯化方法富集纯化A3A蛋白,体外检测A3A的单链DNA胞苷脱氨酶活性。2.在HEK293T细胞中过表达A3A,检测A3A对细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡的影响,利用目标区域高通量测序方法,鉴定过表达A3A引起的基因突变。3.利用TMT结合LC-MS/MS方法鉴定和定量A3A相关的蛋白质表达谱。结果:1.DNA测序证实pcDNA3.0(+)载体中插入长度为600bp的A3A基因编码区序列;该质粒能在HEK 239T和HepG2细胞中表达A3A;A3A在HEK239T中主要分布于细胞质,在HepG2细胞中细胞质和核均匀分布;纯化获得的A3A对单链DNA中TTCA序列具有胞嘧啶脱氨基活性。2.过表达A3A能抑制HEK293T细胞增殖;过表达A3A导致细胞周期S期阻滞;过表达A3A促进细胞凋亡;过表达A3A能引起HEK293T细胞中27个肿瘤易感基因发生突变,其中检测到突变的基因有8个,分别是COL3A1,CDH12,LINC00266-3,PMS2P3,SAR1A,NELL1,LPXN,TEKT4P2。3.过表达A3A导致HEK293T细胞中259个蛋白质显示出显着差异表达,其中134个蛋白上调表达,125个蛋白下调表达。WB结果显示:CHTOP、COIL、RPL18、与蛋白质组学结果一致,均显示表达上调;POLD2与蛋白质组学结果一致,表达下调;而UNG和POLD2均表达上调,与蛋白质组学结果不一致;YBX1表达下调,与蛋白质组学结果不一致。结论:1.A3A在HEK239T中主要分布于细胞质,在HepG2细胞中细胞质和核均匀分布,这说明A3A的细胞内定位具有细胞间差异。2.A3A具有TTCA片段特异性的胞嘧啶脱氨酶活性。3.过表达A3A能抑制HEK293T细胞增殖,导致细胞周期S期阻滞,促进细胞凋亡;4.过表达A3A对细胞基因组DNA有突变作用。5.过表达A3A能引起相关蛋白表达量发生改变。(本文来源于《第四军医大学》期刊2017-11-01）
刘晴晴,常章梅,白金金,王艳,龙健儿[8]（2017）在《RNA编辑酶ADAR1对EV71感染及变异的影响》一文中研究指出目的研究RNA编辑酶腺苷酸脱氨酶(adenosine deaminase acting on RNA,ADAR1)对新型肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)感染及变异的影响。方法运用RNAi技术筛选ADAR1基因沉默稳定细胞株,通过MTT分析病毒感染后细胞活力变化、噬斑形成分析病毒滴度及细胞对病毒的敏感性,以及Western blot测定病毒蛋白表达水平等,分析ADAR1对EV71感染的影响。由于ADAR1介导的RNA编辑可使基因形成A-G或T-C突变,为确定ADAR1影响EV71感染是否与其编辑EV71基因组导致病毒变异有关,对EV71流行区EV71的突变特征进行分析;并利用EV71感染ADAR1基因沉默细胞,通过对病毒基因组测序分析,研究ADAR1是否直接编辑EV71基因组。结果 ADAR1基因沉默后,与对照细胞相比,病毒感染细胞的存活率下降更快,并形成更多、更大的噬斑。病毒感染细胞中的VP1蛋白和细胞培养基上清中的病毒滴度均明显增加。EV71突变特征分析表明,虽然A-G和T-C之间的变异是病毒突变的主要类型,但EV71感染实验初步证明,ADAR1并不直接编辑EV71病毒基因组。结论 ADAR1可能具有抗EV71感染的作用,但ADAR1可能并不直接编辑EV71基因组。(本文来源于《复旦学报(医学版)》期刊2017年03期）
张耀丹[9]（2017）在《鸡RNA编辑酶基因的扩增、鉴定及其对NDV增殖的影响》一文中研究指出RNA编辑酶作用于宿主细胞或病毒RNA,通过对转录过程中核苷酸残基的加工,如插入、删除或取代,产生不同于模板的RNA序列,编码蛋白的同功异构体,从而大幅度增加编码蛋白质的多样性。目前已经发现的RNA编辑酶来自于两大蛋白家族:双链RNA特异性腺苷脱氨酶(adenosine deaminase acting on double-stranded RNA,ADAR)家族和载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽(apolipoprotein B mRNA-editing enzyme,catalytic polypeptide,APOBEC)家族。ADAR类RNA编辑酶广泛存在于从线虫到人的各种生物细胞中,由于它可以作用于特定双链结构的RNA,使某位点上的腺苷脱氨基变成肌苷(A→I)而得名。哺乳动物中已发现四种ADAR成员:ADAR1、ADAR2、ADAR3及TENR(testis-expressed RNA-binding protein)。APOBEC家族成员主要分为活化诱导胞嘧啶脱氨酶(activation-induced cytidine deaminase,AID)和APOBEC成员两类,其中只有AID,APOBEC1,APOBEC3G和APOBEC4蛋白具有RNA编辑酶功能,但具体机制尚不明了。最新研究指出,宿主体内RNA编辑酶对病毒感染具有两方面的影响:一方面,RNA编辑酶作为一种抗病毒因子,通过诱导病毒RNA的突变而发挥抑制病毒增殖的作用;另一方面,RNA编辑酶低频的突变增加了病毒的序列多样性,可能因此加速病毒的进化。禽类是否存有RNA编辑酶,大致分布情况及其潜在的功能尚不清楚,为此我们开展了以下研究:一、鸡RNA编辑酶ADAR1,ADAR2,AID和APOBCE4基因的克隆及序列分析为鉴定鸡是否表达RNA编辑酶,本研究首先根据NCBI公布的鸡全基因组序列进行生物信息学分析,预测鸡体内存在四种RNA编辑酶:ADAR1,ADAR2,AID和APOBCE4。分别设计PCR引物,在CEF细胞、鸡淋巴细胞以及不同的组织脏器的cDNA样品中扩增四种RNA编辑酶基因。结果在CEF中扩增出ADAR1和ADAR2基因,在鸡法氏囊中扩增出AID基因以及在淋巴细胞中扩增出APOBEC4基因,初步证实鸡体内存在此四种RNA编辑酶。通过对此四种基因的克隆表达获得全长序列,并进行序列分析。结果发现,鸡源ADAR1与人和鼠核苷酸序列同源性分别为64.6%和60.6%;鸡源ADAR2与人源、鼠源的氨基酸序列同源性较高,分别达到83.9%和82.9%,而其叁个主要的功能区与人源基因高度同源;鸡源AID与人源、鼠源的氨基酸序列同源率分别达到89.9%和89.4%,鸡源APOBEC4与人和鼠核苷酸序列同源性分别为58.8%和57.1%。由此可以初步推断,鸡源ADAR2和AID可能具有与人源RNA编辑酶类似的编辑功能。本研究首次扩增出鸡四种RNA编辑酶基因,回答了鸡体内是否存在RNA编辑酶的问题,为后续验证RNA编辑酶功能奠定了基础。二、鸡源ADAR2蛋白原核表达及多克隆抗体的制备本研究首次克隆出鸡源ADAR2基因,为了检测其蛋白表达情况我们制备了ADAR2蛋白的多克隆抗体。设计引物扩增ADAR2基因羧基端结构域基因,连入原核表达载体,构建了表达ADAR2羧基端片段的原核表达质粒;通过优化不同IPTG浓度和诱导时间等参数条件,确定最适于蛋白片段表达的诱导条件。继而使用最佳诱导条件,对ADAR2分段原核表达质粒进行大量诱导表达,蛋白定量及纯化后免疫6周龄小鼠。每隔两周免疫一次,共免疫四次。最后一次免疫之后收获小鼠血清,并进行检测。通过ELISA、Western-Blot和IFA实验验证该多克隆抗体能够特异性与鸡ADAR2蛋白反应,为后续不同细胞和组织上ADAR2蛋白表达的鉴定提供了方便和严谨的检测方法。叁、四种RNA编辑酶在鸡体内分布及其对NDV增殖影响的初步研究为了解四种RNA编辑酶在鸡体内的分布情况,本研究建立并优化ADAR1、ADAR2、AID和APOBEC4的实时定量RT-PCR(rRT-PCR)检测方法,对CEF细胞、DF1细胞及淋巴细胞等原代细胞以及鸡体内四种酶的表达和大致分布进行测定。结果显示,在健康成年鸡脏器中四种RNA编辑酶mRNA均有不同水平的表达,不同RNA编辑酶mRNA含量在同一组织中表达水平不同,而同一种RNA编辑酶不同组织中表达含量存在明显的差异。结合Western-Blot对蛋白表达的检测结果,确定鸡细胞中可以稳定表达四种RNA编辑酶。ADAR1/ADAR2/AID/APOEBC4蛋白表达含量最高的脏器分别为气囊、肺脏、法氏囊和肝脏。进一步的研究证实,NDV感染能够引起鸡原代细胞中内源性RNA编辑酶mRNA水平的上调;SPF鸡感染NDV后,不同组织脏器中四种RNA编辑酶均出现不同程度上调,尤其以免疫器官最为显着。为验证编辑酶对NDV增殖的影响,分别使用四种RNA编辑酶基因构建的真核表达质粒转染HeLa细胞,之后收集不同感染时间点的细胞样品,检测其中NP含量差异。最终证实ADAR1,ADAR2,AID和APOBEC四种RNA编辑酶能不同程度地抑制NDV的复制。综上,本研究首次克隆、鉴定了四种鸡源RNA编辑酶基因,通过建立四种RNA编辑酶rRT-PCR检测方法和制备多克隆抗体,对鸡源细胞和鸡体内四种RNA酶的表达和大致分布进行测定,最终证实NDV感染后能够诱导RNA编辑酶的上调,而四种RNA编辑酶均可以不同程度地抑制NDV复制的功能,其中APOBEC4的作用最为明显。(本文来源于《中国农业科学院》期刊2017-05-01）
成珊,曹丽妍,杜娟,王文勇,郭晏海[10]（2017）在《人天然免疫蛋白载脂蛋白B mRNA编辑酶催化亚基3A(APOBEC3A)的克隆表达及活性鉴定》一文中研究指出目的构建载脂蛋白B mRNA编辑酶催化亚基3A(APOBEC3A)表达载体,真核细胞表达APOBEC3A并鉴定其胞嘧啶脱氨酶活性。方法构建APOBEC3A真核表达载体pc DNA3.0-APOBEC3A,转染HEK293T细胞和Hep G2细胞。Western blot法鉴定APOBEC3A蛋白表达,免疫荧光细胞化学染色确定APOBEC3A在HEK293T细胞和Hep G2细胞的定位,利用组蛋白(His)标签蛋白纯化方法富集纯化APOBEC3A蛋白,荧光偏振技术检测APOBEC3A脱氨酶活性。结果 DNA测序证实pc DNA3.0-APOBEC3A插入长600 bp的APOBEC3A基因序列;该质粒能在HEK293T细胞和Hep G2细胞表达APOBEC3A,APOBEC3A在HEK293T细胞中主要分布于胞质,在Hep G2细胞中胞质和胞核均匀分布;纯化获得的APOBEC3A对单链DNA中TTCA序列具有胞嘧啶脱氨基活性。结论成功构建APOBEC3A真核表达载体,APOBEC3A在HEK293T细胞和Hep G2细胞定位不同,表达的APOBEC3A具有胞嘧啶脱氨基活性。(本文来源于《细胞与分子免疫学杂志》期刊2017年02期）
编辑酶论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的真核细胞内,DNA甲基化调控在转座子沉默、基因表达调控、甚至病毒感染过程中起关键作用,其中HIV-1启动子的甲基化修饰在病毒潜伏感染中扮演重要角色。为明确载脂蛋白B mRNA编辑酶催化亚基3A(APOBEC3A,A3A)对HIV-1启动子5'LTR上CpG岛甲基化程度的调节作用,本研究构建并筛选出A3A异构体A3A Isotype a(A3Aa)和A3A Isotype b(A3A-b)高表达真核载体,分析其去甲基化功能。方法从THP-1细胞mRNA中扩增得到A3A-a和A3A-b的c DNA,分别克隆至真核表达载体pASIB-HA和pCAGGS-HA。转染HEK-293T细胞,蛋白印迹法检测A3A-a和A3A-b的蛋白表达,并筛选出A3A-a和A3A-b的高表达载体。接着将A3A-a和A3A-b高表达载体与实验室构建并修饰的HIV-1启动子甲基化载体p-me LTR-EGFP共转染HEK-293T,检测指示蛋白EGFP在细胞水平中的表达,评价A3A-a和A3A-b的去甲基化调节作用。结果 PCR结果、酶切鉴定和测序结果均表明A3A真核表达载体pASIB-HA-A3A1-a、pCAGGS-HA-A3A2-a、pASIB-HA-A3A1-b、pCAGGS-HA-A3A2-b构建成功。经过筛选,pCAGGS-HA-A3A2-a和pCAGGS-HA-A3A2-b中A3A蛋白表达量最高,并用于后续实验。甲基化载体共转染实验显示,相较于对照A3G转染组,A3A-a和A3A-b组中EGFP的表达量明显上调。结论本研究在细胞水平上证实A3A分子Isotype a和Isotype b均可识别DNA中5-甲基化胞嘧啶,催化HIV-1启动子CpG岛去甲基化,为后续研究A3A对HIV潜伏感染调控奠定了基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
编辑酶论文参考文献
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