重组PCV3 Cap蛋白植物乳杆菌的构建与表达验证

重组PCV3 Cap蛋白植物乳杆菌的构建与表达验证

论文摘要

构建3型猪圆环病毒(PCV3)Cap蛋白的重组植物乳杆菌并进行验证。通过PCR方法扩增含1320信号肽和DCpep优化的PCV3 Cap基因(PCV3D),使用无缝克隆技术连接到pSIP411载体中,电转入克隆宿主乳球菌NZ3900中,提取测序结果正确的重组表达质粒NZ3900:pSIP411-PCV3D再次电转入植物乳杆菌Lp12,制备重组菌并验证其表达。结果显示:成功扩增出目的条带为789 bp的经过修饰和优化的PCV3 Cap基因(PCV3D)片段,重组表达质粒电转入植物乳杆菌Lp12,成功构建重组植物乳杆菌Lp12:pSIP411-PCV3D。Western blot、流式细胞术等方法检测重组蛋白表达,获得阳性结果,阳性率为47.9%;免疫荧光进一步表明重组蛋白能够在细胞中表达。本试验成功构建了1株表达PCV3 Cap蛋白的植物乳杆菌,为PCV3口服候选疫苗的开发研究提供依据。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 试剂、菌株
  •   1.2 引物设计及合成
  •   1.3 PCV3D基因扩增
  •   1.4 重组乳杆菌表达质粒的构建及鉴定
  •   1.5 重组乳杆菌的诱导表达
  •   1.6 重组乳杆菌表达产物的鉴定
  •   1.7 外源基因表达的间接免疫荧光检测
  •   1.8 外源基因表达的流式细胞分析
  • 2 结果
  •   2.1 目的基因的扩增与鉴定
  •   2.2 重组表达质粒的构建与鉴定
  •   2.3 外源基因表达的Western blot鉴定
  •   2.4 外源基因表达的免疫荧光分析
  •   2.5 流式细胞分析
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 付婷婷,李昌,王茂鹏,许汪,韩继成,马彬尧,秦爱建,金宁一

    关键词: 蛋白,植物乳杆菌,构建与表达

    来源: 中国兽医学报 2019年06期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,基础科学

    专业: 生物学,畜牧与动物医学

    单位: 扬州大学兽医学院,军事医学科学院军事兽医研究所

    基金: 国家重点研发计划资助项目(2017YFD0501000),国家自然科学基金资助项目(31802224)

    分类号: S852.651

    DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2019.06.02

    页码: 1052-1057

    总页数: 6

    文件大小: 1522K

    下载量: 215

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