导读:本文包含了人防御素克隆表达载体论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:载体,斯坦,基因,转染,乌骨鸡,抑菌,人防。
人防御素克隆表达载体论文文献综述
谷笑笑,王振华,潘康成,张立平,周尧[1]（2017）在《藏猪β-防御素2基因克隆及原核表达载体的构建》一文中研究指出为了构建藏猪β-防御素2(pBD-2)成熟肽原核表达载体,从藏猪肝组织中提取总RNA,通过RT-PCR获取pBD-2目的基因,并与pMD19-T载体连接构建重组质粒,命名为pMD19T-pBD-2;以pMD19T-pBD-2质粒为模板,克隆pBD-2成熟肽c DNA序列并构建成熟肽p ET-32a-pBD-2表达质粒。结果显示,藏猪pBD-2基因全长为298bp,与野猪和家猪的pBD-2基因同源性分别达100.0%和98.9%;藏猪pBD-2基因具有1个完整的开放阅读框,编码69个氨基酸组成的多肽,包含21个氨基酸残基的信号肽、11个氨基酸残基的前导肽和37个氨基酸残基的成熟肽;编码的pBD-2成熟肽稳定性较好,分子量4 085.78,等电点8.89,具有6个半胱氨酸(Cys)残基,7个带正电荷和2个带负电荷的氨基酸残基,为亲脂性和亲水性多肽;从pMD19T-pBD-2质粒中亚克隆得到长度为114 bp藏猪pBD-2成熟肽c DNA序列,菌落PCR、酶切和测序鉴定证明成功构建了成熟肽pET-32a-pBD-2原核表达质粒。(本文来源于《江苏农业学报》期刊2017年04期）
周莉,高其双,陈志华,彭霞,卢顺[2]（2015）在《鸡防御素基因GAL-2的克隆及其真核表达载体的构建》一文中研究指出采用RT-PCR方法从15日龄的仔鸡肾组织的总RNA中扩增出鸡防御素基因(GAL-2)序列,然后将其亚克隆到载体pIRES2-EGFP构建成真核表达载体pIRES2-EGFP-GAL-2。经PCR鉴定、限制性内切酶酶切分析和克隆片段序列测定、比较,证实了重组质粒的正确性。将构建好的真核表达质粒转染到Marc145细胞中进行瞬时表达,荧光检测证实细胞转染成功。pIRES2-EGFP-GAL-2真核表达载体的成功构建为下一步在细胞水平研究GAL蛋白功能以及进一步将其开发为兽用生物制品奠定了基础。(本文来源于《上海畜牧兽医通讯》期刊2015年01期）
黄仙仙,徐婷婷,徐雪丽,赵卫东,郑振宇[3]（2012）在《人β-防御素3基因的克隆分析及其真核表达载体的构建》一文中研究指出根据Genebank上公布的人β-防御素3基因序列设计引物,以提取的人DNA为模板进行PCR扩增,得到全长为1391bp的人β-防御素3完整基因组序列,包括起始序列、信号肽序列、2个外显子、1个内含子以及上下游酶切位点和终止密码子等。与NCBI上公布的DNA序列的同源性达到99.93%,在内含子上有1个A的缺失,其编码氨基酸序列与公布序列的同源性达100%。将其克隆到pMD18-T载体中,进一步构建了其真核表达载体pcDNA-hBD3,为其表达和功能研究奠定基础。(本文来源于《中国农学通报》期刊2012年05期）
刘海燕,岳华,汤承,杨发龙,张焕容[4]（2011）在《山地乌骨鸡β防御素Gal-2基因的克隆及酵母表达载体的构建》一文中研究指出为了构建山地乌骨鸡β防御素Gal-2基因酵母表达载体,试验根据GenBank中鸡β防御素Gal-2基因序列设计引物,采用RT-PCR技术从山地乌骨鸡骨髓细胞中扩增出Gal-2基因,经PCR和酶切鉴定后测序,并采用DNAStar软件进行生物信息学分析;再根据毕赤酵母偏爱密码子和山地乌骨鸡β-防御素Gal-2成熟肽编码基因序列设计并合成1对引物,采用PCR技术从重组质粒pMD18-T-Gal-2扩增出其成熟肽编码基因,并将其插入载体pPICZaA,构建重组质粒pPICZaA-Gal-2,将pPICZaA-Gal-2线性化,通过电击转入毕赤酵母菌株GS115,用1%甲醇诱导表达120 h,表达产物纯化后进行Tricine-SDS-PAGE电泳鉴定。结果表明:山地乌骨鸡β防御素Gal-2基因克隆成功;山地乌骨鸡β-防御素Gal-2成熟肽编码基因重组真核表达载体构建成功;山地乌骨鸡Gal-2基因在酵母中得到表达。(本文来源于《黑龙江畜牧兽医》期刊2011年19期）
刘胜敏[5]（2011）在《山羊防御素GBD-1基因克隆、表达载体的构建及鉴定》一文中研究指出防御素是一种广泛存在于自然界的一类小的阳离子抗菌肽,蛋白分子量为3-6kD,富含精氨酸,具有高效、广谱抗菌活性,对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌、真菌、被膜病毒等有一定的杀灭效果,并且不会使微生物产生耐药性。从生物体中提取防御素则量少、成本高、步骤繁琐,因此利用基因工程的方法生产具有高效抗菌活性的防御素具有重要意义。本研究选用乌骨山羊为研究对象,提取舌组织的总RNA,采用5'RACE和3'RACE的方法扩增得到195 bp的山羊β-防御素全长cDNA序列,分析其编码的氨基酸序列行,发现在第21个氨基酸的位置有明显的信号肽切割位点。通过编码区氨基酸的序列比对发现,乌骨山羊β-防御素与波尔山羊的同源性为98%,与绵羊的同源性为93%。采用半定量PCR技术检测山羊不同组织的表达谱,结果发现山羊β-防御素(GBD-1)在消化道系统中没有检测到,而在呼吸道系统和生殖道系统有很高的表达。采用荧光定量PCR的方法定量分析山羊生殖道不同组织GBD-1的表达,发现GBD-1基因在山羊阴道、子宫颈、卵巢中表达水平较高。根据山羊p-防御素1的序列,结合毕赤酵母密码子偏好性,设计含有部分互补序列的引物,在引物两端设计EcoRⅠ和NotⅠ两个限制性内酶切位点,通过重迭PCR的方法扩增得到含38氨基酸的GBD-1基因。将鉴定正确的GBD-1基因片段连接到pPICZaA真核表达载体中,经酶切、测序鉴定正确后,用SacⅠ将重组表达质粒pPICZaA/GBD-1线性化,电转入到毕赤酵母宿主细胞GS115,用含有Zeocin的培养基筛选,并进行PCR检测。阳性的酵母重组质粒每24 h用1%浓度的甲醇诱导,然后用Tricine-SDS-PAGE电泳和Western Blot进行检测表达的蛋白,大小为4.3 kD,并证明为目的蛋白,通过BCA法测定72 h诱导后的蛋白浓度为0.315 mg/mL；利用琼脂糖孔穴扩增法进行抑菌实验发现,含重组蛋白的菌液对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌有抑菌效果。(本文来源于《华中农业大学》期刊2011-06-01）
栾红雨[6]（2010）在《奶牛β-防御素TAP基因克隆及乳腺特异性表达载体构建》一文中研究指出防御素在机体先天性免疫系统防御机制中发挥重要作用。乳腺炎可诱导奶牛乳腺组织中β-防御素增量表达,使患乳腺炎局部防御作用增强,表明在乳房炎的发生和防御过程中β-防御素发挥重要的作用。用乳腺生物反应器制备目的药用蛋白是目前生物技术研究的热点,但外源蛋白在乳腺组织中特异、高效表达受诸多因素影响,仍需进一步研究。本研究克隆了奶牛乳腺组织中β-防御素气管抗菌肽(TAP)基因,构建TAP基因真核表达质粒；进一步用奶牛β-乳球蛋白(BLG)基因启动子和5′端调控序列构建TAP基因乳腺特异性表达载体,并初步进行了表达。1.利用PCR方法从奶牛基因组DNA中扩增BLG基因5′端调控序列(3 114 bp),其中包含第一、二个外显子和内含子,将其插入pMD19-T simple载体。序列分析表明,克隆的序列和原序列相似性为97%,包含多个乳腺特异性表达调控元件,可用于构建乳腺特异性表达载体,调控外源目的蛋白表达。2.采用RT-PCR方法从奶牛乳腺组织中扩增气管抗菌肽(TAP)基因,重组到pMD19-T simple载体中进行序列分析。结果显示,克隆的TAP基因包含完整的开放阅读框(ORF)195 bp,与牛TAP基因相似性达93.8%；该ORF编码的64个氨基酸,含有β-防御素特征性结构即6个在特定位置上的保守半胱氨酸残基。TAP基因cDNA完整开放阅读框的克隆,为进一步开发应用重组牛β-防御素奠定了基础。3.将克隆的奶牛BLG 5′端调控序列与酶切回收的真核表达质粒pEGFP-C1连接,取代原表达质粒中CMV启动子,构建pBLG-EGFP-C1通用乳腺特异性表达载体。酶切回收TAP基因序列,分别插入真核表达质粒pEGFP-C1和构建的乳腺特异性表达质粒pBLG-EGFP-C1的多克隆位点,构建TAP基因的两种表达质粒：pEGFP-C1-TAP和pBLG-EGFP-G1-TAP。4.运用奶牛乳汁分离培养乳腺上皮细胞和组织块法培养原代奶牛乳腺上皮细胞,将构建的乳腺特异性表达质粒pBLG-EGFP-C1-TAP脂质体法转染原代乳腺上皮细胞,倒置荧光显微镜下观察与TAP基因融合表达的绿色荧光蛋白。72 h时观察到融合表达的绿色荧光蛋白。5.将pEGFP-C1-TAP质粒脂质体包埋,转染到COS 7细胞中,倒置荧光显微镜下观察与TAP基因融合表达的绿色荧光蛋白,并用RT-PCR法检测COS 7细胞中奶牛TAP mRNA的表达情况。72h时观察到融合表达的绿色荧光蛋白,并在COS7细胞中检测到奶牛TAP mRNA的转录。6.脂质体包埋pBLG-EGFP-C1-TAP和pEGFP-C1-TAP质粒,分别注射于泌乳期母兔乳腺组织中,运用RT-PCR法检测相应母兔乳腺组织中奶牛TAP mRNA的表达情况。发现TAP mRNA在兔乳腺组织中得到表达,与pEGFP-C1-TAP质粒处理母兔的乳区相比,pBLG-EGFP-C1-TAP质粒处理母兔乳区TAP表达量提高。证明构建的TAP基因乳腺特异表达质粒可在乳腺组织中表达,为进一步研制防御素的乳腺生物反应器奠定一定基础。(本文来源于《四川农业大学》期刊2010-06-01）
陆航,李华,吴学敏,单颖[7]（2010）在《人防御素-5基因的克隆和真核表达载体的构建》一文中研究指出目的对人防御素5(HD-5)基因进行克隆,构建真核表达载体HD5-pPICZαA。方法从人cDNA文库中PCR扩增HD-5基因片段,用EcoRⅠ和XbaⅠ分别双酶切HD-5基因扩增产物和毕赤酵母表达载体pPICZαA,用T4DNA连接酶连接目的基因片段和pPICZαA,然后转化到E.coli Top10中,Zeocin筛选转化子并进行PCR、酶切和序列鉴定。结果提取阳性克隆的重组质粒,EcoR Ⅰ和Xba Ⅰ双酶切后跑电泳获得预期条带;同时重组质粒经序列测定,证实HD-5基因正确插入pPICZαA中,插入位置、方向均正确。结论成功构建人防御素5基因的真核表达载体HD5-pPICZαA,为HD-5蛋白的真核真核表达奠定基础。(本文来源于《解剖科学进展》期刊2010年03期）
赵鹏伟,曹贵方,梁建荣[8]（2009）在《绵羊β-防御素cDNA的克隆及其真核表达载体构建》一文中研究指出绵羊β-防御素(SBD-1)与T载体成功连接,并将其成熟肽编码片段亚克隆到了毕赤酵母表达载体Ppic9k上,构建了真核表达质粒Ppic9k-mSBD-1。且将其在毕赤酵母GS115中进行了分泌表达。将表达产物纯化后进行了活性鉴定。结果表明,mSBD-1对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均有抑制作用,而且对金黄色葡萄球菌的抑制作用更为明显。(本文来源于《格莱姆抗菌肽——抗菌肽开发与应用技术研讨会论文集》期刊2009-12-14）
王海英,祁克宗,彭开松,孙洁[9]（2008）在《鸡β-防御素-2基因的克隆及原核表达载体的构建》一文中研究指出鸡β-防御素是一类广谱抗菌阳离子小肽的总称,一般具有3个分子内二硫键。防御素对细菌、真菌乃至某些被膜病毒具有广谱杀伤作用。试验根据已发表的Gal-2基因序列,设计并合成了一对引物。以骨髓中的总RNA为模板,利用RT-PCR技术扩增目的片段并克隆到pGEM-TEasy载体上,经筛选鉴定获得阳性重组子pGEM-T-Gal-2。再经EcoRI、XbaI双酶切,插入pMAL-c2x质粒构建表达载体。利用PCR技术和酶切反应筛选转化子成功获得pMAL-c2x-Gal-2重组质粒。(本文来源于《家禽科学》期刊2008年03期）
魏洪涛,董震,张国利[10]（2006）在《人β防御素-2基因的克隆及原核表达载体的构建》一文中研究指出目的构建人β-防御素2的融合性原核表达载体,为今后基因工程手段表达纯化及生产人β-防御素-2奠定基础。方法体外基因合成人β-防御素2(HBD-2)的基因片段,并克隆入pMD18T中间载体中,经酶切鉴定后再克隆入pET32a原核表达载体中,与载体中所固有的TrX-A形成融合基因。结果构建的融合性原核表达载体经酶切鉴定无突变发生。结论成功地构建了pET-32a-(HBD-2)。(本文来源于《中国实验诊断学》期刊2006年04期）
人防御素克隆表达载体论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
采用RT-PCR方法从15日龄的仔鸡肾组织的总RNA中扩增出鸡防御素基因(GAL-2)序列,然后将其亚克隆到载体pIRES2-EGFP构建成真核表达载体pIRES2-EGFP-GAL-2。经PCR鉴定、限制性内切酶酶切分析和克隆片段序列测定、比较,证实了重组质粒的正确性。将构建好的真核表达质粒转染到Marc145细胞中进行瞬时表达,荧光检测证实细胞转染成功。pIRES2-EGFP-GAL-2真核表达载体的成功构建为下一步在细胞水平研究GAL蛋白功能以及进一步将其开发为兽用生物制品奠定了基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
人防御素克隆表达载体论文参考文献
[1].谷笑笑,王振华,潘康成,张立平,周尧.藏猪β-防御素2基因克隆及原核表达载体的构建[J].江苏农业学报.2017
[2].周莉,高其双,陈志华,彭霞,卢顺.鸡防御素基因GAL-2的克隆及其真核表达载体的构建[J].上海畜牧兽医通讯.2015
[3].黄仙仙,徐婷婷,徐雪丽,赵卫东,郑振宇.人β-防御素3基因的克隆分析及其真核表达载体的构建[J].中国农学通报.2012
[4].刘海燕,岳华,汤承,杨发龙,张焕容.山地乌骨鸡β防御素Gal-2基因的克隆及酵母表达载体的构建[J].黑龙江畜牧兽医.2011
[5].刘胜敏.山羊防御素GBD-1基因克隆、表达载体的构建及鉴定[D].华中农业大学.2011
[6].栾红雨.奶牛β-防御素TAP基因克隆及乳腺特异性表达载体构建[D].四川农业大学.2010
[7].陆航,李华,吴学敏,单颖.人防御素-5基因的克隆和真核表达载体的构建[J].解剖科学进展.2010
[8].赵鹏伟,曹贵方,梁建荣.绵羊β-防御素cDNA的克隆及其真核表达载体构建[C].格莱姆抗菌肽——抗菌肽开发与应用技术研讨会论文集.2009
[9].王海英,祁克宗,彭开松,孙洁.鸡β-防御素-2基因的克隆及原核表达载体的构建[J].家禽科学.2008
[10].魏洪涛,董震,张国利.人β防御素-2基因的克隆及原核表达载体的构建[J].中国实验诊断学.2006