一种肠肌间神经丛胶质细胞无血清原代培养法的建立

一种肠肌间神经丛胶质细胞无血清原代培养法的建立

论文摘要

目的肠胶质细胞(enteric glial cell,EGC)在肠道多种生理及病理过程的调节中发挥重要作用,为了深入研究EGC的功能,排除在体及组织水平中神经体液因素的影响,获得一种简便高效的原代EGC分离培养方法非常必要。方法取小鼠结肠纵行肌-肌间神经丛组织,经消化分离肠胶质细胞,采用含血清和无血清培养基交替培养法去除成纤维细胞后常规传代;运用细胞免疫荧光染色法检测原代EGC纯度;运用胞内钙成像技术实时观察EGC内Ca2+浓度([Ca2+]i)变化以检测细胞活性。结果每次实验获得的EGC至传代前细胞量可达约6. 8×105;无血清培养后成纤维细胞污染显著降低;胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)阳性的EGC占细胞总数的98. 44%±1. 07%,钙结合蛋白S100β阳性EGC占93. 61%±3. 16%,GFAP与S100β双阳性EGC占93. 09%±2. 99%; 96. 00%±4. 00%的细胞在ATP诱导下发生胞内钙瞬变。结论结合无血清培养可有效去除成纤维细胞污染,得到纯度较高、活性较好的肌间神经丛EGC。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 实验动物
  •   1.2 小鼠结肠肌间神经丛EGC的原代培养
  •   1.3 细胞免疫荧光染色
  •   1.4 探针负载细胞观察胞内[Ca2+]i变化
  •   1.5 统计学方法
  • 2 结果
  •   2.1 EGC在结肠肌间神经丛的分布
  •   2.2 原代EGC纯度
  •   2.3 原代EGC活性检测
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 权竹声,张晓丽,朱进霞

    关键词: 肠胶质细胞,原代培养,无血清培养法

    来源: 首都医科大学学报 2019年02期

    年度: 2019

    分类: 医药卫生科技,基础科学

    专业: 生物学,基础医学

    单位: 首都医科大学基础医学院生理学与病理生理学系

    基金: 国家重点研发项目(2016YFC1302203),国家自然科学基金(81700462,31871159,81570695)~~

    分类号: R363;Q813.11

    页码: 232-236

    总页数: 5

    文件大小: 1647K

    下载量: 133

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