容亓马丽梅黄婷（柳州市人民医院广西柳州545006）
【摘要】目的：评价VITEK2-compact微生物鉴定仪对产EsβLs菌株快速检测的可靠性。方法：应用标准的纸片扩散方法对临床已分离出的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产ESβLs进行确证试验。同时，应用VITEK2-compact微生物鉴定仪进行检测，将两种方法在时间和检出率上的差异进行比较。结果：同时检测的两种方法，42株肺炎克雷伯菌ESβLs检测符合率达93.5％，66株大肠埃希菌ESβLs检测符合率达96.3％。标准纸片扩散法平均检测时间为18h，而VITEK2-compact微生物鉴定仪的平均检测时间为6.5h。结论：VITEK2-compact微生物鉴定仪不仅能快速准确检测产ESβLs的肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌，而且结果可靠。
【关键词】VITEK2-compact微生物鉴定仪超广谱β-内酰胺酶快速
【中图分类号】R446.5【文献标识码】B【文章编号】2095-1752（2013）07-0303-01
微生物鉴定的方法和技术目前使用的非常多。除了用常规的手工方法进行分类鉴定外，还可采用仪器对细菌生化反应等技术进行鉴定。近年来不同的新型微生物鉴定系统的产生就是临床微生物学的发展的结果，VITEK2-compact微生物鉴定仪也是其中之一。它不仅将缩短检测时间而且准确性高，还避免了繁琐的手工操作，本文就其可靠性进行讨论。
EsβLs(extended-spectrum-β-lactamas-es)是指超广谱β-内酰胺酶，它是由细菌质粒介导，能水解多数亚氨基β-内酰胺类及单环酰胺类抗生素，如头孢菌素、所有青霉素类和氨曲南等。由于产EsβLs菌常引起临床上多重耐药，给临床治疗带来困难，而且产EsβLs菌也是院内感染的主要病原菌之一。由于其发病率的不断提高，实验室能够对ESβLs细菌的快速检测对控制院内感染和临床选用抗菌药有重要的指导意义。本实验将两种不同鉴定法进行比对，评估菌株产ESβLs的检测情况，现报告如下。
1材料与方法
1.1菌株来源收集本院呼吸科及重症监护室自2011年临床分离的的大肠埃希菌66株和肺炎克雷白菌42株，所有菌株均为经过37℃18-24h分离培养。
1.1.1仪器和试剂用法国梅里埃公司VITEK2-compact微生物鉴定仪进行鉴定和药敏试验，仪器自动判读结果，试剂是配套试剂。药敏纸片和培养基是英国Oxoid公司生产。所有操作均按说明书严格进行。
1.1.2质量控制非产ESβLs大肠埃希菌ATCC25922和产ESβLs肺炎克雷伯菌ATCC700603，自卫生部临床检验中心购买。ATCC700603，头孢噻肟（CTX）/克拉维酸(CLA)抑菌圈直径和头孢他定(CAZ)/克拉维酸抑菌圈直径分别增大≥3mm和≥5mm;ATCC25922,测试药物加克拉维酸后与单药抑菌圈比增大≥2mm。
1.2试验结果判定根据NCCLS1999年版推荐的K-B(Kirby-Bauer)法测定，分两个药物组采用扩散法用CAZ/CLA(30/10ug/片)，CTX/CLA(30/10ug/片)，CTX(30ug/片)和CAZ(30ug/片)加克拉维酸与不加克拉维酸试验，每个纸片中心相距至少24mm以上；孵育l6～18h后，判定为产EsβLs的抑菌环直径增大值I须>5mm[1]。
1.3标准的纸片扩散法肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌在标准的纸片扩散法中，出现药敏卡中的头孢西丁耐药或者头孢替坦耐药，均进行AmpC酶表型筛选。用头孢吡肟、CTX(30ug/片)、亚胺培南(10ug/片))、CAZ/CLA(30/10ug/片)CTX/CLA(30/10ug/片)5种纸片进行表型筛选。判断标准：亚胺培南、头孢吡肟表现为敏感，而CTX、CTX/CLA、CAZ/CLA表现为耐药或抑菌环内存在散在菌落，以及亚胺培南敏感，头孢吡肟、CTX、CTX/CLA、CAZ/CLA耐药，提示待检菌株产AmpC酶[2]。
2结果
通过VITEK2-compact微生物分析仪和标准的纸片扩散实验两种方法，比较的检测时间和阳性率。(见表1)。42株肺炎克雷伯菌用标准的纸片扩散法检出EsβLs阳性率为61.9%，微生物分析仪检出阳性率为64.3，两种方法阳性符合率为96.3%；66株大肠埃希菌用标准的纸片扩散法检出EsβLs阳性率为65.2%，微生物分析仪检出阳性率为69．7%，两种方法阳性符合率为93.5%。见表1。
3讨论
临床上，产ESβLs的菌株越来越多，特别是肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌有不断上升的趋势。产ESBLs菌株常表现为多重耐药[3]。临床上一般首选碳青霉烯类、头霉素类和含酶抑制剂的B-酰胺酶类抗生素[4]。细菌是否产ESBLs是决定临床用药的关键，因此，快速准确的检测对临床第一时间合理抗菌治疗有重要作用。而检测产ESβLs菌株的方法非常之多，本研究以标准纸片扩散法进行确证试验检测产ESβLs的肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌，配对应用VITEK2-compact全自动微生物鉴定仪及其药敏卡检测ESβLs来评价VITEK2-compact全自动微生物鉴定仪快速检测产ESβLs可靠性。两种方法中检测66株大肠埃希菌，有3株表现不相一致，符合率达93.5％。42株肺炎克雷伯菌有1株表现不相一致，符合率达96.3％，VITEK2-compact微生物鉴定仪平均检测时间6.5h，标准纸片扩散法平均检测时间18h。VITEK2-compact微生物鉴定仪平均检测时间明显快于标准纸片扩散法，所以，实验室运用VITEK2-compact全自动微生物鉴定仪在进行菌株ESβLs鉴定时，可以在最短时间内准确鉴定，能快速准确检测产ESβLs肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌，且结果可靠，适合临床推广，在突发事件中需要对进行未知可疑病原菌株进行鉴定时，该系统能够发挥重要作用。
参考文献
[1]NationalCommiteeforClinicalLaboratoryStandards．Performancestandardsforantimicrobialsusceptabilitytesting[S]．NCCLS，MIO0-s9，1999，19(1)：20-36．
[2]刘金波，何海明，许诺，等．两种酶抑制剂协同试验检测ESBEs和AmpC酶的探讨[J]．1临床检验杂志，2005，23(4)：289-290．
[3]俞云松．超广谱β-内酰胺酶研究概况[J]．中国抗生素杂志，2003，28(12)：715．
[4]彭少华，李从荣，施菁玲，等．超广谱β-内酰胺酶细菌的检测及耐药性[J]．中华医学检验杂志，2001，24(6)：350-352．