导读:本文包含了猪小肠粘膜下层论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:小肠粘膜下层,细胞外基质,间充质干细胞,骨修复
猪小肠粘膜下层论文文献综述
张迟[1]（2018）在《小肠粘膜下层（SIS）生物支架的构建及骨修复机制的研究》一文中研究指出研究目的:由疾病、外部创伤等原因引起的大骨骼缺损的治疗需要通过骨移植手术,寻找安全易得的替代骨已经成为临床上的重要课题,近年来快速发展的组织工程骨为解决这一难题提供了一种新的途径。支架材料作为组织工程的核心要素,其表面性状、结构,机械性能和生物学性能均能调控细胞的各种生命活动和体内组织的修复再生。本课题以天然去细胞基质小肠粘膜下层(SIS)作为支架材料,研究其成骨活性及机制,并利用组织工程技术构建基于SIS的复合支架,用于不同类型骨缺损的修复。研究方法:(1)体外利用多种细胞模型,评估SIS对多种细胞的黏附,增殖,分化影响;体内建立小鼠头盖骨4mm临界缺损模型,评估SIS骨缺损修复效果并探究其修复机制。(2)制备SIS/PMMA复合骨水泥,体外表征材料的内部形态及力学性能;并利用成骨细胞、骨髓间充质干细胞等评估材料的生物学活性;体内建立大鼠脊椎缺损模型,探究复合骨水泥骨整合能力及骨再生能力。(3)体外利用成骨细胞分泌的成骨基质修饰SIS,体外观察材料表面结构以及材料对ADSCs的黏附、增殖、成骨分化情况;体内建立小鼠头盖骨缺损模型,评价SIS,SIS/ADSCs,ECM,ECM-SIS/ADSCs五组植入物的骨缺损治疗效果。研究结果:(1)SIS能促进多种成骨相关细胞的黏附,增殖,成骨分化;体内SIS能逐渐降解并提供空间新生骨长入,骨再生过程中BMP-SMAD通路被激活。(2)SIS/PMMA复合骨水泥内部出现多孔结构,压缩模量,抗压强度下降,数值接近正常松质骨;体外SIS/PMMA的细胞相容性较PMMA有明显改善,体内骨整合、骨修复能力增强。(3)成骨基质修饰SIS得到的ECM-SIS支架材料,在体外能明显增强ADSCs的黏附,铺展,增殖,成骨分化等生物学响应;体内小鼠头盖骨缺损模型中,ECM-SIS和ADSCs能协同促进骨修复。研究结论:SIS是一个潜在的骨组织工程支架材料,可作为临床用PMMA椎体修复骨水泥的添加剂,从而改性PMMA的力学性能及生物学活性。同时我们开发了一种成骨基质修饰SIS的复合支架,该材料能很好的协同干细胞来增加体内骨修复效果。(本文来源于《宁波大学》期刊2018-06-25）
韩超前[2]（2018）在《猪小肠粘膜下层修复鸡腱鞘滑膜化的实验研究》一文中研究指出目的:肌腱损伤通常伴有腱鞘损伤,以前的观点认为肌腱损伤修复过程中切除腱鞘有助于预防粘连,近些年逐渐认识到保持完整的腱鞘对预防肌腱粘连有积极地作用。本课题拟采用双层sis膜替代腱鞘,研究其自身的特性及对肌腱粘连的防止作用,分析滑膜细胞的分布,为防止肌腱粘连提供新的选择及理论依据。方法:通过物理、化学方法制备sis膜及浸提液,检测观察sis膜的排异性、生物特性等,对比各种方法将sis植入鸡体内对鸡的局部、脏器及全身的影响;选择体重在2-3kg的健康雄性莱亨鸡75只,随机分成3组,每组25只,A组为腱鞘缺损原位缝合组,B组为腱鞘缺损SIS替代组,C组为腱鞘缺损组。构建鸡腱鞘缺损模型,切除II区以A2滑车为中心的腱鞘1厘米,不切断屈肌腱。A组将切开的腱鞘用6/0缝线原位缝合,B组腱鞘缺损区用双层SIS覆盖肌腱,用6/0缝线将其缝合于缺损处,C组切除腱鞘后缺损不予修复。术后抗生素预防治疗。术后4周,ABC叁组均行关节活动度测定(Total activity measurement,TAM),肌腱滑移距离(Tendon sliding distance,TSD)测定,HE染色组织学观察进行NysKa粘连度评分,腱鞘滑膜细胞免疫组织化学染色观察,分析滑膜细胞计数、分布,分析sis滑膜化的程度,所得数据用spssl5.0统计软件进行方差分析。评价sis防治粘连的效果及sis滑膜化的程度。结果:检测sis膜的特性显示所有鸡注射后体温升高均低于1.2℃以内,而且注射前后体温波动幅度均小于1.6℃;鸡注射浸提液后1、6、12、24小时,实验侧及对照侧均未发现有白斑,水肿或坏死出现。阳性对照侧注射20%酒精后6小时可见白斑,中心部分明显水肿,12小时后白斑颜色逐渐变灰,24小时后中心部分坏死结痂。实验动物均成活,术后活动正常,饮食正常。所有手术伤口一期愈合,无感染、积液、瘘道产生,无植入材料排出现象。SIS标本植入1周时被肌肉组织疏松包绕,SIS周围见中性粒细胞、淋巴细胞、巨噬细胞;3周仍见炎性细胞浸润,较多的巨噬细胞,SIS中间有血管形成。6周炎性细胞基本消失,SIS间有大量血管形成,SIS开始部分降解吸收。9周时SIS几乎完全降解吸收。始终未见肌肉组织变性、坏死或植入物被排斥。全身毒性试验组鸡观察期内均表现饮食正常,活动自如,无呼吸困难、反应迟钝等症状。7天后鸡的体重都有增加。解剖观察无腹水、腹腔内容物无粘连,心、肝、脾、肾未见异常。细胞毒性试验证明随着培养时间的延长,未见抑制细胞生长现象,每组细胞数量均增加,但组间细胞数量没有显着性差异。在鸡腱鞘修复模型中,对比sis膜和对照组,各组切口愈合良好。术后4周,TAM测定:A组 147.2880±6.9274,B组 140.0400±6.6562,C组 106.1760±12.4643。经统计学分析,A、B两组与C组比较差异有统计学意义(P<0.05);B组与A组比较差异无统计学意义(P>0.05)。TSD测定:A组 1.2000±0.0764,B组 1.1600±0.0707,C组0.9080±0.1222。经统计学分析,A、B两组与C组比较差异有统计学意义(P<0.05)。B组与A组比较差异无统计学意义(P>0.05)。HE染色所见:A、B两组可见肌腱与腱鞘之间有明显的空隙,A组腱鞘壁层和脏层滑膜表面完整连续光滑;B组新生腱鞘脏层滑膜完整连续光滑,壁层滑膜虽然生成尚好但不连续;C组,肌腱与周围组织间分界不清并有明显纤维组织长入。NysKa氏法粘连度评分:A组0.9600+0.3512,B组 1.2000+0.4083,C组2.0800+0.5716。经统计学分析,A、B组与C组比较差异有统计学意义(P<0.05);A组与B组比较差异无统计学意义(P>0.05)。免疫组织化学所见:A、B组,可见大量滑膜细胞,排列致密,分布均匀,B组较A组滑膜细胞数量略少;C组,滑膜细胞数量少、稀疏,分布不均。滑膜细胞计数:A 组 127.5539±29.3512,B组 122.3215±23.3605,C 组60.3522±21.3031。经统计学分析,A、B组与C组比较差异有统计学意义(P<0.05);A组与B组比较差异无统计学意义(P>0.05)。双层sis膜替代腱鞘的试验表明其可以明显促进滑膜细胞增殖分布,减轻肌腱粘连。结论:Sis膜植入鸡体内检测证明其具备无毒性、无免疫原性、局部无排斥反应。而双层sis膜模仿腱鞘结构,为滑膜细胞爬移替代奠定了良好的基础,既达到了隔离作用,又发挥了滑膜的润滑作用。SIS修复缺损的腱鞘能有效防止肌腱粘连,缺损的腱鞘未行修复会导致明显肌腱粘连。双层sis膜制备迅速简便,不但有助于了解腱鞘预防粘连的机制,同时也为处理肌腱粘连这一临床难题提供了新的选择,具有很好的开发潜力。(本文来源于《武汉大学》期刊2018-05-01）
王森[3]（2018）在《注射型猪小肠粘膜下层修复兔膝关节软骨缺损的实验研究》一文中研究指出目的:比较注射型猪小肠粘膜下层与膜状猪小肠粘膜下层修复兔膝关节软骨缺损的效果,评价注射型猪小肠粘膜下层的疗效。方法:27只成年新西兰白兔(体重3.0-3.5kg)制作双侧膝关节股骨滑车上软骨缺损模型,随机分为叁组,第1组为空白组,第2组为膜状SIS治疗组,第3组为注射型SIS治疗组。术后第4、8、12周分别对各组取材行大体观察、HE染色、甲苯胺蓝染色、CollagenⅡ免疫组化染色,并参照ICRS评分法行大体评分、组织学评分、使用Image-pro Plus 6.0图像分析软件对12周时CollagenⅡ免疫组化染色结果进行分析、根据分光光度计比色法测量12周时各组新生组织中糖胺多糖(GAG)含量。结果:(1)大体观察:术后4周空白组未见明显修复,对照组、实验组缺损部位见少量灰白色组织;术后8周各组缺损部位见灰白色组织,表面不平,与正常组织分界明显;术后12周各组缺损部位灰白色组织较8周时更多,空白组、对照组与周围正常组织分界明显,实验组与周围正常组织分界模糊。(2)ICRS大体评分:术后4周分别为1.33±0.52、2.33±0.52、3.50±0.55;术后8周分别为2.17±0.75、4.67±0.82、7.33±0.82;术后12周分别为7.83±0.75、10.17±0.75、11.17±0.98。术后4、8周时各组两两之间差异有统计学意义(P<0.05);12周时实验组与对照组之间差异无统计学意义(P>0.05),但与空白组比较均有统计学意义(P<0.05)。(3)组织学观察:HE染色、甲苯胺蓝染色、CollagenⅡ免疫组化染色显示术后4周时各组缺损部位未见明显软骨修复,细胞外基质未见异染;术后8周时空白组见大量纤维样组织,细胞外基质未见异染。对照组、实验组细胞外基质异染呈弱阳性;术后12周时空白组见纤维软骨增生,与周围正常组织分界模糊,细胞外基质未见异染。对照组、试验组可见少量新生透明软骨,细胞外基质异染阳性。(4)ICRS组织学评分:术后4周分别为3.67±0.52、5.50±0.54、6.33±1.03;术后8周分别为5.50±0.84、5.83±0.75、7.67±0.82;术后12周分别为6.83±0.75、7.00±0.63、10.33±1.03。4周时对照组与实验组之间差异无统计学意义(P>0.05),但对照组、实验组与空白组比较差异均有统计学意义(P<0.05);8、12周时空白组与对照组之间差异无统计学意义(P>0.05),但实验组与空白组、对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。(5)12周时各组Ⅱ型胶原蛋白免疫组化染色切片平均光密度分别为0.2183±0.05672、0.3333±0.04033、0.4833±0.06121,两两之间比较差异有具有统计学意义(P<0.05)。(6)12周时各组糖胺多糖(GAG)含量分别为8.46±0.92μg/㎎、11.17±0.63μg/㎎、13.15±1.01μg/㎎,两两之间比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:膜状猪小肠粘膜下层(SIS)与注射型猪小肠粘膜下层均能促进兔膝关节软骨缺损的修复,但注射型猪小肠粘膜下层的修复效果更好。(本文来源于《西南医科大学》期刊2018-05-01）
王量[4]（2017）在《猪小肠粘膜下层冷冻凝胶复合小肠粘膜下层仿生双层敷料的研究》一文中研究指出研究目的和背景难愈性、慢性创面和组织缺损引起的疼痛、生理功能障碍及身体外观变化严重影响患者的运动自由和生活质量,甚至危及生命。鉴于覆盖创面若使用自体和异体移植组织,其受来源、伦理和感染性疾病风险所限制,而具有良好性能的组织工程敷料更有发展空间。动物来源的异种生物材料的研究是一个热点,组织工程材料来源充足,生物相容性好,安全可靠,是很好的组织再生的支架,并没有同种异体生物材料移植的伦理问题,易于规模化制备。其中猪小肠粘膜下层(small intestinal submucosa,SIS)具备免疫源性较低、组织相容性良好、生长因子含量高、可降解等优点,是一种理想的生物源性材料。但SIS仍存在不足之处:首先SIS为薄膜状材料,缺乏足够的叁维结构,限制了其应用领域;其次,SIS结构致密,缺乏疏松的孔径结构,不利于细胞的迁移爬行及营养物质的交换。在前期实验过程中我们课题组发现了一种新的SIS交联方法,创新性的制备了SIS冷冻凝胶,该方法制备的新型叁维生物支架材料具有弹性变形和形状记忆能力。我们在SIS冷冻凝胶基础上再度研发出脱细胞SIS膜与SIS冷冻凝胶复合的SIS仿生双层敷料。通过生物学和物理性能的测试,评价其作为支架细胞移植及作为敷料覆盖创面的可行性,进一步为修复创面、组织重建等应用提供理论依据。通过扫描电镜观察其复合结构,了解其特征。测试其机械性能、细胞毒性、促进创面愈合能力。通过体外细胞复合培养证实了下层SIS冷冻凝胶可主动吸附细胞,并且细胞能在双层支架材料上粘附生长。双层材料的生物、物理性能良好,既结合了冷冻凝胶的多孔叁维支架结构,抗压能力强,不易碎裂,又结合了SIS膜的良好机械性能,较少的孔隙率,抗张能力强,可以抗细菌侵袭。既是一种可用于细胞及药物移植的支架,也可以单独使用,利用其对有核细胞的捕获作用~([1]),来发挥组织工程支架作用,在组织重建、创面修复方面有广泛的应用前景。研究方法研究分五部分第一部分:脱细胞SIS膜的及SIS粉末的制备1.采用机械刮除及脱脂、胰蛋白酶消化、去垢剂清洗等序贯步骤制备脱细胞SIS膜。2.将SIS膜低温粉碎后,胃蛋白酶将其消化过滤、离心、盐析、透析、冻干,制备脱细胞SIS粉末。第二部分:SIS冷冻凝胶及仿生双层敷料支架的制备1.将SIS粉末与SIS膜冷冻交联时复合在一起形成双层结构。2.扫描电镜观察SIS双层的微观结构和孔径。3.对SIS双层的力学性能和水蒸气透过率(water vapor transmission rate,WVTR)进行了研究。第叁部分:SIS仿生双层敷料支架的抗细菌侵袭作用通过向SIS仿生双层敷料支架及其他对照不同材料表面接种细菌,用平板计数测量细菌穿透各种材料的量,比较各自阻挡细菌入侵的能力;第四部分:SIS仿生双层敷料支架体外细胞培养1.GFP转基因小鼠骨髓间充质干细胞的分离培养。2.荧光显微镜和激光共聚焦显微镜观察。3.将其与商业化明胶海绵等作对比,CCK-8试剂盒检测细胞毒性。第五部分:SIS仿生双层敷料支架促进创面愈合1.制作小鼠全层皮肤缺损创面模型,与空白对照组,商品化明胶海绵组,SIS膜组,SIS冷冻凝胶组进行对照,观察各组材料对创面愈合的影响;2.通过qPCR测量PCNA、E-cadherin和CD31表达,观察双层胶仿生材料对创缘细胞增殖和创面血管化的影响;研究结果1.成功制备了脱细胞SIS膜,SIS粉末。扫描电镜显示,SIS膜表面呈网状结构,未见明显细胞形态。2.成功制备了具有弹性形变和形状记忆功能的SIS冷冻凝胶以及复合SIS脱细胞膜而成SIS仿生双层敷料支架。扫描电子显微镜观察表明,表面为脱细胞SIS膜,其下紧密结合SIS冷冻凝胶,二者结合紧密,表层致密,下层多孔。进行力学和水蒸气透过测试表明,材料机械性能出色,杨氏模量10.95MPa、拉伸强度1.26MPa、断裂伸长率35.41%,水蒸气透过率656g/m~2/day。3.细菌穿透实验发现,SIS仿生双层敷料支架与凡士林纱布组,商品化明胶海绵组,SIS膜组,SIS冷冻凝胶组进行对照比较,SIS双层和SIS膜可以显着的阻挡细菌的入侵,差异具有统计学意义(p<0.05,n=3)4.GFP转基因小鼠分离骨髓间充质干细胞体外培养,挤压SIS冷冻凝胶,滴加细胞悬液后可主动吸附细胞迅速反弹。荧光显微镜和激光共聚焦显微镜观察结果显示,SIS双层材料有细胞粘附,细胞附着于支架表面及孔壁内呈扁平状、纺锤样、线样。CCK-8试剂盒检测结果显示,SIS双层材料组OD值大于商品化明胶海绵。5.小鼠皮肤全层缺损创面愈合情况,伤后3天,SIS双层组愈合速度明显快于明胶海绵组以及空白对照组的愈合率分别为63.22%,21.32%,12.18%,伤后7天创面愈合率分别为90.63%,67.27%,47.96%,差异有统计学意义(p<0.01,n=3)。伤后3天、7天SIS双层组的创面愈合率均显着大于商品化明胶海绵组、空白对照组;Quantitative Real-time PCR检测发现,SIS双层组细胞增殖标志物PCNA表达水平最高,SIS膜和明胶海绵组表达较低,差异有统计学意义(P<0.05,n=3);同时检测了E-cadherin,表达最低在SIS双层组,约为35.32,明显低于最高值,明胶海绵组的72.09,差异具有统计学意义(P<0.05,n=3);发现CD31的表达在7天时双层组(4.67)显着高于SIS膜组(2.05)、SIS冷冻凝胶组(2.39)、明胶海绵组(1.21)(P<0.05,n=3)。结论1.成功研制了SIS仿生双层敷料支架。由具有弹性形变和形状记忆功能的SIS冷冻凝胶以及脱细胞SIS膜复合而成一种叁维组织工程支架,生物敷料,可降解。表层为脱细胞SIS膜,其下紧密结合SIS冷冻凝胶,二者结合紧密,表层致密,下层多孔。进行力学和水蒸气透过测试表明,材料机械性能出色,水蒸气透过率适当。并具有良好的抗菌作用。2.SIS仿生双层敷料对细胞的增殖有良好的促进作用。SIS冷冻凝胶的多孔结构,对细胞迁移和营养物质交换有促进作用。交联剂EDC不增加SIS材料的细胞毒性。支架表面和孔壁上可见细胞附着生长。3.SIS仿生双层敷料对创面有促进愈合作用。上层致密SIS膜具备防止细菌入侵的屏障作用及加强保湿和机械性能的作用,下层的SIS冷冻凝胶多孔结构则利于创面细胞的增殖和修复。此外,SIS材料具备的良好的理化性能和生物学特性,可以有效地保护创面并建立创面局部良好的微环境,促进创面修复。(本文来源于《第叁军医大学》期刊2017-10-01）
范忠伟[5]（2017）在《低氧预培养脂肪间充质干细胞复合小肠粘膜下层构建组织工程肌腱修复大鼠跟腱缺损的实验研究》一文中研究指出目的:体外研究已证实低氧培养脂肪间充质干细胞(ADMSCs)可以提高它的的生存能力以及向肌腱细胞分化的潜能,本研究通过对ADMSCs经低氧预培养后再复合小肠粘膜下层(SIS)修复大鼠跟腱缺损的体内研究探讨ADMSCs复合SIS构建组织工程肌腱修复肌腱缺损的可能性,并进一步探讨低氧是否能促进ADMSCs复合SIS治疗肌腱缺损的治疗效果,为治疗肌腱损伤提供一种新的理论依据。方法:从Sprague-Dawley大鼠的脂肪组织分离、提取ADMSCs,并对其进行纯化、传代培养,将第3代ADMSCs采用流式细胞仪检测ADMSCs表面标志物的表达。将第3代ADMSCs分成两组,分别置于常氧(20%02)与低氧(2%02)培养箱中培养7天,然后采用CM-DiI标记两组细胞,再将标记的ADMSCs复合SIS后在常氧条件下培养48小时。选取50只(250—300g)雄性SD大鼠,随机选取30只分成A、B、C叁组,每组10只,剩余20只大鼠左侧跟腱记为D租,右侧跟腱记为E组。将A组作为假手术组,将B、C、D、E四组大鼠双侧跟腱的外侧束与后束去掉约0.5cm,作为大鼠跟腱缺损的模型,其中将B组作为自体肌腱移植组、C组作为单纯SIS组、D组作为常氧ADMSCs复合SIS组、E组作为低氧ADMSCs复合SIS组,采用改良的Kessler缝合法将自体离断的跟腱或SIS缝在缺损的跟腱上,然后将所有实验组双腿行石膏外固定,四周后观察移植段的大体情况,并进行HE、masson染色、免疫组织化学检查、图像分析以及生物力学测试。结果:(1)术后4周移植段he染色结果显示:a组可见肌腱细胞稀少且呈细小长梭形,肌腱胶原纤维呈致密波浪状并朝一个方向排列;b组可见大量成纤维细胞,细胞外基质排列顺序紊乱;c组、d组以及e组的sis上均有长梭形细胞沿着细胞外基质朝一个方向有规律的排列,e组中长梭形细胞数的比例高于c、d两组,但d组的长梭形细胞数却高于c组,c、d、e叁组中,e组的细胞外基质最多,但d组的细胞外基质却多于c组。(2)4周后masson染色显示:a组胶原纤维呈蓝色,细胞质呈红色,细胞核呈黑色,可见少量的梭形细胞沿胶原纤维方向排列;b组可见大量沿胶原纤维排列的梭形细胞,但胶原纤维呈无规则排列;c组、d组以及e组均有不同数量的长梭形细胞沿着胶原纤维朝一个方向有规律的排列,e组胶原纤维的沉积量最大、且排列顺序最整齐,但d组胶原纤维的沉积量以及排列顺序要优于c组。(3)d组与e组移植段免疫组织化学检查显示:d组与e组的长梭形细胞和椭圆形细胞中均有大量的腱调蛋白(tnmd)蛋白以及mkx(mohawkhomeobox)蛋白表达,通过对mkx蛋白表达阳性细胞数分析,e组中表达mkx阳性细胞数要明显高于d组(p<0.05)。以上结果表明e组移植段比d组更易塑造成肌腱样组织。(4)d组与e组移植段admscs检测与mkx免疫荧光化学染色检查显示:d组与e组均有大量的admscs存在,并且e组表达mkx蛋白阳性admscs的数量比例要高于d组(p<0.05)。(5)4周后生物力学测试显示:e组破坏力(32.34±2.71)n要高于c组(20.33±1.47)n及d组(27.78±2.11)n(p<0.05),e组最接近b组(37.62±1.54)n(p<0.05),而d组高于c组(p<0.05)。结论:(1)admscs复合sis构建组织工程肌腱修复肌腱缺损的治疗效果要优于单纯利用SIS修复。(2)低氧可以促进ADMSCs复合SIS治疗肌腱缺损的治疗效果。(3)附在SIS上的ADMSCs可能分化成了肌腱样细胞,并且低氧对ADMSCs向肌腱样细胞分化可能起到了促进作用。(本文来源于《西南医科大学》期刊2017-05-01）
孙珍珠[6]（2017）在《脱细胞猪小肠粘膜下层疝修补片生物学特性研究》一文中研究指出小肠粘膜下层(Small intestinal submucosa,SIS)是一种天然的细胞外基质,主要成分是胶原蛋白。SIS经加工后制成的修复材料具有良好的生物相容性、适当的降解性、低或无免疫原性、一定的机械强度等特性。目前,SIS修复材料广泛用于血管、膀胱、肠道、肌腱以及泌尿系统等组织修复中。本研究所采用的脱细胞猪小肠粘膜下层疝修补片是由猪小肠粘膜下层经脱细胞、冻干、灭菌等工艺制成,临床上拟通过长期植入体内修复疝气、肛瘘等部位软组织的损伤。本研究针对脱细胞猪小肠粘膜下层疝修补片生物学特性中的降解规律和免疫毒性两方面进行临床前研究,为其更安全、有效的应用提供理论依据。(1)为了更加可靠地研究脱细胞猪小肠粘膜下层疝修补片的免疫毒性,本研究利用细菌脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)优化大鼠免疫刺激模型,为其免疫毒性研究设立免疫刺激组。选取Wistar大鼠42只,随机分为空白对照组、假手术组、免疫抑制组、LPS给药后6h组、LPS给药后12h组、LPS给药后24h组和LPS给药后48h组。对大鼠进行给药处理后取材并检测以下指标:大鼠体重变化、免疫器官系数、血液学参数、T淋巴细胞亚群分析、淋巴细胞增殖、细胞因子(IL-1β和TNF-α)含量。结果显示,LPS给药后6h、12h组在免疫器官系数、血液学参数、T淋巴细胞亚群分析、淋巴细胞增殖、细胞因子含量方面均出现一定的免疫刺激现象,与空白对照组、假手术组比较存在显着性差异(p<0.05),而12h组的免疫刺激现象更加明显。LPS给药后24h、48h组的免疫刺激现象不明显;免疫抑制组在免疫器官系数、血液学参数、T淋巴细胞亚群分析、淋巴细胞增殖、细胞因子含量等方面均出现一定的免疫抑制现象,与空白对照组、假手术组比较存在显着性差异(p<0.05)。上述结果说明,大鼠腹腔注射LPS后12h的免疫刺激现象最明显,可作为大鼠免疫刺激模型用于脱细胞猪小肠粘膜下层疝修补片的免疫毒性研究中。(2)本研究对脱细胞猪小肠粘膜下层疝修补片的免疫毒性进行了探讨。选取Wistar大鼠80只,随机分为高剂量组、低剂量组、假手术对照组、免疫抑制组和免疫刺激组,依据考察周期将每组16只大鼠再随机分为1、4、8和12周4个实验操作小组(n=4)。对大鼠进行埋植/给药处理后取材并检测以下指标:大鼠体重变化、免疫器官系数、血液学参数、免疫器官病理学、NK细胞杀伤活性、T淋巴细胞亚群、淋巴细胞增殖、补体C3蛋白含量、免疫球蛋白(IgG、IgM)含量、细胞因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)含量。结果显示,第1、4、8和12周的各时间点,高剂量组、低剂量组与假手术对照组在大鼠体重变化、血液学参数、免疫器官系数分析、免疫器官病理学分析、T淋巴细胞亚群分析、淋巴细胞增殖试验、免疫球蛋白含量、细胞因子含量的测定方面变化趋势基本一致,各组数据间相比不存在显着性差异(p>0.05);高剂量组和低剂量组在NK细胞杀伤活性和补体C3含量测定方面与假手术对照组有一定差异。免疫刺激组大鼠在血液学参数、免疫器官系数分析、免疫器官病理学检查、T淋巴细胞亚群分析、淋巴细胞增殖方面出现一定的免疫刺激现象,与高剂量组、低剂量组、假手术对照组比较有显着性差异(p<0.05);免疫抑制组大鼠在血液学参数、免疫器官系数分析、免疫器官病理学检查、T淋巴细胞亚群分析、淋巴细胞增殖方面出现不同程度的免疫抑制现象,与高剂量组、低剂量组、假手术对照组比较有显着性差异(p<0.05)。以上结果说明,大鼠腹部皮下埋植脱细胞猪小肠粘膜下层疝修补片后未见明显的免疫毒性反应。(3)本研究从体外降解和体内降解两方面对脱细胞猪小肠粘膜下层疝修补片的降解规律进行研究。体外降解包括加速降解和常规降解两方面。其中加速降解是在0.5mg/mL的Ⅰ型胶原酶中震荡进行,于不同时间点取出样品碎片,计算其降解率。结果显示,随着时间的延长,脱细胞猪小肠粘膜疝修补片在0.5mg/mL的Ⅰ型胶原酶中逐渐降解,酶解20h降解率达到68%左右,此前的降解率均低于相同时间点下COOK~?疝修补片的降解率,此后二者降解率接近,至96h降解率均90%以上。常规降解是在0.01M PBS中静置进行,于不同时间点取出样品碎片,计算其降解率。结果显示,脱细胞猪小肠粘膜疝修补片静置30d时几乎未发生降解,此后随着时间的延长,逐渐降解,至静置180d时,降解率达到90%以上。体内降解的体内埋植实验跟免疫毒性研究的埋植实验同步进行,分别于大鼠腹部皮下植入脱细胞猪小肠粘膜下层疝修补片后1周、4周、8周和12周对其进行埋植部位大体观察和组织学观察。结果发现,埋植部位大体观察,随着植入周期的延长,第1、4、8周的脱细胞猪小肠粘膜下层疝修补片不断被结缔组织包裹,并逐渐降解吸收,至植入12周脱细胞猪小肠粘膜下层疝修补片与周围结缔组织完全融合。组织学观察,随着植入周期的延长,第1、4、8周的脱细胞猪小肠粘膜下层疝修补片逐渐与周围结缔组织融合,炎症细胞逐渐减少,至植入12周该材料与周围结缔组织基本融合,局部仅见少量散在炎症细胞浸润,未见明显炎症病变。大鼠皮下植入脱细胞猪小肠粘膜下层疝修补片12周时,皮下脱细胞猪小肠粘膜下层疝修补片基本完全降解。降解实验结果说明,脱细胞猪小肠粘膜疝修补片具有适当的生物降解性。(本文来源于《广西医科大学》期刊2017-05-01）
宋洋[7]（2017）在《应用猪小肠粘膜下层预防内镜粘膜下剥离术后食管狭窄的动物研究》一文中研究指出研究背景内镜黏膜下剥离术(endoscopic submucosal dissection,ESD)是早期食管癌有效的治疗方法。但ESD术可能会造成严重的食管狭窄,影响患者的预后及生活治疗。小肠黏膜下层(small intestinal submucosa,SIS)是一种理想细胞外基质(extracellular matrix,ECM)材料,其具有高组织相容性及生物力学性能,安全性高。目的探讨猪小肠细胞外基质预防ESD术后狭窄的功效。方法选取9只杂交猪在插管麻醉后行环周食管ESD术。其中3只在内镜下用支架将小肠细胞外基质放置到食管ESD术后食管损伤位置为小肠粘膜下层组,3只在创面放置支架为支架组,另外3只为空白对照组。在第2周及第4周复查胃镜观察食管狭窄情况,在第8周进行病理学评价。结果通过十二烷基硫酸钠脱细胞法和酶消化方法后,苏木精-伊红染色法(hematoxylin and eosin stain)检测发现脱细胞成功,从而制备了具有组织相容性的猪小肠细胞外基质。9只杂交猪接受环周食管ESD术后,支架组及空白对照组的6只猪在术后2周发生了不同程度的粘膜狭窄,其中3只因不能耐受经口进食,而进行了早期安乐死。2周及4周性内镜检查,可见支架组及空白对照组ESD术后创面出现持续的炎症反应及不完全的上皮形成。猪小肠黏膜下层组行2周及4周性内镜检查,发现ESD术后创面炎症反应少,能逐渐形成上皮组织,食管狭窄程度较支架组及空白对照组低。4周时病理标本显示,猪小肠黏膜下层组的标本粘膜炎症反应少,狭窄程度较支架组及空白对照组低。结论本研究成功制备具有生物相容性的猪小肠细胞外基质,将其放置在猪食管环周ESD术后的创面,有效预防了食管狭窄的发生。通过本研究将有助于为临床预防ESD术后食管狭窄提供新思路,并为组织工程生物材料的制备及临床应用夯实基础。(本文来源于《首都医科大学》期刊2017-03-01）
廖建贵[8]（2016）在《小肠粘膜下层冷冻凝胶用于细胞移植支架的研究》一文中研究指出研究目的和背景难治性、慢性创伤及组织缺损导致的疼痛、生理功能缺失、容貌的改变严重影响着病人的行动自由和生活质量,并进一步导致心理和社会问题。当自体及同种异体移植受来源、伦理及传染疾病等限制时,组织工程修复成为必然的选择。动物源性的异种生物材料是组织工程材料的研究热点,来源充分,安全可靠,是一种良好的再生组织材料支架,且没有异体生物材料移植的伦理学问题,便于进行规模化、产业化制备。其中猪小肠黏膜下层(small intestinal submucosa,SIS)有着较低的免疫源性、良好的组织相容性且富含生长因子,是一种较为理想的生物源性材料。但SIS仍存在一下不足:首先SIS为薄膜状材料,缺乏足够的叁维结构,限制了其应用领域;其次,SIS结构致密,缺乏疏松的孔径结构,不利于细胞的迁移爬行及营养物质的交换。本研究以SIS为原材料,通过一种新的交联改性方法,制备出了具有弹性形变能力和形态记忆功能的新型组织工程支架材料:SIS冷冻凝胶。通过扫描电镜观察其表面及内部的结构,了解其孔径大小。比较不同制备参数的冷冻凝胶吸水率、体外降解率、机械性能、细胞毒性,了解冷冻凝胶的形成机制,优选制备条件。通过体外细胞复合培养证实了SIS冷冻凝胶可主动吸附细胞。细胞能在支架材料上粘附生长。SIS冷冻凝胶的生物、物理性能良好,抗压能力强,不易碎裂,便于移植。是一种可用于细胞及药物移植的支架,在组织重建、创面修复及注射填充方面有广泛的应用前景。研究方法研究分四部分第一部分:脱细胞SIS膜的制备及扫描电镜观察1.采用机械刮除及甲醇/氯仿脱脂、胰酶消化、去垢剂漂洗相结合的办法制备脱细胞SIS膜。2.扫描电镜观察脱细胞SIS膜表面结构及有无细胞残留。第二部分:脱细胞SIS粉末的制备及SIS溶液浓度优选1.通过低温粉碎后胃蛋白酶消化、过滤、盐析、离心、透析、冻干等步骤制备脱细胞SIS粉末。2.观察不同浓度的SIS溶液性状及流动性,冻干制备的海绵形态,优选SIS溶液浓度。第叁部分:SIS冷冻凝胶的制备及性能评价1.利用自制简易混匀装置,采用冷冻交联的方法制备了新型生物材料:具有弹性形变和形态记忆功能的SIS冷冻凝胶。2.扫描电镜观察SIS冷冻凝胶的微观结构及孔径大小。3.检测不同EDC浓度制备的冷冻凝胶吸水率、体外降解速率及机械性能。第四部分:SIS冷冻凝胶体外细胞复合培养1.分离培养新生GFP转基因小鼠皮肤成纤维细胞。2.体外复合培养后荧光显微镜及扫描电镜观察。3.以商品化胶原海绵为对照,CCK-8试剂盒检测不同EDC浓度制备的SIS冷冻凝胶细胞毒性。研究结果1.成功制备了脱细胞SIS膜,扫描电镜结果提示SIS表面纤维呈网状结构,未见明显残留细胞形态。2.脱细胞SIS粉末呈白色絮状。2mg/ml、5 mg/ml、10 mg/ml浓度的SIS粉末均可溶解于0.1%醋酸溶液中。SIS浓度越高,材料的形态及物理性能也越好。但SIS溶液变得越来越粘稠,流动性也越来越差。10mg/ml的浓度溶解已经变得较为困难。更高浓度的SIS溶液磁力搅拌器转子已经无法转动,溶液不均质,搅拌过程容易产生气泡。因此我们优选SIS溶液浓度为10mg/ml作为下一步实验参数。3.成功制备了具有弹性形变和形态记忆功能的SIS冷冻凝胶。压缩形变达85%以上时仍完好无损,移除外力后可迅速吸水复原。扫描电镜提示SIS冷冻凝胶呈多孔结构,孔径大小介于在50-200um之间。平均孔径大小为:(106.63±28.9)um。随着交联制备的EDC浓度升高,SIS冷冻凝胶吸水率不变、降解速率减缓、机械性能提高。优选EDC制备浓度为30m M-50m M。4.通过无菌纱布挤压排除并吸走内部的水分可使SIS冷冻凝胶变扁,滴加细胞悬液后可迅速主动回弹吸附细胞。GFP转基因小鼠成纤维细胞体外复合培养,荧光显微镜及扫描电镜结果均显示SIS冷冻凝胶有利于细胞的生长粘附,细胞存在与支架的表面及孔壁上,呈线性、纺锤形扁平结构。有大量伪足长出,部分融合成片。CCK-8试剂盒检测提示不同EDC浓度交联制备的SIS冷冻凝胶吸光度相同,与商品化胶原海绵支架材料无明显差异。结论1.通过自制简易混匀装置,利用水溶性零长度EDC交联剂,采用冷冻交联方法制备的SIS冷冻凝胶具有弹性形变和形态记忆功能,是一种可注射、可降解的支架材料。较目前国外所报道的冷冻凝胶制备方法更简便,交联条件更易控制,不需要接枝额外化学基团,避免了化工试剂的潜在生物毒性。2.SIS冷冻凝胶具有孔隙相通的多孔结构,有利于细胞的迁移爬行和营养物质的交换。不同EDC浓度制备的冷冻凝胶吸水率相同,体外降解速率、机械性能不同。优选EDC浓度为30m M-50m M。3.EDC浓度对SIS冷冻凝胶细胞毒性无影响。细胞可在支架表面及孔壁上粘附生长。(本文来源于《第叁军医大学》期刊2016-05-01）
滕世峰[9]（2016）在《基于两种制作猪小肠粘膜下层细胞基质方式的研究》一文中研究指出背景由于先天性或者后天性腹壁缺损而导致的腹壁疝是外科医生常常需要面临的问题,当前美国每年因各种疝而需要行手术治疗的患者大约在990,000人次,相比传统的缝合修复,无张力修补技术可以获得更为满意的术后效果,并且使用补片进行疝的修复可以减少大约50%-75%的疝复发。为了达到更满意的治疗效果,无张力补片修复技术被越来越多的外科医生所采用,目前无张力修补技术被认为是疝修复的金标准,并已经逐步取代传统的缝合修补技术。这导致了补片制造行业的加速发展,目前在美国市场上大约有超过200种以上的补片类型,全球每年大约有100万张补片应用于疝的修复上。目前临床上应用的补片类型主要包括合成高分子材料以及脱细胞生物材料,脱细胞生物材料主要包括动物来源以及人尸来源,猪小肠粘膜现作为一种可再生材料被广泛应用于临床和临床前的研究,其主要作用是能够帮助修复机体因外界损伤而导致的缺损,其修复机体缺损的主要机制是诱导干细胞向移植缺损区迁移,并且诱导干细胞分化成缺损区域的细胞,从而达到自体重塑的效果,同时也避免了人造高分子材料移植后引起的慢性炎症所导致的一系列的并发症。尽管再生材料在缺损修复上面的作用非常强大,但是也有其自身的缺陷,包括急性炎症反应、血清肿、可能携带病原菌(供体动物自身所带病原菌)等,但是产生的这些后果的主要原因均和脱细胞的不彻底密切相关,其中包括生物材料中含有的细胞膜成分,相应的长链DNA片段等,这些和脱细胞的方式以及脱细胞所使用的脱细胞试剂明确相关,因此探索一种新型的,优化的,可取的脱细胞方式尤为重要。研究目的脱细胞的细胞外基质生物支架是近年来研究和应用的热点,然而由于脱细胞操作步骤繁琐,脱细胞程度受限,以及“过度”脱细胞等原因,脱细胞生物材料未能大量地运用于临床,本课题选用猪小肠粘膜下层作为研究对象,采用物理机械刮除方式作为对照,分别使用震荡和灌注两种方式进行脱细胞,并比较二种不同脱细胞方式所制得生物补片的脱细胞程度、生物力学变化以及残留生物活性因子等,为探索一种更优化、更可取的脱细胞方式奠定理论基础。研究方法(1)两种制作脱细胞生物基质的基本步骤及评估手段:1、猪小肠粘膜下层的准备:6月大的小猪4只(由上海柯惠临床试验基地提供),雌雄各2只,体重约100kg,屠宰后取新鲜猪小肠,仅选空肠作为实验材料。间断取材后,采用单纯的机械刮除方式制备U-SIS作为对照,用0.1%过氧乙酸/4%乙醇震荡脱细胞方式制备S-SIS,用0.1%过氧乙酸/4%乙醇灌注脱细胞方法制备P-SIS,制备完成的材料进行-120℃24 h冻干密封后,环氧乙烷消毒,-80℃保存;2、脱细胞程度评估及细胞外基质的微观叁维结构观察:通过检测叁种脱细胞材料的DNA含量,HE染色镜检及电镜扫描来评估细胞外基质的脱细胞程度及微观结构;3、生物力学评估:将叁种材料分别进行胀破力、拉断力以及透湿性检测;4、生物活性因子含量评估:比较叁种材料的VEGF、TGF-β、b-FGF生物活性因子的含量。(2)灌注脱细胞的机理研究:将片状的猪小肠粘膜下层,连接于生物反应器上(附图1、2),分别检测压力渗透作用以及流水冲洗作用单独对猪小肠粘膜下层的脱细胞效果。1、压力渗透对SIS脱细胞效果的影响:将片状SIS平铺在反应器上,两边反应器使用螺母旋紧,避免灌注过程中脱细胞溶液流出。用0.1%过氧乙酸/4%乙醇试剂制备细胞外基质(灌注过程中检测灌注侧压力变化),剪取中心区域SIS,-120℃24 h冻干密封后,环氧乙烷消毒,检测DNA含量,评估脱细胞程度。2、流水冲洗对SIS脱细胞效果的影响:将片状SIS平铺在反应器上,两边反应器使用螺母旋紧,避免灌注时脱细胞溶液流出,0.1%过氧乙酸/4%乙醇试剂制备细胞外基质(两边同时灌注,且灌注过程中,维持两侧压力相似),剪取中心区域SIS,-120℃24 h冻干密封后,环氧乙烷消毒,提取DNA,评估脱细胞程度。结果(1)脱细胞程度比较:U-SIS组、S-SIS组、P-SIS组的DNA含量分别为13766.49±1628.32 ng/mg,4856.578±151.17 ng/mg,2009.712±242.50 ng/mg;结果显示猪小肠粘膜下层脱细胞后DNA含量均明显下降,均与对照组DNA含量差异有统计学意义(P<0.05),其中以灌注脱细胞法制得的P-SIS脱细胞程度最高,其DNA含量为震荡方式的1/2,两者之间差异有统计学意义(P=0.000);(2)生物力学比较:U-SIS组、S-SIS组、P-SIS组拉断力分别为4.43±0.3 N/cm,3.43±0.3 N/cm,3.82±0.5 N/cm,与对照组相比,脱细胞后的猪小肠粘膜下层拉断力均有所下降,且两组拉断力下降程度和对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05),U-SIS组、S-SIS组、P-SIS组的透湿性分别为19680±3614.53 g/㎡d,33792±5036.80 g/㎡d,33398.4±6491.25 g/㎡d;经过脱细胞处理的SIS其透湿性较对照组相比明显升高,差异存在统计学意义(P<0.05),但S-SIS组和P-SIS组之间的透湿性差异无统计学意义(P=0.904),P-SIS组拉断力较S-SIS组稍大,但差异无统计学意义(P=0.173);U-SIS组、S-SIS组、P-SIS组的胀破力分别为23.54±1.93 psi,17.34±1.36 psi,23.62±1.92 psi,S-SIS组的胀破力与U-SIS、P-SIS组相比差异均存在统计学意义(P<0.05),P-SIS组胀破力较U-SIS组有少量升高,但两组间差异无统计学意义(P=0.944)。(3)生物因子含量比较:U-SIS组、S-SIS组、P-SIS组的b-FGF含量分别为7.45±0.77pg/mg,4.44±0.60 pg/mg,5.34±0.40 pg/mg;与对照组相比,S-SIS组、P-SIS组的b-FGF含量均有所下降,和对照组相比,差异有统计学意义异(P<0.05),P-SIS组的b-FGF含量较S-SIS组高,差异具有统计学意义(P=0.037),U-SIS组、S-SIS组、P-SIS组的TGF-β含量分别为:10.47±0.29pg/mg,4.71±0.80 pg/mg,9.28±0.59 pg/mg;脱细胞后的细胞外基质的TGF-β较对照组均有所下降,其含量与U-SIS组相比,差异有统计学意义(P<0.05),P-SIS组TGF-β含量较S-SIS组含量高,差异具有统计学差异(P=0.021);U-SIS组、S-SIS组、P-SIS组的VEGF含量分别为70.50±1.33pg/mg,11.29±0.13 pg/mg,22.74±1.37 pg/mg,与对照组相比,S-SIS组、P-SIS组的VEGF均明显下降,差异具有统计学意义(P<0.05),并且S-SIS下降程度尤为明显,P-SIS组VEGF含量为S-SIS组两倍,差异且具有统计学意义(P=0.000)。H&E染色结果:U-SIS上存在着较多细胞,依附于细胞基质表面,而S-SIS、P-SIS基质上的细胞明显减少,S-SIS中胶原蛋白之间结构较松散,P-SIS中丝状纤维之间结构紧密。电镜扫描可以看出:U-SIS表面覆盖有较多细胞及细胞碎片,但是基质纤维之间结构紧密,S-SIS表面细胞数明显减少,但仍然可见少量细胞碎片,但基质胶原蛋白之间结构松散,P-SIS表面无明显组织碎片,基质蛋白纤维之间紧密程度较高。(2)灌注脱细胞机制研究:1、压力渗透组NDA含量为:2629.63±52.74 ng/mg,流水冲洗组DNA含量为:2773.16±74.71 ng/mg,压力渗透组制得的细胞外基质DNA含量较流水冲洗组少,差异具有统计学意义(P=0.028),压力渗透组及流水冲洗组两组基质DNA含量均高于灌注组,差异具有统计学意义(P<0.05)结论针对于目前广为使用的震荡脱细胞制取细胞外基质,本实验研发了一种新的脱细胞方式,1、避免了振荡过程片状的ECM因纠结而导致材料不能得到全部的、彻底的脱细胞处理的结果;避免震荡脱细胞过程中的不断更换脱细胞试剂,存在细菌的交叉污染,导致脱细胞支架的内毒素等不能达标的结果;避免震荡脱细胞过程中操作的非机械化,导致操作过程中(如更换试剂等)需要大量的人力物力的结果;2、新的脱细胞方式在保留细胞外基质完整超微结构的基础上较震荡脱细胞具有更良好的脱细胞结果;3、新的脱细胞方式在生物力学上和震荡脱细胞无明显差异,部分力学(胀破力)较震荡脱细胞方式提高;4、新的脱细胞方式在干重相同情况下保留了更多的生物活性因子含量,为组织重塑提供了更好的依据;5、灌注脱细胞的机制是由SIS的渗透以及冲刷作用共同作用的结果。以上结果显示,灌注脱细胞方式为一种新型的,优化的,可取的脱细胞方式;为制作高生物活性、高机械强度的生物材料提供了更好发展方向。(本文来源于《第二军医大学》期刊2016-05-01）
庄桂武[10]（2016）在《兔尿源性干细胞复合小肠粘膜下层脱细胞基质构建组织工程尿道的研究》一文中研究指出尿道损伤的病因包括创伤、先天性畸形、感染等,临床上主要表现为尿道狭窄、闭锁或缺失,导致排尿功能障碍,甚至可使膀胱、肾脏功能受损,严重影响患者生活质量。尿道狭窄的治疗措施包括包括尿道扩张、尿道内放置支架、尿道内切开、尿道端-端吻合和尿道成形术等。其中,尿道端-端吻合术能解决长度小于2cm的狭窄。但当尿道狭窄长度大于2cm时,直接采用狭窄段切除、端-端吻合的常规手术方法,会导致阴茎弯曲、勃起疼痛。因此,对于长度大于2cm的尿道狭窄须采用新的尿道替代材料进行尿道的修复与重建。目的：长段尿道的狭窄或缺失是临床上泌尿外科医生面临的一个比较棘手的难题,组织工程技术是解决这一难题的途径之一。本研究拟以诱导分化后的尿源性干细胞(USCs)为种子细胞,经5%过氧乙酸(PAA)氧化脱细胞处理的小肠粘膜下层脱细胞基质(SIS)为支架,于体外构建成组织工程尿道,为后续长段尿道损伤的动物实验研究提供尿道修复材料。方法：通过无菌导尿术收集6只健康成年雄性新西兰大白兔(体重2.0～2.5kg之间)尿液。采用离心分离法分离尿源性干细胞,于体外诱导其向尿路上皮细胞和平滑肌细胞方向分化；取健康猪小肠,物理方法获取小肠粘膜下层,系统比较经不同浓度过氧乙酸(PAA)氧化脱细胞处理的SIS的体外机械性能、残余DNA量、残余生长因子含量、电镜检测、切片染色及细胞粘附性等结果,确定SIS的最佳制备方法；于体外将诱导分化的上皮细胞和平滑肌细胞作为种子细胞种以“分层共培养”的方式在动态的环境下种植于SIS上,通过组织切片染色等相关组织学检查检测细胞于SIS上的复合效果。结果：经5%PAA氧化脱细胞处理的SIS脱细胞彻底,组织间孔隙多,内部疏松,更有利于种子细胞粘附、渗透、增殖和分化,可作为组织工程尿道的支架材料；与静态培养环境相比,动态培养环境加强了细胞在SIS的渗透作用,“分层共培养”使细胞能够形成多层的生长状态,以此方式构建的组织工程尿道,使尿源性干细胞诱导分化的尿路上皮细胞、平滑肌细胞能以类似尿道组织细胞分布层次的形式种植进SIS内,所构建的组织工程尿道与真实尿道结构更加相似。结论：采用经5%PAA氧化脱细胞处理的SIS作为支架材料,USCs为种子细胞,以“分层共培养”+动态培养的方式所构建的组织工程尿道,可作为尿道修复或重建的一种新型尿道替代材料。(本文来源于《广州中医药大学》期刊2016-04-01）
猪小肠粘膜下层论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:肌腱损伤通常伴有腱鞘损伤,以前的观点认为肌腱损伤修复过程中切除腱鞘有助于预防粘连,近些年逐渐认识到保持完整的腱鞘对预防肌腱粘连有积极地作用。本课题拟采用双层sis膜替代腱鞘,研究其自身的特性及对肌腱粘连的防止作用,分析滑膜细胞的分布,为防止肌腱粘连提供新的选择及理论依据。方法:通过物理、化学方法制备sis膜及浸提液,检测观察sis膜的排异性、生物特性等,对比各种方法将sis植入鸡体内对鸡的局部、脏器及全身的影响;选择体重在2-3kg的健康雄性莱亨鸡75只,随机分成3组,每组25只,A组为腱鞘缺损原位缝合组,B组为腱鞘缺损SIS替代组,C组为腱鞘缺损组。构建鸡腱鞘缺损模型,切除II区以A2滑车为中心的腱鞘1厘米,不切断屈肌腱。A组将切开的腱鞘用6/0缝线原位缝合,B组腱鞘缺损区用双层SIS覆盖肌腱,用6/0缝线将其缝合于缺损处,C组切除腱鞘后缺损不予修复。术后抗生素预防治疗。术后4周,ABC叁组均行关节活动度测定(Total activity measurement,TAM),肌腱滑移距离(Tendon sliding distance,TSD)测定,HE染色组织学观察进行NysKa粘连度评分,腱鞘滑膜细胞免疫组织化学染色观察,分析滑膜细胞计数、分布,分析sis滑膜化的程度,所得数据用spssl5.0统计软件进行方差分析。评价sis防治粘连的效果及sis滑膜化的程度。结果:检测sis膜的特性显示所有鸡注射后体温升高均低于1.2℃以内,而且注射前后体温波动幅度均小于1.6℃;鸡注射浸提液后1、6、12、24小时,实验侧及对照侧均未发现有白斑,水肿或坏死出现。阳性对照侧注射20%酒精后6小时可见白斑,中心部分明显水肿,12小时后白斑颜色逐渐变灰,24小时后中心部分坏死结痂。实验动物均成活,术后活动正常,饮食正常。所有手术伤口一期愈合,无感染、积液、瘘道产生,无植入材料排出现象。SIS标本植入1周时被肌肉组织疏松包绕,SIS周围见中性粒细胞、淋巴细胞、巨噬细胞;3周仍见炎性细胞浸润,较多的巨噬细胞,SIS中间有血管形成。6周炎性细胞基本消失,SIS间有大量血管形成,SIS开始部分降解吸收。9周时SIS几乎完全降解吸收。始终未见肌肉组织变性、坏死或植入物被排斥。全身毒性试验组鸡观察期内均表现饮食正常,活动自如,无呼吸困难、反应迟钝等症状。7天后鸡的体重都有增加。解剖观察无腹水、腹腔内容物无粘连,心、肝、脾、肾未见异常。细胞毒性试验证明随着培养时间的延长,未见抑制细胞生长现象,每组细胞数量均增加,但组间细胞数量没有显着性差异。在鸡腱鞘修复模型中,对比sis膜和对照组,各组切口愈合良好。术后4周,TAM测定:A组 147.2880±6.9274,B组 140.0400±6.6562,C组 106.1760±12.4643。经统计学分析,A、B两组与C组比较差异有统计学意义(P<0.05);B组与A组比较差异无统计学意义(P>0.05)。TSD测定:A组 1.2000±0.0764,B组 1.1600±0.0707,C组0.9080±0.1222。经统计学分析,A、B两组与C组比较差异有统计学意义(P<0.05)。B组与A组比较差异无统计学意义(P>0.05)。HE染色所见:A、B两组可见肌腱与腱鞘之间有明显的空隙,A组腱鞘壁层和脏层滑膜表面完整连续光滑;B组新生腱鞘脏层滑膜完整连续光滑,壁层滑膜虽然生成尚好但不连续;C组,肌腱与周围组织间分界不清并有明显纤维组织长入。NysKa氏法粘连度评分:A组0.9600+0.3512,B组 1.2000+0.4083,C组2.0800+0.5716。经统计学分析,A、B组与C组比较差异有统计学意义(P<0.05);A组与B组比较差异无统计学意义(P>0.05)。免疫组织化学所见:A、B组,可见大量滑膜细胞,排列致密,分布均匀,B组较A组滑膜细胞数量略少;C组,滑膜细胞数量少、稀疏,分布不均。滑膜细胞计数:A 组 127.5539±29.3512,B组 122.3215±23.3605,C 组60.3522±21.3031。经统计学分析,A、B组与C组比较差异有统计学意义(P<0.05);A组与B组比较差异无统计学意义(P>0.05)。双层sis膜替代腱鞘的试验表明其可以明显促进滑膜细胞增殖分布,减轻肌腱粘连。结论:Sis膜植入鸡体内检测证明其具备无毒性、无免疫原性、局部无排斥反应。而双层sis膜模仿腱鞘结构,为滑膜细胞爬移替代奠定了良好的基础,既达到了隔离作用,又发挥了滑膜的润滑作用。SIS修复缺损的腱鞘能有效防止肌腱粘连,缺损的腱鞘未行修复会导致明显肌腱粘连。双层sis膜制备迅速简便,不但有助于了解腱鞘预防粘连的机制,同时也为处理肌腱粘连这一临床难题提供了新的选择,具有很好的开发潜力。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
猪小肠粘膜下层论文参考文献
[1].张迟.小肠粘膜下层（SIS）生物支架的构建及骨修复机制的研究[D].宁波大学.2018
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[5].范忠伟.低氧预培养脂肪间充质干细胞复合小肠粘膜下层构建组织工程肌腱修复大鼠跟腱缺损的实验研究[D].西南医科大学.2017
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[7].宋洋.应用猪小肠粘膜下层预防内镜粘膜下剥离术后食管狭窄的动物研究[D].首都医科大学.2017
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[10].庄桂武.兔尿源性干细胞复合小肠粘膜下层脱细胞基质构建组织工程尿道的研究[D].广州中医药大学.2016