杨青[1]2003年在《小鼠早期胚胎发育过程中一氧化氮自由基生成变化的研究》文中研究说明一氧化氮(nitric oxide，NO)是一种具有自由基性质的生物活性分子，作为一种信号分子，NO在机体防御、神经信号传导、血管扩张等生理过程中发挥着重要的作用。近年来有许多研究表明NO在体内外早期胚胎发育中具有重要的调节作用。 本研究利用小白鼠做实验模型，用Griess试剂法间接检测了早期胚胎发育过程中NO的生成变化，实验结果发现：(1)在未受精卵和早期胚胎培养液都检测到有NO的产生，正常条件下未受精卵和妊娠第1天胚胎培养液中NO的产生差异不显着(P＞0.05)；妊娠第2天至第3天的胚胎中，NO的生成量随胚胎的发育而逐渐增高，妊娠第3天达到高峰，妊娠第4天胚胎NO生成量下降；(2)皮下注射维生素E后，胚胎中NO产生的趋势与正常条件下基本一致，而与正常条件相同发育时期胚胎相比，维生素E处理的胚胎NO的产生有降低趋势，但未受精卵培养液中与正常条件下的相比差异不显着(P＞0.05)，并发现维生素E处理后，正常发育的胚胎数目减少；(3)在低氧条件，胚胎培养液中NO的含量比高氧条件下要高(P＜0.05)，而且在第3天达最大值。胚胎发育过程中NO自由基的生成与氧浓度具强的负相关性(P＜0.01)；(4)在培养4小时后，L-精氨酸和N~ω-硝基-L-精氨酸对早期胚胎中NO的产生无明显影响(P＞0.05)；(5)而通过L-精氨酸(L-A)和N~ω-硝基-L-精氨酸(L-NA)对胚胎发育的影响发现，L-A有利于胚胎的发育，而L-NA对胚胎发育有阻碍作用。 本研究首次用ESR法检测到了早期胚胎中产生的NO自由基信号。以上结果表明NO参与早期胚胎的正常发育。
刘斌[2]2002年在《小鼠早期胚胎发育过程中活性自由基生成机制初探》文中指出动物体内活性自由基参与很多生理和病理过程，正常情况下，体内自由基的生成和清除是处于动态平衡的。本研究利用经超数排卵处理后从母鼠生殖道中获得的未受精卵及早期胚胎，用Griess试剂法检测其产生的NO浓度，用自旋捕捉ESR法检测其活性氧自由基生成的情况，以及用氧电极法检测其消耗氧气的情况，主要结果如下： 1．胚胎发育过程中NO的生成 胚胎在Hanks液中培养4小时后，取培养液加入等体积的Griess试剂，用分光光度法检测培养液中亚硝酸盐的浓度，依此得知NO的生成。发育第1天胚胎与未受精卵的NO生成差异不显着(P＞0.05)，而发育第2、3、4天胚胎的NO生成显着上升(P＜0.01)，第3天胚胎的NO生成最高，并于第4天下降(P＜0.05)。这表明N0参与了小鼠的早期胚胎发育。补充维生素E后，未受精卵及第2天胚胎NO的生成显着下降(P＜0.01)，而第1、3、4天胚胎的NO生成变化不显着(P＞0.05)。 2．胚胎发育过程中羟基自由基的生成 用DEPMPO捕捉活性氧自由基，其加合物的信号强度比用DMPO强，而且加合物寿命更长。因此，本研究选择DEPMPO作为捕捉剂，以捕捉胚胎发育过程中产生的氧自由基。首次用DEPMPO在小鼠早期胚胎牛捕捉到了羟基自由基。未受精卵的羟基自由基的水平很低，而胚胎的羟基自由基水平均高于未受精卵。随着胚胎的发育，其水平开始有上升的趋势，8－细胞期胚胎的羟基自由基的水平最高，其后又有下降的趋势。 3．胚胎发育过程中氧消耗的测定 用氧电极法测定胚胎培养液中氧气的浓度。未受精卵耗氧极低，而胚胎培养液中氧的浓度直线下降(P＜0.0001)，而且随着胚胎的发育耗氧率有上升的趋势。发育过程中羟基自由基生成与耗氧率之间有一定的线性相关性(P＜0.25)。 4．胚胎发育过程中NO与羟基自由基之间的相关性 胚胎发育过程NO与羟基自由基生成具有线性相关性(P＜0.025)。 总之，在本实验条件下，小鼠早期胚胎耗氧增加，胚胎发育过程中有NO和羟基自由基的生成，NO与羟基自由基具有线性相关性，胚胎耗氧率与羟基自由基也有一定的线性相关性。
张璐[3]2005年在《小鼠早期胚胎中nNOS、iNOS 和 eNOS mRNA的表达》文中指出一氧化氮(nitric oxide,NO)是一种具有自由基性质的生物活性分子,作为一种信号分子,NO在机体防御、神经信号传导、血管扩张等生理过程中发挥着重要的作用。生物体内的一氧化氮由一氧化氮合酶(NOS)催化L-精氨酸脱胍基产生L-胍氨酸而成,现已确认的一氧化氮合酶有3种亚型,分别是神经元型NOS(nNOS)、内皮型NOS(eNOS)和诱导型NOS(iNOS)。NOS是一氧化氮生成过成中的限速酶,因此某一组织中NOS的量能线性反应出该组织中NO的量。 NO作为一种多功能的分子,在许多生理系统的信号传递中起重要作用,近年来有许多研究表明NO在体内外早期胚胎发育中具有重要的调节作用。动物早期胚胎的发育是个体发育的重要阶段,其发育过程受体内许多因素的调节和影响。人们已从多个方面对早期胚胎发育过程作了大量的研究,然而对NO在早期胚胎中可能产生的生理调节作用了解较少。为了探讨NO对小鼠早期胚胎发育的影响,深入研究早期胚胎发育机制,揭示其发育过程的调节规律,本研究采用反转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase RT-PCR)方法检测了附植前各发育时期胚胎中nNOS、iNOS和eNOS的mRNA的表达情况。结果表明:1-细胞胚胎到早期囊胚均有nNOS和eNOS mRNA的表达,1-细胞期到桑椹胚的相对表达量有上升趋势,到早期囊胚又有所下降,经t检验各期胚胎nNOS和eNOSmRNA的相对表达量差异不显着(P>0.05)。除了早期囊胚,其它各期的早期胚胎均有iNOS mRNA的表达,且相对表达量有所增加,到桑椹胚时相对表达量最大,经t检验,1-细胞胚胎到8-细胞胚胎的iNOS mRNA的相对表达量差异不显着(P>0.05),而桑椹胚和其它各期胚胎的iNOS mRNA的相对表达量差异显着(P<0.05)。 结果表明,小鼠早期胚胎的发育至少需要两种NOS的参与,NO在小鼠早期胚胎的正常发育过程中起着重要的调节作用,并可能与附植前胚胎的信号传递及早期分化有关。
孙玉成[4]2006年在《叁种中药有效成分对小鼠2-细胞胚胎体外培养抗氧化作用及冷冻胚胎移植效果研究》文中进行了进一步梳理本研究主要探讨mCZB分别添加黄芩苷(Baicalin,Bai)、川芎嗪(Ligustrazine,Lig)、小檗碱(Berberine,BR)对小鼠2-细胞胚胎体外发育抗氧化作用的影响,并比较各组胚胎冷冻解冻效果及冷冻胚胎移植妊娠率和产仔率等,以进一步探讨利用叁种中药有效成分改善小鼠早期胚胎体外培养微环境、提高体外培养胚胎质量和移植胚胎的发育潜力,为更好地改进哺乳动物胚胎培养液成分和培养条件提供可借鉴的资料和途径。试验一:以mCZB添加抗生素为对照组,分别添加4μg/mlBai、0.5μg/mlLig和0.1μg/mlBR为试验组,比较各组胚胎孵化率、微滴中一氧化氮(Nitric oxide,NO)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量及孵化胚胎的细胞数量。结果:各试验组胚胎孵化率,Bai组(80.2%,81.3%)、Lig组(78.9%,77.6%)及BR组(76.7%,71.6%)极显着高于对照组(50.7%,47.8%)(P<0.01)。各组间NO含量,72 h较24 h均有减少,而120 h又均有增加且最高。各组间MDA含量,72 h和120 h与24 h比较呈现增加趋势,除120hBai组,对照组均高于试验组。孵化胚胎细胞计数结果显示,BR组、Lig组和Bai组(87.2±8.6,83.9±7.7,81.9±6.2)与对照组(77.4±5.6)差异极显着(P<0.01)。表明,叁种中药有效成分均能显着促进小鼠早期胚胎体外发育及胚胎细胞增殖,并对NO和MDA含量有一定影响。试验二:以试验一为基础,2-细胞胚胎体外培养至桑椹、囊胚期进行常规冷冻,比较各组胚胎冷冻解冻效果及两种程序对胚胎冷冻解冻的影响。结果:冷冻解冻桑椹胚体外培养8～14 h囊胚发育率,程序一中Bai组(65.8%)显着高于对照组(48.6%)和BR组(46.7%)(P<0.05),Lig组(81.1%)极显着高于对照组(48.6%)和BR组(46.7%)(P<0.01);程序二中Bai组(80.6%)、Lig组(78.3%)极显着高于对照组(55.2%)和BR组(47.6%)(P<0.01)。冷冻解冻囊胚体外培养6～8 h囊胚发育率,程序一中各组间无显着差异(P>0.05);程序二中,中药有效成分各组间差异不显着(P>0.05),但均显着高于对照组(61.2%)(P<0.05)。两种冷冻程序冷冻效果差异不显着(P>0.05)。表明,添加Bai、Lig对提高胚胎体外发育质量效果明显,显着提高了冷冻胚胎发育率。试验叁:以试验二为基础,将各组冷冻解冻胚胎培养发育至囊胚期进行子宫移植。结果:移植妊娠率以Bai组(56.3%)、Lig组(52.6%)和BR组(55.0%)均高于对照组(46.2%);产仔率以Bai组(63.3%)、Lig组(67.3%)和BR组(60.5%),均高于对照组(52.8%),但差异不显着(P>0.05)。综上结果表明:叁种中药有效成份Bai、Lig、BR能显着提高小鼠2-细胞胚胎体外发育质量,并有利于提高冷冻解冻后移植胚胎的发育潜力。
杨青, 薛立群, 刘斌, 刘扬, 袁安文[5]2003年在《维生素E对附植前小鼠胚胎发育与一氧化氮生成的影响》文中研究表明为了探讨维生素E对一氧化氮(NO)的产生及其对早期胚胎发育的影响,用Griess试剂法检测了附植前小鼠胚胎中一氧化氮的生成情况.结果表明,附植前胚胎中有NO的产生,且从第1天到第3天有逐渐上升的趋势,第4天有所下降.用抗氧化剂维生素E处理后,NO的生成量下降,表明在附植前小鼠胚胎发育中维生素E对NO的产生可能起到一定的抑制作用.
杨志蓉[6]2007年在《肉苁蓉对猪体外培养胚胎早期发育影响效果的研究及其机理初步探讨》文中研究说明为探讨肉苁蓉在对猪胚胎体外生长发育的影响效果,本研究以猪胚胎为实验材料,设计叁个试验:肉苁蓉水提液对猪胚胎早期发育体外培养效果的的筛选试验;在不同时期添加肉苁蓉水提液对猪胚胎早期体外发育的影响;肉苁蓉水提液对猪早期体外发育胚胎中NO浓度含量的影响。以期为提高体外培养胚胎发育率和扩大中医药的应用范围开拓一条新的途径。试验一:以NCSU-23+0.4%BSA基础液为对照组,添加不同浓度肉苁蓉水提液为试验组,初步筛选出四个浓度后再进一步筛选出最佳浓度。试验结果:肉苁蓉水提液的最佳浓度为50μg/ml,其卵裂率和囊胚率分别为85.12±2.9%和31±3.0%,显着高于对照组的76.73±3.2%、24.89±4.3%(P<0.05),试验各组之间无显着性差异。结果表明:在基础培养液中添加肉苁蓉水提液能有效促进胚胎体外生长发育。试验二:胚胎在不同发育时期所需营养物质不同,为了能明确在胚胎发育的哪个时期加入肉苁蓉水提液效果更好,本试验在胚胎发育的叁个时期加入肉苁蓉,比较其在何时期加入效果更好。试验结果:在胚胎培养的2-4cell期添加肉苁蓉水提液,其囊胚率达到48.72±6.6%,高于对照组囊胚率25.08±5.4%,两者之间有极显着差异(P<0.01)。而且,也比在体外成熟阶段(IVM)和胚胎培养(IVC)阶段加入的效果要好,二者之间差异显着(P<0.05)。结果表明:在胚胎培养的2-4cell期添加肉苁蓉能更有效的促进胚胎体外发育的能力。试验叁:本试验基于对NO前期研究的基础上,对培养到囊胚阶段的胚胎中NO含量进行了测定,观察添加中药是否对胚胎NO含量产生影响。试验结果:经过体外培养到囊胚阶段,胚胎细胞中NO含量均较高,对照组和试验组分别为26.33±1.90和20.30±0.95。但添加肉苁蓉水提液后其胚胎细胞中NO含量明显降低,与对照组有显着性差异(P<0.05)。结果表明:肉苁蓉的水提液在一定程度上清除了胚胎在体外培养过程中所产生的自由基,优化了NO在细胞信号通路中的双相调节作用,从而减少了NO的生成,提高了胚胎体外发育率。以上结果说明:肉苁蓉水提液对猪胚胎体外生长发育的影响效果显着。
张璐[7]2005年在《一氧化氮对小鼠胚胎发育的影响研究进展》文中提出一氧化氮(nitricoxide,NO)发挥信号传递作用的发现为研究机体细胞功能开辟了一个崭新的领域。动物胚胎的发育是个体发育的重要阶段,其发育过程受到体内各种因素的调节和影响,近几年人们对胚胎发育过程中NO的作用进行了许多的研究,明确了NO对小鼠胚胎发育的作用及其检测方法。
孙玉成, 高建明, 于同泉, 陈武, 杨柳[8]2006年在《3种中药有效成分对小鼠胚胎体外发育的影响》文中研究指明以mCZB添加抗生素为对照组,以分别添加0.1 mg/L小檗碱(berberine,BR)、0.5 mg/L川芎嗪(ligustrazine,Lig)和4 mg/L黄芩苷(baicalin,Bai)为试验组,比较各组胚胎孵化率、微滴中一氧化氮(Nitric oxide,NO)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量及孵化胚胎的细胞数量,从而探讨中药有效成分对小鼠早期胚胎体外发育的影响。结果显示,Bai组(80.2%,81.3%)、Lig组(78.9%,77.6%)及BR组(76.7%,71.6%)胚胎孵化率极显着高于对照组(50.7%、47.8%)(P<0.01)。各组间NO含量,72 h较24 h均有减少,而120 h又均有增加且最高。各组间MDA含量,72 h和120 h与24 h比较呈现增加趋势,除Bai组120 h外,对照组均高于试验组。孵化胚胎细胞计数结果显示,BR组(87.2±8.6)、Lig组(83.9±7.7)和Bai组(81.9±6.2)与对照组(77.4±5.6)差异极显着(P<0.01)。结果表明:3种中药有效成分均能促进小鼠早期胚胎的体外发育及胚胎细胞增殖,并对NO和MDA含量有一定影响。
陈远华[9]2007年在《妊娠晚期接触细菌脂多糖对胎儿宫内生长发育和骨骼发育的影响》文中研究指明细菌脂多糖(lipopolysaccharide, LPS),又称细菌内毒素(endotoxin, ET),是革兰氏阴性细菌细胞壁结构中的类脂多糖,广泛存在人和动物的消化道内。在肠道感染、饮酒等应激状态下,肠粘膜通透性增加,肠道LPS进入血液循环,引起血液LPS浓度迅速升高。动物实验研究已证实,妊娠早期接触LPS可产生显着的胚胎毒性,主要表现为胚胎吸收、流产和早产,但其作用机制目前尚不清楚。本课题在建立小鼠妊娠晚期接触低剂量LPS引起宫内胎儿死亡(IUFD)、生长发育迟缓(IUGR)和骨骼发育迟缓的动物模型基础上,进一步研究了活性氧(ROS)、一氧化氮(NO)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)在LPS引起IUFD、IUGR和骨骼发育迟缓中的作用,并深入探讨了抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)、抗坏血酸(AA)和褪黑素(MT)对LPS引起IUFD、IUGR和骨骼发育迟缓的影响。1. LPS诱发IUFD、IUGR和骨骼发育迟缓为研究LPS诱发IUFD、IUGR和骨骼发育迟缓的作用,LPS各剂量组孕鼠于妊娠第15-17天每天经腹腔注射一定剂量的LPS(25~75μg/kg, ip),对照组经腹腔注射等容量的生理盐水。妊娠第18天处死所有孕鼠,统计活胎、死胎和吸收胎数,称量活胎体重,测量胎鼠身长和尾长,并对胎鼠骨骼发育情况进行评价。结果显示:LPS各剂量组平均每窝死胎数显着高于对照组,并呈明显的剂量-效应关系。进一步观察发现,妊娠晚期接触LPS显着降低活胎平均体重、身长和尾长,并延缓胎鼠枕骨、胸骨、尾椎骨、前指骨和后掌(趾)骨骨化。上述研究结果表明:母鼠妊娠晚期接触低剂量LPS引起IUFD、IUGR和骨骼发育迟缓。2. TNF-α在LPS引起IUFD、IUGR和骨骼发育迟缓中的作用为探讨TNF-α在LPS引起IUFD、IUGR和骨骼发育迟缓中的作用,LPS处理组孕鼠于妊娠晚期经腹腔注射LPS(75μg/kg, ip);LPS+PTX处理组孕鼠于注射LPS前0.5 h给予TNF-α的合成抑制剂己酮可可碱(PTX, 100 mg/kg, ip),对照组经腹腔注射等容量的生理盐水或PTX。部分孕鼠给药第1天处死,测母肝、胎肝和胎盘的TNF-αmRNA及羊水和母血清TNF-α水平等。部分孕鼠边续给药3天,于妊娠第18天处死,记录活胎、死胎和吸收胎数,称活胎体重,测量胎鼠身长和尾长,并评价胎鼠骨骼发育情况。结果显示:LPS显着诱导母肝和胎盘组织TNF-αmRNA表达,增加母鼠血清和羊水TNF-α浓度;PTX预处理显着抑制TNF-α产生。进一步研究发现:单纯LPS处理组平均每窝死胎数显着高于对照组,PTX预处理预防LPS引起的IUFD;单纯LPS处理显着降低活胎体重、身长、尾长,延缓胎鼠枕骨、胸骨、尾椎骨、前指骨和后掌(趾)骨骨化,PTX预处理明显减轻LPS引起的生长发育和骨骼发育迟缓。这些研究结果提示:TNF-α至少部分参与LPS引起IUFD、IUGR和骨骼发育迟缓。3. ROS和NO在LPS引起IUFD、IUGR和骨骼发育迟缓中的作用为探讨ROS和NO在LPS引起IUFD、IUGR和骨骼发育迟缓中的作用,LPS处理组孕鼠于妊娠第15-17天每天注射LPS(75μg/kg, ip),LPS+PBN处理组孕鼠于注射LPS(75μg/kg, ip)前0.5 h和后3 h分别给予一定剂量的2-苯叔丁基硝酮(PBN, 100+50 mg/kg, ip);LPS+AG处理组孕鼠于注射LPS(75μg/kg, ip)前0.5 h和后3 h分别给予一定剂量的氨基胍(AG, 50+25 mg/kg, ip);对照组给予等容量的生理盐水或AG。部分孕鼠给药第1天处死,测母肝、胎肝和胎盘的MDA等。部分孕鼠边续给药3天,于妊娠第18天处死,记录活胎、死胎和吸收胎数,称量活胎体重,测量胎鼠身长和尾长,并对胎鼠骨骼发育情况进行评价。结果显示:AG处理对LPS引起IUFD、IUGR和骨骼发育迟缓几无影响,而PBN处理组平均每窝死胎数明显低于单纯LPS处理组,PBN处理显着减弱LPS降低胎鼠体重、身长和尾长,并显着抑制LPS引起枕骨、胸骨、尾椎骨、前指骨和后掌(趾)骨骨化不全。进一步研究发现,单纯LPS处理组与对照组比较,母鼠血清和羊水中NO水平无显着性差异(资料未列出);PBN显着对抗LPS引起的氧化应激,主要表现为:母肝、胎肝和胎盘组织MDA水平下降且GSH含量上升。这些研究结果提示:ROS在LPS引起IUFD、IUGR和骨骼发育迟缓中可能发挥重要作用,NO在LPS引起IUFD、IUGR和骨骼发育迟缓中的作用不明显。4. NAC、AA和MT对LPS引起IUFD、IUGR和骨骼发育迟缓的影响NAC、AA和MT是重要的抗氧化剂,为探讨NAC、AA和MT对LPS引起IUFD、IUGR和骨骼发育迟缓的影响,孕鼠被分成两个实验组:实验1,LPS处理组孕鼠于妊娠第15-17天每天经腹腔注射LPS(75μg/kg, ip);LPS+NAC组在LPS处理前和/或处理后经腹腔注射NAC;LPS+AA组在LPS处理前和/或处理后经腹腔注射AA;LPS+MT组在LPS处理前和/或处理后经腹腔注射MT,对照组给予等容量的生理盐水或NAC、AA和MT。所有孕鼠于妊娠第18天处死,统计活胎、死胎和吸收胎数,称量活胎体重,测量活胎身长和尾长,并评价胎鼠骨骼发育情况。实验2,LPS处理组孕鼠于妊娠第15天经腹腔注射单剂量的LPS(75μg/kg),LPS+NAC、LPS+AA和LPS+MT组孕鼠于LPS处理前和/或处理后经腹腔分别注射注射NAC、AA和MT,对照组给予等容量的生理盐水或NAC、AA和MT。孕鼠于LPS处理后1.5 h或6 h处死,检测母肝、胎肝和胎盘组织丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)水平,并测LPS+NAC组羊水和血清TNF-α含量。结果显示:LPS+NAC预处理组、LPS+AA预处理组、LPS+MT预+后处理组和后处理组宫内胎儿死亡数显着低于单纯LPS处理组;LPS+NAC后处理、LPS+AA后和预+后处理组平均每窝死胎数与单纯LPS组比较差异无显着性意义。此外,LPS+NAC预处理和后处理、LPS+AA各处理和LPS+MT各处理组均显着抑制LPS引起IUGR和骨骼发育迟缓。进一步研究发现:NAC预处理显着抑制LPS引起母肝、胎肝和胎盘组织脂质过氧化,NAC后处理显着抑制LPS引起母肝组织脂质过氧化,但对LPS引起的胎肝和胎盘组织脂质过氧化无明显抑制作用;NAC预处理显着抑制LPS引起血清和羊水TNF-α水平上升,而NAC后处理对LPS引起血清TNF-α水平上升无明显影响。AA预和后处理均显着抑制LPS引起母肝、胎肝和胎盘组织脂质过氧化,但AA预处理的作用强于后处理。MT预+后处理显着抑制LPS引起母肝和胎盘组织脂质过氧化,MT后处理显着抑制LPS引起胎盘组织脂质过氧化;但MT预+后处理和后处理对LPS降低母肝组织GSH含量均无明显影响。上述研究结果提示:NAC预处理预防LPS引起IUFD、IUGR和骨骼发育迟缓,NAC后处理对LPS引起IUFD无明显影响,且加重LPS引起早产;AA预处理通过抑制LPS引起的氧化应激,预防LPS引起IUFD、IUGR和骨骼发育迟缓,AA后和预+后处理对抗LPS引起IUGR和骨骼发育迟缓,但对LPS引起IUFD无保护作用;MT通过抑制LPS引起氧化应激,对抗LPS引起IUFD、IUGR和骨骼发育迟缓。根据上述研究结果,本课题可得出如下结论:(1)母鼠妊娠晚期接触LPS引起IUFD、IUGR和骨骼发育迟缓;(2)TNF-α部分参与了LPS引起IUFD、IUGR和骨骼发育迟缓;(3)ROS在LPS引起IUFD、IUGR和骨骼发育迟缓中发挥重要作用;NO在LPS引起IUFD、IUGR和骨骼发育迟缓中的作用不明显;(4)NAC预处理预防LPS引起IUFD、IUGR和骨骼发育迟缓,NAC后处理对LPS引起IUFD无明显影响,且加重LPS引起早产;AA预处理预防LPS引起IUFD、IUGR和骨骼发育迟缓,AA后和预+后处理对抗LPS引起IUGR和骨骼发育迟缓,但对LPS引起IUFD无保护作用;MT对LPS引起IUFD、IUGR和骨骼发育迟缓具有明显保护作用。
陶勇[10]2004年在《一氧化氮与猪卵母细胞减数分裂成熟》文中提出一氧化氮(nitric oxide, NO)是一种气体自由基，广泛存在于各组织器官的各种细胞中，是重要的信使物质。它在循环系统、神经系统、消化系统、呼吸系统和免疫系统等多种病理生理过程中发挥重要的调节作用，在动物(包括人类)的饮食营养中受到重视。在生殖系统中，NO参与性行为的表现、类固醇激素的生成、精子发生、卵泡的发育和闭锁、卵母细胞的减数分裂成熟、受精、囊胚植入和胚胎发育等一系列生殖过程。NO对卵母细胞减数分裂成熟的研究主要集中于小鼠，在其他动物上报道不多，尤其是大家畜上研究较少，而且一些研究结果不一致。本论文以猪为对象，研究了NO在卵母细胞减数分裂中的作用及机理。 实验一研究了NO对猪卵母细胞成熟的影响，包括卵丘细胞包被的卵母细胞(cumulus-enclosed oocytes, CEOs)和脱除卵丘的卵母细胞(denuded oocytes, DOs)。用不同浓度的NO供体硝普钠(sodium nitroprusside, SNP)(0mM、0.1 mM、1 mM和10mM)处理CEOs和DOs，培养结束后，检测卵丘细胞扩展、DNA片段化和卵母细胞减数分裂成熟情况。结果发现，SNP可剂量依赖性地抑制卵丘细胞的扩展和DNA片段化，同时抑制CEOs中卵母细胞的减数分裂恢复，抑制MⅠ向MⅡ期转变。SNP对DOs减数分裂恢复基本没有影响。结果表明，高浓度的NO能通过调节卵丘细胞的功能活动抑制猪卵母细胞的减数分裂恢复，尤其是抑制MⅠ期到MⅡ期的发育过渡。 实验二研究了NO对卵母细胞减数分裂成熟的作用与其培养环境的关系。将CEOs培养于SNP、促性腺激素(FSH和hCG)或/和β-巯基乙醇(β-ME)环境中。结果发现，在自发成熟模型中，SNP能促进卵丘扩展，该作用能被β-ME逆转；SNP不影响CEOs的减数分裂恢复，但可抑制其发育到MⅡ；在生理成熟模型(次黄嘌吟培养基)中，SNP和β-ME都不影响卵丘扩展，但抑制促性腺激素诱导的卵丘扩展。SNP还抑制促性腺激素诱导的减数分裂恢复，尤其是抑制CEOs发育到MⅡ期，而β-ME能逆转SNP的这种作用。在两种培养模型中，β-ME均可促进促性腺激素诱导的减数分裂恢复，促进CEOs发育到MⅡ。实验结果还发现，HX能增加猪卵母细胞透明带的脆性，而促性腺激素、SNP或β-ME均可减弱这种作用。本实验表明，NO在不同的猪卵母细胞成熟模型中作用也不相同，这种作用受自由基清除剂β-ME的影响。 实验叁研究了维生素C和E(Vc，Ve)在卵母细胞减数分裂成熟过程中的抗自由基作用。将CEOs和DOs分别培养于不同浓度的Ve(0μM，10μM，100μM和200μM)和Vc(0μM，50μM，250μM和750μM)中，发现两者都不影响卵丘细胞的扩展，但都能抑制卵丘细胞的凋亡；α-生育酚或L-抗坏血酸可促进DOs恢复减数分裂，并进一步促进DOs发育到MⅡ期，但两种维生素都不影响CEOs减数分裂成熟。这些结果表明维生素C和E促进DOs恢复减数分裂和发育到MⅡ期，可以抑制卵丘细胞的凋亡，尤其是10μM的生育酚和250μM的抗坏血酸。 实验四研究了参与卵母细胞减数分裂成熟的NOS的类型。用不同的NOS抑制剂处理猪CEOs和DOs，即iNOS选择性抑制剂氨基胍(aminoguanidine, AG)和eNOS及iNOS的非选择性抑制剂左旋硝基精氨酸(Nco-nitro-L-arginine, L-NNA)和左旋硝基精氨酸甲基酯(Nto-nitro-L-arginine methyl ester, L-NAME)。发现AG能抑制卵丘扩展和CEOs的减数分裂恢复，但对卵丘细胞DNA的片段化没有显着影响。L-NAME或L-NNA则同时抑制卵丘扩展，卵丘细胞DNA片段化和CEOs减数分裂成熟，但对DOs的作用不显着。结果表明，iNOS产生的NO对于卵丘扩展和卵母细胞减数分裂成熟是必需的，eNOS和iNOS产生的NO均参与了卵母细胞减数分裂成熟，这些作用可能是通过介导卵丘细胞的功能活动实现的。 实验五研究了不同类型NOS在不同发育阶段的卵泡(包括卵母细胞)中的免疫组织化学定位。实验五分叁个部分，第一部分是培养腔前卵泡(250一300林m)，在培养基中分别加入0 mM (对照组)，0.1 mM，0.3，nM，0.5 mM不1.1，nM sNP，培养4d后观察卵泡的成腔情况。结果发现，0.1 mM SNP对成腔率没有显着影响(P>0.05)，而0.3 mM，0.5 mM或l一nM SNP则可显着抑制成腔率(尸<0.05)。第二是培养CEOs时分别加入0.1 mM SNP和NOS抑制氨基肌(aminoguanidine biearbonate salt，AG，1 0 mM)不11左旋硝基精氨酸甲基酷(N。一nitro一L一a唱ininemethy!ester，L一NAME，1 mM)，培养44h后观察卵母细胞减数分裂成熟情祝。结果发现，^G显着抑制卵母细胞的减数分裂恢复，而L一NAME则可抑制第一极体(first Polar body，PBI)的排出。第叁，利用免疫组织化学的方法研究两种NOS在卵巢上小(直径1~Zm!n)、中(3一6 mm)、大(7一lomm)卵泡包裹的卵母细胞、卵泡以及黄体(eo甲usluteum，CL)不11一勺体(eo甲usalbiean，CA)中的特异性表达部位。结果发现，eNOS在腔前卵泡中有表达，但免疫阳性染色仅限于卵母细胞和膜细胞层，这种eNOS表达从小、中到人卵泡包裹的卵母细胞逐渐增强，并且大卵泡中的卵丘细胞也开始表达eNOS，而此前的卵丘细胞井不表达eNOS。在黄体的周围，部分粒性黄体细胞呈现eNOS免疫阳性染色，而在白体中，eNOS阳性染色见于部分实质内。在原始卵泡和早期有腔卵泡「}一
参考文献：
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