导读:本文包含了嘌呤生物碱论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:生物碱,嘌呤,茶碱,尿酸,儿茶素,咖啡因,可可。
嘌呤生物碱论文文献综述
滕杰,曾贞,黄亚辉[1]（2018）在《秃房茶嘌呤生物碱组成特点及生化品质成分的研究》一文中研究指出该研究采用分光光度法和高效液相色谱法,分不同叶位对秃房茶(Camellia gymnogyna)的嘌呤生物碱组成特点以及茶多酚、儿茶素组分、游离氨基酸、黄酮、茶氨酸等生化品质成分进行了测定。结果表明:秃房茶的嘌呤生物碱组成及配比显着区别于茶叶植物凤凰单从(C.sinensis),同时具有可可碱、咖啡碱和苦茶碱叁种组分,而且可可碱含量最多,为13.46~39.72 mg·g~(-1),咖啡碱含量最低,为0.51~2.02 mg·g~(-1),苦茶碱含量介于两者中间并随芽叶成熟度增加而升高。茶叶植物只存在咖啡碱和可可碱,含量变化分别为22.22~53.13 mg·g~(-1)和0.47~12.82 mg·g~(-1)。在相同叶位中,秃房茶儿茶素组分含量变化规律为EGCG>C>ECG>EGC>EC>GC>CG>GCG,且儿茶素总量、酯型儿茶素含量均低于茶叶植物,而非酯型儿茶素总量接近,保持为40~50 mg·g~(-1)。除黄酮含量在各叶位变化趋势不大外,其他品质成分含量变化基本符合第1叶>芽>第2叶>第3叶>第4叶,一芽二叶的含量介于第1叶和第2叶之间的规律,而茶多酚、黄酮、茶氨酸等其它品质成分含量均低于茶叶植物。该研究首次明确了秃房茶主要生化品质成分变化规律,特别是嘌呤生物碱的组成及配比特点,且含有特征性成分—苦茶碱。该研究结果为生物碱代谢机理、特异茶加工、功能成分开发、低咖啡碱资源、选育种等提供了优良材料。(本文来源于《广西植物》期刊2018年05期）
汪婷美[2]（2016）在《嘌呤生物碱Theacrine通过Sirt3调控线粒体蛋白去乙酰化发挥多巴胺能神经元保护作用和机制研究》一文中研究指出实验目的:帕金森病(Parkinson’s disease,PD)是常见的四大神经退行性疾病之一,主要的病理特征是黑质纹状体通路中多巴胺能神经元的缺失。本课题组前期研究发现天然嘌呤生物碱Theacrine具有较好的多巴胺能神经元保护作用,但是其作用机制有待深入研究。本实验采用6-OHDA诱导的大鼠帕金森模型,MPTP诱导的斑马鱼帕金森模型以及MPP+诱导的SH-SY5Y细胞损伤模型,评价Theacrine对帕金森疾病的治疗作用和研究对多巴胺能神经元的保护作用并深入探讨其作用机制,旨在获得一个作用新颖、疗效明确、安全性高的治疗帕金森疾病的候选新药。实验方法:本研究首先采用脑立体定位注射6-OHDA建立SD大鼠帕金森模型以评价Theacrine的药效作用。6-OHDA(20μg)定位注射入大鼠左侧纹状体(AP 0 mm,ML-3 mm,DV-5.5 mm及-4.5 mm)部位。通过旋转行为确定PD模型建立成功后将大鼠分为5组,分别为对照组、6-OHDA组、Theacrine低剂量组(10 mg/kg)、Theacrine高剂量组(20 mg/kg)和阳性对照Selegiline组(10 mg/kg)。Theacrine和Selegiline分别通过腹腔注射及口服给药,连续给药2周,其他组用等体积生理盐水代替。给药结束后采用旋转行为、转棒行为以及Cat Walk行为监测Theacrine对PD模型大鼠行为学指标的改善作用。采用免疫组化法检测黑质区多巴胺神经元的损伤情况,以及高效液相色谱联合电化学法(HPLC-ECD)检测Theacrine对纹状体中多巴胺及其代谢产物的影响。同时,我们采用MPTP作用3天建立的斑马鱼帕金森模型评价Theacrine的药效作用。斑马鱼从第1天至第3天同时给予MPTP(40μg/ml)及Theacrine(1 m M)、阳性对照Depranyl(20μg/ml)。采用触尾行为评价Theacrine对斑马鱼行为能力的改善作用,并采用原位杂交技术检查斑马鱼神经元的变化。其次,本研究采用MPP+诱导的SH-SY5Y细胞损伤模型研究Theacrine对多巴胺能神经元的保护作用。将不同浓度的Theacrine(50μM,100μM,200μM)预保护细胞24 h后,PBS洗去药物后加入2 m M的MPP+继续孵育24 h。药物处理后,收集各组细胞,采用LDH试剂盒及CCK-8试剂盒检测细胞的活力及显微镜观察细胞形态的变化,采用SOD试剂盒检测线粒体抗氧化活性以及采用DCFH-DA荧光探针检测细胞内ROS的生成速率,采用TMRM染色结合流式细胞仪测定线粒体膜电位,采用PI/Annexin V流式细胞术检查细胞凋亡率,并采用Western blot方法检测p-Akt/Akt、Bcl2/Bax、Clealved Caspase3/Caspase3、细胞色素C等凋亡蛋白表达变化情况。最后,在以上动物及细胞模型的基础上,我们深入研究线粒体去乙酰化酶Sirt3在Theacrine发挥神经保护过程中的作用。采用Western blot方法测定Sirt3等相关通路蛋白的变化,采用Sirt3荧光试剂盒测定Theacrine对Sirt3的直接活化作用,采用线粒体复合酶试剂盒分别检测复合物II和V的活性以及免疫沉淀方法测定线粒体SOD2乙酰化水平的改变。此外,我们采用RNAi及质粒过表达等方法验证Sirt3在Theacrine抑制多巴胺能神经元凋亡过程的作用。实验结果:在6-OHDA帕金森模型大鼠模型中,我们发现Theacrine能显着减少阿朴吗啡诱导大鼠旋转行为的转圈数,延长大鼠在转棒疲劳仪上的走步时间,改善大鼠脚印模式(footfall patterns)以及脚印预览(printview)指标,减少大鼠每只脚的站立时间(stands)以及脚步循环时间(step cycle),减慢了大鼠每只脚的悬空速度(swing speed)。免疫组化结果显示Theacrine明显增加造模侧多巴胺神经元酪氨酸羟化酶(TH)的表达,Western blot蛋白结果同样显示TH的表达上调。在MPTP诱导的斑马鱼PD模型中,斑马鱼触尾行为结果表明Theacrine组幼鱼游动出圆形区域相比模型组需要的次数减少,同时原位杂交技术结果显示Theacrine能明显缓解MPTP造成斑马鱼胚胎多巴胺能神经元的减少或丢失,神经元数目明显增加。在MPP+诱导的PD细胞模型中,实验结果显示发现Theacrine能显着抑制MPP+诱导的细胞毒性,明显改善SH-SY5Y细胞形态,提高SOD酶的活性,抑制ROS的生成速率,稳定线粒体膜电位。PI/Annexin V流式细胞术检测结果显示,与模型组相比Theacrine给药组凋亡水平显着降低。Western blot结果提示Theacrine明显上调了Akt蛋白的磷酸化水平,升高了Bcl2/Bax蛋白比率,减少了Cleaved Caspase3的表达并抑制线粒体细胞色素C的释放。此外,在6-OHDA注射大鼠的黑质中我们也发现Theacrine能上调Akt蛋白的磷酸化水平及升高Bcl2/Bax蛋白比率。在机制的进一步研究中,我们发现Theacrine能显着上调6-OHDA造模大鼠的大脑黑质部位组织中及MPP+处理SH-SY5Y细胞中Sirt3的表达水平,显着抑制MPP+引起的线粒体复合酶II和V活性的下降,明显降低SOD2蛋白的乙酰化水平。采用si RNA干扰SH-SY5Y细胞的Sirt3表达后,Theacrine不能抑制MPP+引起的凋亡蛋白Bcl2/Bax及Clealved Caspase3/Caspase3的表达。然而,采用质粒过表达Sirt3后,MPP+质粒过表达组与MPP+未过表达组相比Clealved Caspase3凋亡蛋白表达水平明显下降。同时在Sirt3过表达的基础上,Theacrine给药组与Theacrine未给药组相比能显着降低MPP+导致的Clealved Caspase3凋亡蛋白的活化及表达。结论:Theacrine在多种体内和体外PD模型(6-OHDA大鼠PD模型、MPTP斑马鱼PD模型及MPP+细胞PD模型)都显示出较好的保护作用,能明显地改善动物的行为学指标和病理学指标,抑制多巴胺神经元的损伤。Theacrine对多巴胺神经元的保护机制可能为:激活线粒体去乙酰化酶Sirt3,一方面通过提高线粒体复合酶II及V的活性抑制线粒体ROS生成,另一方面通过降低线粒体SOD2的乙酰化水平增加抗氧化酶活性、抑制线粒体ROS生成,最终改善线粒体功能,抑制多巴胺能神经元的凋亡。(本文来源于《暨南大学》期刊2016-06-30）
陶婧[3]（2016）在《理论研究二甲基黄嘌呤生物碱和氯丙嗪的代谢机理》一文中研究指出可可碱和茶碱为二甲基黄嘌呤类生物碱,它们是一类重要的精神药物,可以引起神经中枢系统的兴奋。可可碱还具有扩张冠状动脉和兴奋心肌的作用,可用作利尿剂和气管平滑肌松弛剂;茶碱有松弛支气管的肌肉及扩张周围血管的作用,在医学上用于治疗哮喘和慢性阻塞性肺病。氯丙嗪属于脂肪族吩噻嗪类,是一种重要的抗精神病药。然而,大量和长期服用这些药物之后往往会出现一些严重的副作用,有些甚至是不可逆转的。至今,这几类药物的代谢过程仍不完全清楚,导致对代谢产物与副作用的研究停滞不前。因此,本论文运用量子化学的方法对可可碱、氯丙嗪和茶碱的代谢机理进行了研究,为医学上研究这些药物的药理作用和副作用奠定了理论基础。首先,采用密度泛函理论(DFT)对细胞色素P450同工酶1A2(CYP1A2)催化可可碱的N-去甲基化反应机理进行了理论研究。可可碱的N-去甲基化可以分为N3-和N7-去甲基化。CYP1A2作用下可可碱的N-去甲基化反应包括两个步骤:首先是N-甲基羟基化形成甲醇胺-铁血红素复合物,随后甲醇胺物质分解得到单甲基黄嘌呤和甲醛。结果表明,遵循氢原子转移(HAT)机理的N-甲基羟基化过程为整个反应过程的决速步骤,反应中呈现出明显的自旋选择性,即符合自旋选择性反应(SSM)机理。从热力学和动力学角度来说,N3-甲基羟基化比N7-甲基羟基化所需的活化能更低,N3-去甲基反应更容易进行。因而,7-甲基黄嘌呤为CYP1A2催化下可可碱的主要代谢产物,该结论与相关实验结果一致。在甲醇胺分解过程中,主要依靠邻近杂原子协助其质子转移。在此基础上,进一步探究了CYP1A2催化氯丙嗪的代谢机理。本文共考察了叁种代谢机理,包括S5-氧化、芳环羟基化和N-去甲基化机理。研究结果表明,N14-去甲基反应所需活化能最低,它是氯丙嗪最有利的代谢路径,其次是S5-氧化。因此,N-单去甲基氯丙嗪是氯丙嗪体内代谢的主要产物,它可能会进一步去甲基,形成N-双去甲基氯丙嗪。此外,氯丙嗪亚砜和7-羟基氯丙嗪也是氯丙嗪的代谢产物。氯丙嗪的N-甲基羟基化依然是N-去甲基反应中的决速步骤,该过程遵循一个单电子转移(SET)机理。在氯丙嗪的芳环羟基化和N-去甲基化反应中,涉及的所有质子转移过程都倾向于在有酶环境下通过一个水分子协助完成。氯丙嗪所有的代谢路径中均表现出明显的自旋选择性,即符合自旋选择性反应(SSM)机理,反应以Cpd I的低自旋(LS)态更有利。最后,运用密度泛函理论探讨了黄嘌呤甲基转移酶(XMT)作用下茶碱的甲基化代谢机理。本文考察了茶碱的酮式反应机理和O6-烯醇式反应机理。为了确定活性中心周围重要残基(Gln161、Asn25、Tyr321、Trp162和Tyr356)对茶碱甲基化反应的影响,每种机理各构建了9种反应模型,它们分别包含不同种类和数目的残基。研究结果表明,茶碱的O6-烯醇式反应机理所需的活化能更低,因此在热力学和动力学上比酮式反应机理更有利。残基Gln161具有重要的催化作用,它的酰胺氧可以捕获茶碱甲基化过程中丢掉的质子。周围其他四个残基都具有稳定和定向作用。与残基Tyr321、Trp162和Tyr356相比,Asn25的稳定作用最强。Asn25的酰胺氧和酰胺氢分别与茶碱C8位的氢原子和N9原子形成氢键,该氢键作用使底物中氮原子的负电性增加,因此带正电的甲基更容易转移。Asn25残基的存在,能明显降低反应的活化能垒。本文的研究结果揭示了XMT催化茶碱甲基化的机理细节,阐述了残基Gln161、Asn25、Tyr321、Trp162和Tyr356在催化过程中的重要作用。(本文来源于《西华师范大学》期刊2016-04-01）
李壮[4]（2015）在《嘌呤生物碱类化合物茶碱-7-乙酸、theacrine和咖啡因的ELISA方法的建立及应用》一文中研究指出嘌呤生物碱是一类小分子量的含氮化合物,广泛分布于自然界多种植物中。该类化合物的药理作用复杂多样,已有多种化合物被开发为临床药物,如咖啡因,茶碱等。因此,建立嘌呤生物碱类化合物的生物样品含量的检测方法具有重要意义。目前,对嘌呤生物碱类化合物在生物样本中的常用检测方法,包括HPLC、LC-MS等,需要较为繁琐复杂的样品前处理过程,仪器设备较为昂贵,且对样品检测无法做到高通量的同时检测。而利用嘌呤生物碱类化合物的单克隆抗体建立的酶联免疫吸附法(enzeyme-linked immunosorbent assay, ELISA),具有检测生物学样品前处理简单、仪器设备价格低廉、实验耗材成本低的特点,可以对样品中的微量、痕量嘌呤生物碱成分进行高通量同时检测。本课题选择嘌呤生物碱类化合物茶碱-7-乙酸(theophylline-7-acetic acid,7-TAA)作为半抗原,制备了抗7-TAA的单克隆抗体,并建立了7-TAA、theacrine、咖啡因的ELISA法。分别利用ELISA法检测小鼠血清中的7-TAA含量、小鼠血液和脑组织中的theacrine含量和不同市售药品中的咖啡因含量。本研究所建立的7-TAA、theacrine、咖啡因的ELISA法,对生物样品中的7-TAA、theacrine.咖啡因的高通量、快速检测具有重要意义。[目的]1.制备抗茶碱-7-乙酸单克隆抗体。2.利用抗茶碱-7-乙酸单克隆抗体,分别建立7-TAA、theacrine和咖啡因的ELISA法。3.分别利用ELISA法检测小鼠血清中的7-TAA含量、小鼠血液中的theacrine含量,以及不同市售药品中的咖啡因含量。[方法]1.采用活泼酯法合成7-TAA的人工抗原,免疫后进行血清抗体检测。经过细胞融合后,筛选并单克隆化分泌抗7-TAA抗体的杂交细胞瘤。采用辛酸硫酸铵法纯化腹水,制备抗7-TAA单克隆抗体,考察抗体特异性。2.优化包被原浓度、一抗工作浓度、线性检测范围,进行方法学考察及加样回收率检测,建立7-TAA、theacrine和咖啡因的ELISA法。3.采用ELISA法检测小鼠血液中的7-TAA含量、theacrine含量和市售药品中的咖啡因含量,并与常规HPLC法检测结果比较。4.雄性昆明小鼠10只,按剂量45 mg·kg-1给小鼠灌胃给药theacrine,分别于给药后10个时间点,采取尾尖取血方法取血10μg,溶于90μL磷酸盐缓冲液,采用ELISA法考察theacrine在小鼠血液中的药代动力学特征。5.雄性昆明小鼠10只,按剂量45 mg·kg-1给小鼠灌胃给药theacrine,给药后35 min断头,分别取皮质、海马、下丘脑、脑干和小脑,称重后加入1.0 mL PBS缓冲液,匀浆离心取上清,采用ELISA法检测小鼠脑内亚器官的theacrine含量,初步探析theacrine在小鼠脑内亚器官的分布特征。[结果]1.成功制备7-TAA人工抗原,经MALDI-TOF-MS检测,计算其偶联比约为23。2.成功获得分泌抗7-TAA抗体的单克隆细胞株C1183,所分泌抗体特异性强,与theacrine和咖啡因的交叉反应率为34.0%和0.3%,与茶碱、可可碱、1,3,9-叁甲基尿酸无明显交叉反应(交叉反应率均<0.01)3利用抗7-TAA单克隆抗体建立了7-TAA酶联免疫吸附法。线性竟争范围为46.8ng·mL-1-3000 ng·mL-1灵敏度为528.43 ng·mL-1,稳定性好,孔间差变异系数<7.8%,板间差变异系数<8.5%,平均加样回收率为99.59%。小鼠血液中7-TAA含量的检测结果为1188.97±44.9、812.31±43.0、284.70±16.5ng·mL-1,与HPLC法检测结果相关性高。4利用抗7-TAA单克隆抗体建立了theacrine酶联免疫吸附法。线性竞争范围为156.25ng·mL-1-100μmL-1,灵敏度为1547.6 ng·mL-1,稳定性好,孔间差变异系数<8.0%,板间差变异系数<7.7%,平均加样回收率为99.87%。小鼠血液中theacrine含量的检测结果为1254.61±68.8、696.02±33.36、439.57±13.15ng·mL-1,与HPLC法检测结果相关性高。利用1theacrine酶联免疫吸附法检测小鼠血液中的theacrine代谢曲线,发现在0.5 h时,theacrine在血液中的药物浓度达到峰值,2.0 h时出现第二个吸收峰。利用theacrine酶联免疫吸附法检测theacrine在小鼠脑内亚器官的分布,发现下丘脑的theacrine含量最高。5.利用抗7-TAA单克隆抗体建立了咖啡因酶联免疫吸附法。线性竞争范围为7.0μg·mL-1-500μg·mL-1,灵敏度为165.34 μg·mL-1,稳定性好,孔间差变异系数<8.7%,板间差变异系数<6.7%,平均加样回收率为100.5%。市售药品中的咖啡因含量的检测结果为15.003±0.55、30.294±0.91、32.045±0.78mg,与HPLC法检测结果相关性高。[结论]活泼酯法合成的7-TAA人工抗原免疫效果良好,经细胞融合后成功制备抗7-TAA单克隆抗体,建立了7-TAA、theacrine和咖啡因的酶联免疫吸附法,可用于检测小鼠血清中的7-TAA含量、小鼠血液和脑组织中的theacrine含量和不同市售药品中的咖啡因含量。(本文来源于《北京中医药大学》期刊2015-05-01）
李维熙,却翎[5]（2014）在《嘌呤生物碱Theacrine抗抑郁作用研究（英文）》一文中研究指出Aims:A negative correlation relationship between daily intake of caffeine-containing drinks and the risk of depression has been found in a relatively large population sample.Theacrine,a natural purine alkaloid obtained from Camellia assamica var.kucha,is similar to caffeine in chemical structure.Our pilot study has shown that theacrine is a potent anti-depressant.However,(本文来源于《中国化学会第十届全国天然有机化学学术会议论文集——第叁分会场：天然产物合成生物学、化学生物学及新技术》期刊2014-11-21）
马存强,杨超,周斌星,任小盈,李静[6]（2014）在《微生物对茶叶中嘌呤生物碱代谢的研究进展》一文中研究指出嘌呤碱是茶叶中重要的内含物质,常应用于医疗保健和食品饮料等行业。在黑茶渥堆和茶叶微生物发酵期间嘌呤碱出现种类和含量的变化。为探究微生物与嘌呤碱代谢的关系,本文对近年国内外相关研究进行综述,发现不同微生物单菌种发酵对嘌呤碱含量和种类影响不一,顶头孢霉(Cephalosporium acremonium)能显着提高茶叶中咖啡碱含量;烟曲霉(Aspergillus fumigatu)、乳酸菌(Lactobacillus)、醋酸型乳酸菌(acetic acid Lactobacillus)等对嘌呤碱含量影响不大;酵母菌(yeast)、聚多曲霉(Aspergillus sydowii)对咖啡碱有降低作用;黑曲霉(Aspergillus niger)对嘌呤碱代谢影响存在争议;咖啡碱与茶叶碱存在消长关系。(本文来源于《食品科学》期刊2014年21期）
金基强,周晨阳,马春雷,姚明哲,马建强[7]（2014）在《我国代表性茶树种质嘌呤生物碱的鉴定》一文中研究指出从国家种质杭州茶树圃选取了403份有代表性的茶树资源,采用HPLC对嘌呤生物碱进行了2年、春秋两季的重复鉴定。结果表明,年度和季节间咖啡碱含量总体稳定,但可可碱含量春季变化显着。93%以上资源的咖啡碱含量为25.0~45.0 mg/g。茶的3个变种间,咖啡碱含量存在显着差异,且阿萨姆茶秋季较春季咖啡碱含量明显增加。来源于不同地区的资源咖啡碱含量存在显着差异,其中云南和广东的资源变异系数和多样性指数最大。从403份资源中筛选出3份高咖啡碱、1份高苦茶碱(低咖啡碱)和2份高可可碱(低咖啡碱)等6份特异资源。(本文来源于《植物遗传资源学报》期刊2014年02期）
周晨阳,金基强,姚明哲,陈亮[8]（2011）在《茶树等植物中嘌呤生物碱代谢研究进展》一文中研究指出咖啡碱等嘌呤生物碱分布于自然界多种植物中,由于过量摄入咖啡碱会对人体产生副作用,因此对嘌呤碱代谢进行调控,培育低咖啡碱植物品种具有重要的意义。本文综述了嘌呤生物碱在不同属种植物中的分布、生物合成与降解的主要路径及非主要路径、参与嘌呤碱代谢的酶及相应编码基因克隆的研究进展,并对培育低咖啡碱茶树品种中存在的问题与今后的努力方向进行了讨论和展望。(本文来源于《茶叶科学》期刊2011年02期）
谢果[9]（2010）在《茶叶嘌呤生物碱抗抑郁作用及其机制的研究》一文中研究指出目的：(1)研究1,3,7,9-四甲基尿酸(TC)、咖啡因(CAF)、可可碱(TB)、茶碱(TP)等茶叶嘌呤生物碱对抑郁的影响,并探讨可能的作用机制。(2)比较TC提取方法并优化TC提取分离的工艺条件。方法：(1)采用回流法、微波法及超声波法对苦茶TC成分进行提取；采用真空升华法来分离纯化TC；实验设计方法采用正交设计来获取各因素的影响及优化最佳工艺条件。(2)采用小鼠自主活动实验、悬尾实验、强迫游泳实验、利血平实验、育亨宾毒性实验、5-HTP诱导甩头实验及大鼠慢性不可预知温和应激(CUMS)实验来评价茶叶嘌呤生物碱对抑郁的影响。(3)采用HPLC-ECD来分析检测茶叶嘌呤生物碱对·CUMS大鼠皮质、海马、下丘脑等部位DA、5-HT、NE、DOPA、HVA和5-HIAA等单胺类神经递质及衍生物含量的影响。(4)采用全细胞膜片钳技术来评价茶叶嘌呤生物碱对低渗激活的容积敏感性氯电流的影响。(5)采用HPLC法测定茶叶嘌呤生物碱对PDE4体外抑制的影响。(6)采用RT-PCR技术检测茶叶嘌呤生物碱对PC12细胞腺苷受体A1、A2A、CREB、BDNF和TrkB mRNA表达的变化。结果：(1)对于回流法提取TC,其影响因素的顺序为回流温度>回流时间>pH,其中回流温度具有非常显着的影响(p<0.01)；最佳工艺条件为：回流时间为50 min,回流温度为90℃,pH为7.5。对于微波法提取TC,其影响因素的顺序为pH>微波时间>微波功率,其中pH具有显着的影响(P<0.05)；其最佳工艺条件为：微波时间为10 min,微波功率为480 W,pH为7.5。对于超声波法提取TC,其影响因素的顺序为pH>超声波时间>超声波功率,其中pH具有非常显着的影响(P<0.01)；其最佳工艺条件为：超声波时间为10 min,超声波功率为450 W,pH为7.5。对于真空升华分离纯化TC,其影响因素的顺序为真空度>升华时间>升华温度,其中升华时间和真空度有显着性影响(p<0.05)；其最佳工艺条件为：升华温度为175℃,真空度为0.10×105 Pa,升华时间为1 min。(2)小鼠的自主活动实验结果表明,CAF具有十分明显的兴奋作用(P<0.01),TB和TP也有显着性作用(P<0.05),而TC虽然可增加自主活动的总路程,但无统计学意义。小鼠悬尾实验、强迫游泳实验结果表明,TC可显着缩短行为绝望小鼠的不动时间用(P<0.01),CAF对行为绝望小鼠的不动时间缩短非常显着(P<0.001),TB只对强迫游泳小鼠不动时间有显着缩短(P<0.05),TP虽然对行为绝望小鼠不动时间有缩短的趋势,但无统计学意义。CUMS实验结果表明,10 mg·kg-1和30 mg·kg-1 TC可非常显着地增加CUMS大鼠的体重(P<0.001),并显着改善大鼠蔗糖偏嗜度(P<0.05)；CAF对CUMS大鼠体重和蔗糖偏嗜度都有改善的趋势,但无统计学意义；TP和TB只可十分显着地增加CUMS大鼠的体重(P<0.05)。利血平实验、5-HTP诱导小鼠甩头实验结果表明10 mg·kg-1和30mg·kg-1TC对于抑郁特征具有良好的改善作用(P<0.05),CAF、TB和TP只对利血平实验有非常显着的改善(P<0.001)。四种茶叶嘌呤生物碱对育亨宾毒性增强的趋势都无统计学意义。(3)茶叶嘌呤生物碱对CUMS大鼠皮质、海马、下丘脑等部位的DA、5-HT、NE、DOPAC、HVA和5-HIAA等单胺类神经递质或其衍生物含量都有一定程度改善,其中TC在几乎所有的神经递质的紊乱中都表现出了显着性改善作用,并对5-HT和DA等神经递质代谢异常有良好的改善。TP及TB对CUMS大鼠脑部单胺类神经递质及其衍生物的紊乱及代谢异常的改善作用较弱。CAF对CUMS大鼠脑部单胺类神经递质及其衍生物的紊乱及代谢异常的改善作用基本无统计学意义。(4)茶叶嘌呤生物碱对低渗激活的容积敏感性氯电流都有一定程度的抑制作用,其中TC与CAF有显着性抑制作用(P<0.05),抑制作用强弱顺序为：TC>CAF>TB≈TP。(5)茶叶嘌呤生物碱对体外cGMP为底物的PDE4基本无抑制效果；对cAMP为底物的PDE4有较强的抑制作用,抑制作用强弱顺序为：TC≈CAF>TB≈TP。(6)茶叶嘌呤生物碱对PC12细胞的腺苷A1、A2A mRNA都的表达有一定程度的抑制作用,其中TC与CAF都有较强的显着性作用(P<0.05)；对CREB mRNA表达都有一定的增强作用,但无统计学意义；对BDNF和TrkB mRNA表达有都显着的增强作用(P<0.05),且TC效果最为显着(P<0.01)。结论：(1)相对于常规的回流法,微波法、超声波法都能高效、经济及环保地提取TC；真空升华法分离TC时,具有快速、高效,且环境条件要求低,成本十分低廉等优点；正交设计不仅可以有效地分析TC制备的各影响因素,而且可以较好地获得TC制备的最佳工艺条件。(2)TC具有较强的抗抑郁作用,可能是源于对实验动物单胺类神经递质含量紊乱的改善和神经元的保护功能；CAF对行为绝望动物的行为学影响可能是中枢兴奋的结果；TP与TB可能具有较弱的抗抑郁作用。(3)TC等茶叶嘌呤生物碱对抗抑郁的作用机制主要涉及：1)腺苷受体-AC-cAMP/PKA-CREB-BDNF-TrkB通路；2)PDE-cAMP/PKA-CREB-BDNF-TrkB途径。3)氯通道的GABA等嘌呤受体的补充途径；4)神经递质对离子通道的修饰作用等几个信号转导通路。创新点：(1)本论文首次提出了TC抗抑郁的假说,并通过各种行为学实验证实了TC抗抑郁的效果；而初步阐明了TC抗抑郁作用的主要机制。此研究不仅有助于苦茶及TC的深入开发,对于推动我国天然抗抑郁药物现代化和国际化的进程也具有重要意义。(2)首次题出氯通道对中枢神经系统抑郁等方面作用。(3)本论文首次系统比较了TC、CAF、TB和TP四个典型的茶叶生物碱对抑郁作用特点。(4)本论文通过逆向排除CAF的思路,首次采用了真空升华法制备了纯度和产率较高的TC。(本文来源于《暨南大学》期刊2010-05-01）
卢嘉丽,王冬梅,苗爱清,杨得坡,陈建萍[10]（2009）在《英红1号、英红9号和祁门茶树芽叶中嘌呤生物碱和茶多酚的HPLC-DAD-MS/MS分析》一文中研究指出采用HPLC-DAD-MS/MS技术对英红1号、英红9号和祁门茶树的芽叶进行了分析,鉴定出了2种嘌呤生物碱,7种儿茶素类化合物以及2种非儿茶素类茶多酚。对这3个茶树品种的嘌呤生物碱和儿茶素类成分质量分数进行比较分析,结果表明叁者的儿茶素类总质量分数均大于20%,其中英红1号和祁门红茶品种在儿茶素类成分的组成上较为接近,EGCG质量分数均为最高;而英红9号质量分数最高的是ECG。(本文来源于《中山大学学报(自然科学版)》期刊2009年01期）
嘌呤生物碱论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
实验目的:帕金森病(Parkinson’s disease,PD)是常见的四大神经退行性疾病之一,主要的病理特征是黑质纹状体通路中多巴胺能神经元的缺失。本课题组前期研究发现天然嘌呤生物碱Theacrine具有较好的多巴胺能神经元保护作用,但是其作用机制有待深入研究。本实验采用6-OHDA诱导的大鼠帕金森模型,MPTP诱导的斑马鱼帕金森模型以及MPP+诱导的SH-SY5Y细胞损伤模型,评价Theacrine对帕金森疾病的治疗作用和研究对多巴胺能神经元的保护作用并深入探讨其作用机制,旨在获得一个作用新颖、疗效明确、安全性高的治疗帕金森疾病的候选新药。实验方法:本研究首先采用脑立体定位注射6-OHDA建立SD大鼠帕金森模型以评价Theacrine的药效作用。6-OHDA(20μg)定位注射入大鼠左侧纹状体(AP 0 mm,ML-3 mm,DV-5.5 mm及-4.5 mm)部位。通过旋转行为确定PD模型建立成功后将大鼠分为5组,分别为对照组、6-OHDA组、Theacrine低剂量组(10 mg/kg)、Theacrine高剂量组(20 mg/kg)和阳性对照Selegiline组(10 mg/kg)。Theacrine和Selegiline分别通过腹腔注射及口服给药,连续给药2周,其他组用等体积生理盐水代替。给药结束后采用旋转行为、转棒行为以及Cat Walk行为监测Theacrine对PD模型大鼠行为学指标的改善作用。采用免疫组化法检测黑质区多巴胺神经元的损伤情况,以及高效液相色谱联合电化学法(HPLC-ECD)检测Theacrine对纹状体中多巴胺及其代谢产物的影响。同时,我们采用MPTP作用3天建立的斑马鱼帕金森模型评价Theacrine的药效作用。斑马鱼从第1天至第3天同时给予MPTP(40μg/ml)及Theacrine(1 m M)、阳性对照Depranyl(20μg/ml)。采用触尾行为评价Theacrine对斑马鱼行为能力的改善作用,并采用原位杂交技术检查斑马鱼神经元的变化。其次,本研究采用MPP+诱导的SH-SY5Y细胞损伤模型研究Theacrine对多巴胺能神经元的保护作用。将不同浓度的Theacrine(50μM,100μM,200μM)预保护细胞24 h后,PBS洗去药物后加入2 m M的MPP+继续孵育24 h。药物处理后,收集各组细胞,采用LDH试剂盒及CCK-8试剂盒检测细胞的活力及显微镜观察细胞形态的变化,采用SOD试剂盒检测线粒体抗氧化活性以及采用DCFH-DA荧光探针检测细胞内ROS的生成速率,采用TMRM染色结合流式细胞仪测定线粒体膜电位,采用PI/Annexin V流式细胞术检查细胞凋亡率,并采用Western blot方法检测p-Akt/Akt、Bcl2/Bax、Clealved Caspase3/Caspase3、细胞色素C等凋亡蛋白表达变化情况。最后,在以上动物及细胞模型的基础上,我们深入研究线粒体去乙酰化酶Sirt3在Theacrine发挥神经保护过程中的作用。采用Western blot方法测定Sirt3等相关通路蛋白的变化,采用Sirt3荧光试剂盒测定Theacrine对Sirt3的直接活化作用,采用线粒体复合酶试剂盒分别检测复合物II和V的活性以及免疫沉淀方法测定线粒体SOD2乙酰化水平的改变。此外,我们采用RNAi及质粒过表达等方法验证Sirt3在Theacrine抑制多巴胺能神经元凋亡过程的作用。实验结果:在6-OHDA帕金森模型大鼠模型中,我们发现Theacrine能显着减少阿朴吗啡诱导大鼠旋转行为的转圈数,延长大鼠在转棒疲劳仪上的走步时间,改善大鼠脚印模式(footfall patterns)以及脚印预览(printview)指标,减少大鼠每只脚的站立时间(stands)以及脚步循环时间(step cycle),减慢了大鼠每只脚的悬空速度(swing speed)。免疫组化结果显示Theacrine明显增加造模侧多巴胺神经元酪氨酸羟化酶(TH)的表达,Western blot蛋白结果同样显示TH的表达上调。在MPTP诱导的斑马鱼PD模型中,斑马鱼触尾行为结果表明Theacrine组幼鱼游动出圆形区域相比模型组需要的次数减少,同时原位杂交技术结果显示Theacrine能明显缓解MPTP造成斑马鱼胚胎多巴胺能神经元的减少或丢失,神经元数目明显增加。在MPP+诱导的PD细胞模型中,实验结果显示发现Theacrine能显着抑制MPP+诱导的细胞毒性,明显改善SH-SY5Y细胞形态,提高SOD酶的活性,抑制ROS的生成速率,稳定线粒体膜电位。PI/Annexin V流式细胞术检测结果显示,与模型组相比Theacrine给药组凋亡水平显着降低。Western blot结果提示Theacrine明显上调了Akt蛋白的磷酸化水平,升高了Bcl2/Bax蛋白比率,减少了Cleaved Caspase3的表达并抑制线粒体细胞色素C的释放。此外,在6-OHDA注射大鼠的黑质中我们也发现Theacrine能上调Akt蛋白的磷酸化水平及升高Bcl2/Bax蛋白比率。在机制的进一步研究中,我们发现Theacrine能显着上调6-OHDA造模大鼠的大脑黑质部位组织中及MPP+处理SH-SY5Y细胞中Sirt3的表达水平,显着抑制MPP+引起的线粒体复合酶II和V活性的下降,明显降低SOD2蛋白的乙酰化水平。采用si RNA干扰SH-SY5Y细胞的Sirt3表达后,Theacrine不能抑制MPP+引起的凋亡蛋白Bcl2/Bax及Clealved Caspase3/Caspase3的表达。然而,采用质粒过表达Sirt3后,MPP+质粒过表达组与MPP+未过表达组相比Clealved Caspase3凋亡蛋白表达水平明显下降。同时在Sirt3过表达的基础上,Theacrine给药组与Theacrine未给药组相比能显着降低MPP+导致的Clealved Caspase3凋亡蛋白的活化及表达。结论:Theacrine在多种体内和体外PD模型(6-OHDA大鼠PD模型、MPTP斑马鱼PD模型及MPP+细胞PD模型)都显示出较好的保护作用,能明显地改善动物的行为学指标和病理学指标,抑制多巴胺神经元的损伤。Theacrine对多巴胺神经元的保护机制可能为:激活线粒体去乙酰化酶Sirt3,一方面通过提高线粒体复合酶II及V的活性抑制线粒体ROS生成,另一方面通过降低线粒体SOD2的乙酰化水平增加抗氧化酶活性、抑制线粒体ROS生成,最终改善线粒体功能,抑制多巴胺能神经元的凋亡。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
嘌呤生物碱论文参考文献
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