王鹤佳, 史为民, 沈建忠, 唐宁, 王平[1]2004年在《牛尿中玉米赤霉醇残留酶联免疫检测方法的研究》文中提出在制备了玉米赤霉醇单克隆抗体的基础上 ,建立了牛尿中玉米赤霉醇残留的 EL ISA检测方法 ,确定了各种溶液的最适工作浓度 ,并对最低检测限、5 0 %抑制浓度和空白牛尿添加回收试验进行了研究。本方法的最低检测限为 0 .6 ng/ml,5 0 %抑制浓度为 3.0 ng/ml,以 10、2 1和 35 ng/ml浓度添加空白牛尿 ,回收率在 70 .0 %～ 116 .0 %之间 ,变异系数在 6 .0 %～ 15 .9%之间。此方法快速、灵敏、方便 ,满足了牛尿中玉米赤霉醇残留检测的要求
王鹤佳[2]2004年在《牛尿中玉米赤霉醇残留酶联免疫检测方法的研究》文中指出本研究采用混合酸酐法制备了玉米赤霉醇(Zeranol,ZER)免疫原，免疫BALB／c小鼠，用间接酶联免疫吸附法(ELISA)对抗体效价进行了检测，并建立了ELISA检测方法。ZER免疫原(ZER-7-半琥珀酸酯-BSA，以下简称Z7BSA)中半抗原与载体蛋白的偶联比为10∶1，包被原(ZER-7-半琥珀酸酯-OVA，以下简称Z70VA)中半抗原与载体蛋白的偶联比为8∶1。抗血清效价为1∶8000。利用杂交瘤技术获得了两株稳定分泌ZER单克隆抗体(以下简称单抗)的杂交瘤细胞株IC12和9B4。经鉴定两株单抗亚型均为IgG_1，杂交瘤细胞染色体数目为95～102条，间接ELISA测定腹水效价为1∶3.2×10~5，单抗分子量为151.8KD。该单抗与ZER同系物β-玉米赤霉醇、α-玉米赤霉烯醇、β-玉米赤霉烯醇、玉米赤霉酮、玉米赤霉烯酮的交叉反应率分别为35.5％，47.4％，7.1％，73.0％，56.3％；与己烯雌酚、雌二醇、睾酮、克伦特罗的交叉反应率均小于0.1％。该细胞株体外传代和冻存复苏后抗体分泌稳定。 用方阵滴定法确定包被原最适工作浓度为0.5μg／ml，单抗最适稀释倍数为1∶5000，辣根过氧化物酶标记羊抗鼠IgG(以下简称酶标二抗)最适稀释倍数为1∶5000。采用间接竞争ELISA方法建立检测ZER的标准曲线，在0.5ng／ml～100ng／ml范围内呈线性相关，回归方程为y=-66.844x+424.15，相关系数R~2=0.996，50％抑制浓度(IC_(50))为3.0ng／ml，以10％抑制率对应的浓度计算，则该方法对ZER的检测限为0.6ng／ml。 以该单抗为基础，进行牛尿中玉米赤霉醇酶联免疫检测试剂盒的研制。确定了试剂盒中各种溶液的配方。试剂盒最低检测限为0.60ng／ml，试剂盒对空白牛尿的最低检测限为7.74ng／ml。以10ng／ml，21ng／ml，35ng／ml 3个浓度添加空白牛尿，回收率在70.0％～116.0％之间，板内变异系数在6.0％～15.9％之间，批内变异系数为15.3％，批间变异系数为14.3％，均低于20％。试剂盒于2～8℃下可保存6个月。
王东[3]2014年在《农产品玉米赤霉醇ELISA检测试剂盒的研制与应用》文中提出玉米赤酶醇来自于玉米,花生,小麦,大米等产生的玉米赤霉醇菌在不规范的储存时产生的次生代谢产物为玉米赤霉烯酮的还原产物,商品名字“畜大壮”又名“右环十四酮酚”,这种还原产物属于雷索酸内酯类非甾体类同化激素的物质,有较强的促进生长的作用。玉米赤酶醇是一种效果比较好的促进动物生长的激素类物质,属于非固醇非激素类化合物于一类的物质。玉米赤霉醇具有促进蛋白质合成和提高蛋白质效率的作用所以在欧美等发达国家被广泛使用,我国也是在二十世纪末期开始在中国示范。后来经过大量的实验工作和数据,证明玉米赤霉醇在哺乳动物体内有蓄积,并且对动物和人都具有一定的危害性。所以发达国家就明确禁止将玉米赤霉醇等激素类药物用于养殖我国农业部在第193号公告明确规定玉米赤霉醇于等对人体有害的抗生素类药物也禁用于所有食源性动物,同时还规定了在可食动物的组织和尿液中不得检出。而目前的检测方法主要有液相,质谱和串联质谱等方法,但是这些方法都比较繁琐,时间比较长,对操作人员技术要求非常高,所以酶联免疫的方法更容易被大众接收,因为玉米赤霉醇酶联免疫的方法比较简单,实用性比较强,特异性较好,对操作人员的技术要求不高。更容易被基层的检测部门接受,一般的饲料公司等也能使用。1.目的：建立快速、有效比较经济的玉米赤霉醇检测试剂盒用于检测植物性食品中ZER的残留量。2.方法：应用间接竞争ELISA法,这种方法是采用抗原与抗体的特异反应的原理,将需要检测物质和酶通过生物的方法连接就起来,最后通过酶与底物产生颜色的不同来定量测定看待检测的物质的含量。测定的对象可以是抗体也可以是抗原建立玉米赤霉醇单克隆抗体快速检测植物性食品中ZER含量的定性或者是半定量检测。同时对该ELISA试剂盒进行了包被,固定,吹干等一系列的调试,使得玉米赤霉醇试剂盒的反应更加灵敏,特异性更强。3.结果：实验以人工合成的ZER为包被原,ZER为竞争半抗原,两者与一定量的抗玉米赤霉醇单克隆抗体反应,建立检测ZER的ELISA方法。当包被浓度为1：5000时是最理想的包被浓度比例,当单抗和酶标二抗稀释倍数调节到1：500和1：2500时,试剂盒的显色效果最为理想。然而当样品溶液与单抗溶液体积比50：50时酶联效果最为理想,底物溶液的选择中等浓度底物显色液,单抗反应时间的确定60min,抗体最适工作浓度为1：5000,酶标二抗的最适工作浓度为1：5000。而当所研制的试剂盒检测限控制在0.5ng/mL时,添加回收率在60.0%-120.0%之间,变异系数小于20%,在2-8℃条件下可保存3个月。
吴钟玲[4]2011年在《食品中玉米赤霉醇及其类似物快速测定的研究》文中进行了进一步梳理随着人民生活水平的提高,人们普遍对食品安全、食品安全问题成为关注的重点。由于监管力度、食品企业生产者的社会责任心、以及食品检测手段,特别是食品快速检测手段等问题的缺乏,我国的食品安全形势不容乐观,食品事故层出不穷。在“大头婴儿”、“假酒”、“苏丹红”、“叁聚氰胺”等事件之后,我国政府加强了对食品安全、食品卫生的监管力度,新闻媒体也提高了对食品安全、食品卫生的关注度,消费者也加强了对食品安全和食品卫生的关注度。社会的责任,督促我们重视食品安全检测,重视食品预警平台的建设,最大限度地保障食品安全,保护人民的健康。20世纪70年代开始出现了液相色谱-质谱联用仪,在80年代中后期得到发展,应用技术也日益成熟。液质主要应用于药物分析、法医学、商检、环境科学、生命科学、食品检测等领域。与高效液相色谱法、气相色谱、气相色谱-质谱联用技术相比,液相色谱-串联质谱仪的优点在于:检测操作过程简单,灵敏度高,可以准确定性,维护保养较易等特点。在人们日常生活的食物中,存在一种玉米赤霉醇的物质,玉米赤霉醇及其类似物也称为激素类活性物质.美国在上世纪70年代时将其应用于养殖业,玉米赤霉醇及其类似物可以促进畜禽和水生动物的生长,提高饲料转化率[1-3]。在一定的饲养条件下,动物饲喂期间由于可以引起动物蛋白质的沉积,从而达到提高饲料转化率,增加瘦肉率,其对动物的促生长幅度可达10%-40%。但这类激素类活性物质在动物体内容易造成残留,并可通过食物链进入人体,进入人体后会产生一系列的问题。如内分泌失调、引起肿瘤、生长发育障碍、出生缺陷和生育缺陷、影响第二特征的发育等方面,而且多数的激素类物质具有潜在的致癌性。本文针对玉米赤霉醇在食品中残留问题的分析方法、发展趋势和快速检测技术进行了研究,建立了一种行之有效的测定食品中玉米赤霉醇的方法液相色谱-质谱串联法。本方法的检测下限为0.5μg/kg,回收率为60.3%-120.0%,相对标准偏差为4.9 %- 6.6 %。应用研究成果,通过对十一个品种的食品进行检测,对其检测结果进行分析,结果表明,应用液相色谱-质谱串联法在含淀粉类食品、油脂制品、调味品、肉类制品、乳制品等测定玉米赤霉醇及其类似物是有效地的。本文的研究为食品监管、风险预警系统的建立提供了快速检测方法和大量的原始数据。从而得出侧重点,为食品安全风险预警提供大量的数据,为进一步的工作打下了基础。
参考文献：
[1]. 牛尿中玉米赤霉醇残留酶联免疫检测方法的研究[J]. 王鹤佳, 史为民, 沈建忠, 唐宁, 王平. 中国兽医杂志. 2004
[2]. 牛尿中玉米赤霉醇残留酶联免疫检测方法的研究[D]. 王鹤佳. 中国农业大学. 2004
[3]. 农产品玉米赤霉醇ELISA检测试剂盒的研制与应用[D]. 王东. 湖南农业大学. 2014
[4]. 食品中玉米赤霉醇及其类似物快速测定的研究[D]. 吴钟玲. 华南理工大学. 2011
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