（1重庆市合川区人民医院耳鼻咽喉头颈外科重庆401520）
（2海口市人民医院耳鼻咽喉科海南海口570100）
【摘要】目的：探讨Msx2，topoⅡ-ａ，HPV16在鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤(SNIP)组织中的表达及意义，研究上述三种因子有无相关性，从而确定Msx2，topoⅡ-ａ在SNIP恶变发生发展中的作用。方法：分别检测10例鼻息肉组织(INP)、10例鼻腔-鼻窦鳞状细胞癌组织(NSCC)、13例SNIP以及SNIP不同病变程度下Msx2.topoⅡ-ａ，HPV16的表达情况。结果：Msx2，topoⅡ-ａ，HPV16的在三种组织间表达NSCC组>SNIP组>INP组，且在SNIP中，表达情况也为重度>中度>轻度，两两比较差异显著(P<0.05)。结论：Msx2，topoⅡ-ａ在SNIP恶变的发生发展中起重要作用,可能成为SNIP和NSCC基因治疗的新靶点。
【关键词】内翻性乳头状瘤；肌节同源盒基因2；人拓扑异构酶Ⅱ-ａ；人乳头状瘤病毒16
【中图分类号】R739.62【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2018）11-0187-01
鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤(sinonasalinvertedpapilloma,SNIP)是鼻腔鼻窦常见的黏膜上皮源性良性肿瘤，具有侵袭性生长，易复发及易恶变的特点。本研究着重从INP、SNIP、NSCC3种病理形态出发,采用RT-PCR法检测Msx2,topoⅡ-ａ及HPV16在3种组织中的表达情况来探讨3个因子在SNIP恶变发生发展过程中的相关性和作用,为临床治疗提供理论依据。
1.资料与方法
1.1临床资料
选取2011—2013年在我科收治患者的原发病灶新鲜组织标本33例：INP10例,男5例,女5例；平均年龄48岁。SNIP13例：男9例，女4例，平均年龄51岁。其中SNIP组又分不典型增生轻度5例，不典型增生中度4例及不典型增生重度4例。NSCC10例：男8例，女2例，平均年龄56岁。所有组织均保存于RNA保存液中并放入-80℃冰箱中。
1.2方法
采用荧光定量PCR仪7000型(美国ABI公司)进行RT-qPCR实验,实时荧光定量扩增曲线得到Ct值。步骤如下：（1）RNA提取：采用Trizol试剂提取细胞RNA：将新鲜组织、TRIzol1ml放入匀浆器，冷冻匀浆，置Eppendorf管中移至室温状态5min。与0.2ml氯仿混合并充分震荡，4℃放置10min，12000r/min离心7min；吸取上清400υl，加入异丙醇400υl，4℃放置10min，12000r/min离心7min；弃上清，加入1ml75%的乙醇，4℃静止10min，12000r/min离心10min，弃上清，瞬时离心20s，静置10min（于超净工作台），用无酶水溶解RNA。（2）RT-PCR检测目的基因的表达：反应体系为20ul在PCR管中加入待测基因上游及下游引物，cDNA模板SYBRGreen试剂，将配制好的PCR反应溶液置于RealtimePCR仪上进行PCR扩增反应，过程如下：95℃2mim预变性，95℃变性15s，60℃退火40s，扩增45个循环。所有样品均设3个平行管，重复3次。
1.3统计学分析
采用SPSS19.0软件对数据进行处理，计量资料用（x-±s）表示，对3组样本中的目的基因表达量进行卡方检验，P<0.05表示差异具有统计学意义，P>0.05表示差异无统计学意义。
2.结果
2.13组病变组织中Msx2.topoⅡ-ａ.HPV16的表达
Msx2.topoⅡ-ａ.HPV16的表达程度，均为NSCC组>SNIP组>INP组,且3组之间差异显著(P<O.05)。详见表1。
2.2Msx2.topoⅡ-ａ.HPV16在SNIP三组不同病理间的表达
在SNIP三组不同的病理形态分组中Msx2.topoⅡ-ａ.HPV16均有表达，表达程度重度不典型增生组>中度不典型增生组>轻度不典型增生组，两两比较差异显著(P<O.05)。详见表2。
3.讨论
本研究结果显示在INP，SNIP，NSCC三组中，Msx2.topoⅡ-ａ.HPV16三种因子表达程度为NSCC组>SNIP组>INP组，且在SNIP中，表达情况也为重度>中度>轻度，说明在三种基因的表达水平与组织的恶性程度密切相关。
HPV16是目前公认的肿瘤恶变因子，Msx2是可调控细胞增殖、凋亡的基因，topoⅡ-ａ是调节细胞核酸功能的重要基因。故Msx2和topoⅡ-ａ反映了SNIP的增殖速度及恶性程度的生物学行为，可作为新的评判SNIP发展及预后的参考指标，通过对这2种指标进行检测，有助于判断SNIP的复发，恶变潜能及预后，在临床干预及药物的靶向治疗等方面具有重要意义。
【参考文献】
[1]张峻峥,杨一兵,汤勇,吴锡芳,丛林海,阮标.Msx2、topoⅡ-α、HPV16及VEGF在鼻内翻性乳头状瘤中的定量及意义[J].临床耳鼻咽喉头颈外科杂志,2014,28(23):1819-1823.