田葆萍[1]2003年在《中药材及其制剂中马兜铃酸的药代动力学研究》文中研究指明第一部分 血浆中马兜铃酸的HPLC法建立及关木通中马兜铃酸的药代动力学研究2000年5月16日美国食品和药品管理局（FDA）公布了“FDA对产业界的有关含有马兜铃酸植物药物和食品的通告（Letter to Industry-FDA Concerned About Botanical Products，Including Dietary Supplement，Containing Aristolochic Acid）” 和2000年5月31日公布了“FDA对卫生行业的有关含有马兜铃酸植物药物和食品的通告（Letter to Health Care Professionals-FDA Concerned About Botanical Products，Including Dietary Supplement，Containing Aristolochic Acid）”，这两个通告规定停止进口、制造和销售已知含有马兜铃酸的中药材和“怀疑含有马兜铃酸的原料和成品”。按照上述规定，受禁药品涉及到含有马兜铃酸的中药材及制剂约有70多种。这使得本来就难以进入西方主流医学的中医药举步维艰，特别是我国进入WTO后，为中药现代化、国际化发展提出了非常紧迫和严肃的研究课题。马兜铃酸引起的“中草药肾病（Chinese Herb Nephropathy，CHN）”确实值得广大医务工作者重视，然而，中药复方制剂的研究较少，药味之间的配伍作用能否消除或减低有毒物质的毒性。因此，有必要研究马兜铃<WP=5>酸处于不同条件下的药代动力学规律，以便为我国尚未完全禁用的含马兜铃酸中药材及复方制剂提供合理的用药规律。目的：采用高效液相色谱法测定血浆中马兜铃酸的浓度，研究小鼠灌胃给予关木通提取液后体内马兜铃酸的药代动力学特点。方法：①关木通提取液的制备：将关木通制备成水煎液，浓缩。经HPLC外标法测定浓度，备用。②血浆样品的预处理：将所取血液分别置肝素化的试管中，离心10min（3000r · min-1）。取血浆0.2mL，加叁倍量甲醇沉淀蛋白，离心（10000r · min-1）20s，取上清液，滤膜过滤（0.45μm），直接进样20μL。③色谱条件的确定：选择检测波长，固定相和流动相的组成、比例、流速，使马兜铃酸色谱峰符合检测要求。④色谱系统适用性试验：调整色谱流动相使分离度、理论板数、对称因子符合要求。⑤方法学考察：分别进行日间和日内精密度试验、重现性、线性、稳定性、回收率试验。⑥药动学实验方案：小鼠随机分组，每组6只，按4mg · kg-1的剂量灌胃给予关木通提取液，在预定时间点（5、10、15、20、30、45、60、90、120、150、180、240min）眼眶取血。按“血浆样品预处理”项下处理样品。记录峰面积，按外标法计算血药浓度，采用3P97、NDST药动学软件进行自动拟合处理。以理论血药浓度值与实验测定值的相关系数最大和AIC最小作为判断标准，选择最佳房室模型。结果：①色谱条件：色谱柱为DiamonsilTMC18柱，250mm×4.6mm，5μm，流动相为甲醇-水-冰醋酸（72：<WP=6>27：1），流速为1.0mL· min-1，检测波长315nm，灵敏度0.5AUFS, 室温20℃。②色谱系统适用性试验：马兜铃酸色谱峰的理论塔板数大于3000，保留时间为16min左右，与相邻色谱峰的分离度均大于2.0，不对称因子为0.98～1.20。③方法学试验：马兜铃酸在0.1098~3.66μg · mL-1的浓度范围内线性关系良好（r=0.9998，n=7），最低检测浓度为0.0183μg · mL-1。马兜铃酸在高、中、低叁种浓度的回收率及相对标准偏差分别为99.34%（0.80%）、97.23%（1.13%）、97.14% (0.97%)，日内和日间精密度RSD值均小于4.9%。④小鼠给药后，药动学房室模型为一室模型，主要药动学参数T1/2（ka），T1/2（ke）, T(max), AUC, Cmax分别为：3.94min，16.29min，10.65min，104.88 (μg·mL-1)·min，2.84μg·mL-1。结论：本文建立了关木通药材中马兜铃酸血药浓度的HPLC测定方法，研究了关木通中马兜铃酸药代动力学特征。关键词：HPLC,关木通,马兜铃酸,血药浓度,药代动力学
郝福[2]2007年在《中药复方配伍的化学变化与复方中药的质量表征》文中提出中医药学是中华民族优秀传统文化的重要组成部分,是国之瑰宝,民生所依。复方是中医用药的主要形式,而复方的特色与核心是药物间的配伍,配伍使整个方剂达到整体综合调节的作用。中药复方配伍的化学成分不是单味药化学成分数及量上的简单相加,复方的效应也不是机械的毒、副作用的抵消,复方配伍使有效成分的质或量发生了变化,复方的药效是多种组分共同作用的结果。目前,已有多项内容或模式应用于中药复方配伍的研究,如中药复方物质基础的研究、中药复方药理学的研究、中药复方配伍规律的研究、中药复方药代动力学研究等内容或模式。其中,研究相对较多的主要集中在药理和临床疗效上,而对其化学物质基础、配伍机理、多指标的质量评价等内容研究相对薄弱。当前复方中药的质量标准往往仅对单一指标成分的含量进行限定,这很难全面地表征其质量。多指标成分的分离测定对于复方中药的质量控制具有重要意义,各指标成分含量及其比例不仅可以反映制剂工艺水平,而且可以表征和保证复方中药(及其制剂)的药效。本课题通过研究配伍前后龙胆泻肝汤、桂枝汤中指标成分在体内外的动态变化特点,从某些方面揭示了中药复方配伍理论的科学内涵;通过分别建立龙胆泻肝丸与桂枝颗粒多组分同时分析方法,阐明了复方中药多指标质量表征的必要性和可行性。研究结果表明:(1)关木通在龙胆泻肝汤中配伍以后可以降低有毒成分马兜铃酸A的煎出量(n=6,P<0.05),当归与关木通的配伍抑制了马兜铃酸A的煎出量;(2)在桂枝汤中,桂枝、白芍配伍前后桂皮酸、芍药苷的煎出量未见明显改变(n=6,P>0.05);但复方配伍后总多糖煎出量增加;炙甘草配伍以后甘草酸的煎出量也明显降低(n=6,P<0.01),煎液pH值的改变可能是含量降低的原因;(3)桂枝汤在大鼠体内的药代动力学表明,桂枝煎液与桂枝汤中桂皮酸在大鼠体内的代谢过程基本一致,而炙甘草煎液与桂枝汤中甘草酸在大鼠体内的代谢过程有所差异,表现为桂枝汤中甘草酸的药代参数Cmax、AUC均显着增大(n=6,P<0.01),T1/2Ke、Tmax均显着降低(n=6,P<0.01)。(4)建立了能够同时测定龙胆泻肝丸3个组分的RP-HPLC分析方法,该法具有专属性强、灵敏度高、快速、准确等优点,可以用于该制剂的质量评价与质量控制。(5)建立了能够同时测定桂枝颗粒3个组分的RP-HPLC分析方法,该方法可以较全面地表征桂枝颗粒的质量。一、中药复方配伍的化学变化研究(一)配伍对龙胆泻肝汤中马兜铃酸A煎出量的影响①关木通配伍前后马兜铃酸A煎出量的变化目的:比较关木通配伍前后马兜铃酸A含量的差异,研究传统龙胆泻肝汤配伍的科学依据。方法:采用HPLC测定关木通单煎液与龙胆泻肝汤中马兜铃酸A的含量。结果:马兜铃酸A在0.76~51.0μg·mL-1范围内线性良好,关木通单煎液和复方煎液的方法回收率分别为98.6%和96.5%;单煎液中马兜铃酸A的含量明显高于复方煎液(n=6, P<0.05)。结论:关木通在龙胆泻肝汤中配伍以后可以降低马兜铃酸A的煎出量。②拆方研究配伍前后马兜铃酸A煎出量的变化目的:研究复方配伍以后龙胆泻肝汤中马兜铃酸A煎出量变化的原因。方法:以中医药理论为指导,采用撤药分析法对龙胆泻肝汤进行拆方,建立HPLC测定了各拆方组中马兜铃酸A的煎出量,同时对数据进行了ANOVA分析。结果:当归和(或)生地与关木通配伍可以影响马兜铃酸A的煎出量。结论:按照中医理论,复方配伍能够降低关木通中马兜铃酸A的煎出量,可以降低肾毒性。③关木通与当归、生地配伍后的马兜铃酸A含量的变化目的:探究关木通与当归、生地配伍后的马兜铃酸A含量变化的原因。方法:采用HPLC法测定各拆方组中马兜铃酸A的煎出量,同时测定各组药渣中马兜铃酸A的含量,以计算回收率。结果:各煎液药渣中马兜铃酸A的回收率均不低于96.7%,关木通与当归配伍可以使马兜铃酸A的煎出量降低41.3%(n=5, P<0.01)。结论:关木通与当归配伍共煎,煎煮过程马兜铃酸A未发生化学反应生成新物质或分解,当归的加入可抑制马兜铃酸A的煎出量。(二)配伍对桂枝汤中桂皮酸、芍药苷、甘草酸及总多糖煎出量的影响①配伍对桂枝汤中的桂皮酸、芍药苷和甘草酸煎出量的影响目的:比较配伍前后桂枝汤中桂皮酸、芍药苷和甘草酸煎出量的变化。方法:建立HPLC测定各单味药煎液与桂枝汤中指标成分的含量。结果:桂皮酸、芍药苷、甘草酸的浓度与峰面积均呈良好的线性关系,各指标成分的平均回收率均在98.0%~101.0%之间;桂枝在桂枝汤中配伍前后桂皮酸含量未见明显改变(n=6,P>0.05),白芍在桂枝汤中配伍以后芍药苷含量未见明显改变(n=6,P>0.05),而炙甘草配伍后甘草酸含量降低了近50%(n=6,P<0.01)。结论:中药复方配伍由于体系微环境的改变或发生物理化学变化,某些指标成分煎出量有可能发生改变。②拆方研究配伍对桂枝汤中甘草酸含量的影响目的:研究复方配伍以后桂枝汤中甘草酸煎出量变化的原因。方法:采用正交设计法对桂枝汤进行拆方,建立HPLC测定了各组甘草酸的煎出量,同时测定各煎液pH。结果:甘草酸在8.75~280μg·mL-1内线性关系良好,甘草酸的平均回收率为99.4%;因素B(白芍用药/不用药)对桂枝汤中甘草酸的煎出量的影响有统计学意义(n=8,P<0.01),各煎液pH有所差异。结论:白芍的加入降低了甘草酸的煎出量,煎液pH的降低可能是煎出量改变的直接原因。③桂枝汤分煎液与合煎液中总多糖含量的比较研究目的:比较桂枝汤分煎液和合煎液中总多糖含量的差异,探讨复方配伍的合理性。方法:采用苯酚-硫酸法来测定多糖含量,对两组煎液的总多糖含量进行方差分析。结果:葡萄糖在20~120μg·mL-1范围内线性关系良好,平均换算因子为1.884,桂枝汤单煎合液与共煎液中多糖平均含量分别为16.3 mg·mL-1、22.1 mg·mL-1。结论:桂枝汤复方共煎可以增加总多糖的溶出量。(叁)配伍对桂枝汤中桂皮酸与甘草酸的药代动力学影响目的:比较大鼠灌胃桂枝煎液、甘草煎液、桂枝汤煎液后桂皮酸与甘草酸的药代动力学参数的差异。方法:大鼠在灌胃桂枝煎液、甘草煎液及桂枝汤后,利用HPLC法测定血浆中桂皮酸与甘草酸的浓度,利用3P87药代动力学软件估算相应的药代动力学参数。结果:桂皮酸与甘草酸在大鼠体内的药代学过程均符合二室模型。桂枝煎液与桂枝汤中桂皮酸在大鼠体内的代谢过程基本一致,而炙甘草煎液与桂枝汤中甘草酸在大鼠体内的代谢过程有所差异,表现为桂枝汤中甘草酸的药代参数Cmax、AUC均显着增大(n=5,P<0.01),T1/2Ke、Tmax均显着降低(n=5,P<0.01)。结论:桂枝汤复方配伍甘草酸的吸收程度增大,复方配伍具有合理性。二、复方中药的质量表征(一)HPLC测定龙胆泻肝丸中龙胆苦苷、黄芩苷、栀子苷目的:建立HPLC同时测定龙胆泻肝丸中龙胆苦苷、黄芩苷、栀子苷叁个指标成分的含量。方法:采用Hypersil C18色谱柱(250×4.6 mm, 5.0μm);流动相由乙腈-1%冰醋酸溶液组成;检测波长254 nm;流速1.0 mL·min-1。结果:栀子苷、龙胆苦苷、黄芩苷的线性范围分别为4.60~147μg·mL-1、9.05~290μg·mL-1和8.40~268μg·mL-1(r均大于0.999 9),平均回收率均大于98.1%。结论:该方法专属性强,结果准确可靠,重现性好,可以同时测定龙胆泻肝丸中龙胆苦苷、黄芩苷、栀子苷叁个指标成分的含量,可以较全面地表征该丸的质量。(二)HPLC测定桂枝颗粒中桂皮酸、芍药苷、甘草酸目的:建立HPLC同时测定桂枝颗粒中桂皮酸、芍药苷、甘草酸叁个指标成分的含量。方法:采用Phenomenex C18色谱柱(250 mm×4.6 mm, 5μm),流动相由乙腈-1%冰醋酸溶液(调pH为3.7)进行梯度洗脱,流速1.0 mL·min-1;检测波长250 nm;柱温为室温;进样量20μL。结果:芍药苷、桂皮酸、甘草酸分别在1.898~121.5μg·mL-1、1.969~126μg·mL-1、2.5~160μg·mL-1内线性关系良好,相关系数均大于0.999 8;芍药苷、桂皮酸、甘草酸的平均回收率分别为99.7%、99.3%、98.8%,RSD值均小于2.0%。结论:本文建立了简便、快速,可用于桂枝颗粒3个指标成分同时检测的HPLC法,该法为桂枝颗粒的质量控制提供了新的检测手段。
高慧敏[3]2006年在《1.白木通化学和木通质量研究 2.灯盏花素的药代研究》文中提出1.白木通化学和木通质量研究 白木通(Akebia.trifoliata(Thunb.) Koidz.var.australis(Diels) Rehd)为木通科木通属植物,其藤茎入药作木通用,收载于《中国药典》2005版一部。味苦,性寒,具有清热利尿,活血通脉,抗菌消炎之功效,主治小便短赤,淋浊,水肿,风湿痹痛,乳汁不通,痛经等症。到目前为止,仅有关于白木通种子和果皮的皂苷类成分和茎中多糖类成分的研究,关于其藤茎的系统化学成分研究还没有报道。为了寻找其有效成分,阐明其药效物质基础,建立白木通的多指标质量控制标准,我们对白木通的干燥藤茎进行了系统的化学成分研究 通过各种波谱数据和化合物的理化性质,鉴定了38个化合物的结构,其中7个新化合物分别为2α,3β,23-trihydroxy-30-norolean-12-en-28-oic acid β-D-glucopyranosylester(BMT-17),2α,3β,23-trihydroxy-30-norolean-12-en-28-oic acid β-D-xylopyranosyl-(1→3)-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→4)-O-β-D-glucopyranosyl-(1→6)-O-β-D-glucopyranosylester(BMT-20),2α,3β,23-trihydroxyurs-12-en-28-oic acid β-D-xylopyranosyl-(1→3)-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→4)-O-β-D-glucopyranosyl-(1→6)-O-β-D-glucopyranosyl ester(BMT-22),3-β-[(β-D-glucopyranosyl-(1→3)-O-α-L-arabinopyranosyl)oxy]-23-hydroxy-30-norolean-12-en-28-oic acid α-L-rhamnopyranosyl-(1→4)-O-β-D-glucopyranosyl-(1→6)-O-β-D-glucopyranosyl ester(BMT-26),3-β-[(α-L-xylopyranosyl-(1→2)-O-α-L-arabinopyranosyl)oxy]-30-norolean-12-en-28-oic acid α-L-rhamnopyranosyl-(1→4)-O-β-D-glucopyranosyl-(1→6)-O-β-D-glucopyranosyl ester(BMT-33),3-β-[(β-D-xylopyranosyl-(1→2)-O-α-L-arabinopyranosyl)oxy]-30-norolean-12-en-28-oic acid α-L-rhamnopyranosyl-(1→4)-O-β-D-glucopyranosyl-(1→6)-O-β-D-glucopyranosyl ester(BMT-29),3-β-[(β-D-glucopyranosyl-(1→2)-O-[β-D-glucopyranosyl-(1→3)-O-]-α-L-arabinopyranosyl)oxy]-30-norolean-12-en-28-oic acid α-L-rhamnopyranosyl-(1→4)-O-β-D-glucopyranosyl-(1→6)-O-β-D-glucopyranosylester(BMT-30-2);首次从木通属植物中分离得到的3个苯乙醇苷类化合物分别为(3,4-dihydroxyphenyl)-ethyl-6-E-caffeoyl-glucopyranoside(Calceolarioside B,BMT-4),(3,4-dihydroxyphenyl)-ethyl-6-E-feruloyl-glucopyranoside(BMT-7),4-hydroxyphenyl-ethyl-6-O-E-caffeoyl-glucopyranoside(BMT-7-2),其它化合物分别鉴定为3-β-[(β-D-glucopyranosyl-(1→2)-O-[β-D-glucopyranosyl-(1→3)-O-]-α-L-arabinopyranosyl)oxy]-olean-12-en-28-oic acid α-L-rhamnopyranosyl-(1→4)-O-β-D-glucopyranosyl-(1→6)-O-β-D-glucopyranosylester(Leonticins E,BMT-27),3-β-[(β-D-glucopyranosyl-(1→2)-O-[β-D-glucopyranosyl-(1→3)-O-]-α-L-arabinopyranosyl)oxy]-olean-12-en-28-oic acid β-D-glucopyranosyl-(1→6)-O-β-D-glucopyranosyl ester(BMT-28-2),3-β-[(β-D-glucopyranosyl-(1→2)-O-α-L-arabinopyranosyl)oxy]-olean-12-en-28-oic acid β-D-glucopyranosyl-(1→6)-O-β-D-gluco
参考文献：
[1]. 中药材及其制剂中马兜铃酸的药代动力学研究[D]. 田葆萍. 河北医科大学. 2003
[2]. 中药复方配伍的化学变化与复方中药的质量表征[D]. 郝福. 河北医科大学. 2007
[3]. 1.白木通化学和木通质量研究 2.灯盏花素的药代研究[D]. 高慧敏. 中国中医科学院. 2006
标签：中药学论文; 药代动力学论文; 关木通论文; 甘草酸论文; 桂枝汤论文; 芍药苷论文; 马兜铃论文; 中药论文; 龙胆泻肝汤论文;