刘阿茹[1]2004年在《转化生长因子β1对哮喘气道重建的研究》文中进行了进一步梳理支气管哮喘是一种慢性气道炎症性疾病，有众多的细胞(如嗜酸性粒细胞、肥大细胞、T淋巴细胞、中性粒细胞、气道上皮细胞等)、细胞因子、炎症介质等参与了其发病过程。目前有关抗原激发的急性气道炎症过程的研究已比较明确，然而造成哮喘长期反复发作的原因和发病机理仍不清楚。近几年来，有关气道重建的研究在国外成为一个热点课题，而国内的相关研究却鲜见报道。到目前为止，有关气道重建的定义及发生机制仍是有待解决的问题，但其基本的形态学表现为气道壁的增厚和气管腔的狭窄，气道上皮破坏，杯状细胞增生，粘膜下成纤维细胞增殖并过度合成和分泌胶原蛋白等而导致基底膜增厚，气道平滑肌细胞增生、肥厚，粘膜内微血管形成，以及血管壁通透性改变造成的粘膜水肿和炎症细胞浸润。其中细胞外基质(ECM)增多导致的基底膜增厚和气道平滑肌细胞增生、肥大是其最重要的改变。 TGF-β是一种具有免疫体调节功能的细胞因子。与正常对照组相比哮喘患者气道内的TGF-β水平明显增高。产生TGF-β1的细胞有淋巴细胞、巨噬细胞、上皮细胞。支气管哮喘患者的支气管粘膜上皮细胞、浸润的嗜酸性粒细胞和中性粒细胞是TGF-β最重要的来源。这种细胞因子在驱动和增强气道炎症反应和气道重第四军医大学博士学位论文建中具有重要作用。TGF一p在哮喘气道重建中具有促胶原产生、增加细胞外基质沉积和诱导起到上皮细胞凋亡等重要作用，但TGF一pl对气道平滑肌的直接作用的研究尚未见报道。因此我们以MTT法和流式细胞仪检测体TGF一p对体外培养的气道平滑肌的增殖的作用，了解TGF一p在哮喘气道重建的一个重要方面，气道平滑肌增生的直接作用。 MAPK途径和PI一3K信号传递系统对气道平滑肌细胞进入S期有重要作用，是ASM细胞增殖的重要的信号转导途径。因此本试验通过MTT和流式细胞仪的方法观察TGF一pl对体外培养的大鼠ASM细胞增殖作用。应用特异性细胞外信号调节激酶1/2 (ERKI/2)抑制剂U一0126或Pl一3K抑制剂LY294002阻断细胞增殖的信号转导途径，观察TGF一日1诱导的大鼠ASM细胞增殖中可能的信号转导途径，从而更深一步了解TGF一pl诱导的哮喘气道重建的机制。 一、转化生长因子pl对大鼠支气管平滑肌增殖的作用 应用体外培养的方法，加入不同浓度的TGF一pl，通过MTT法和流式细胞仪观察其对ASMC增殖的影响。结果发现于细胞培养第2天，MTT法检测TGF一日1明显引起ASMC增殖，高于对照组和10%FCS引起ASMC增殖。镜下观察发现，1 0 pg·L一，TGF一pl组和100 pg·L一‘TGF~p组ASMC于培养第3天铺满96孔培养板，lpg·L一‘TGF一旦1和10%FCS组细胞于第5天铺满培养板。流式细胞仪检测细胞生长周期发现TGF一el促进S期细胞和GZ期细胞百分比明显增加，引起ASMC增殖变快。TGF一pl对气道平滑肌细胞的增殖具有明显的促进作用。 二、TGF一pl诱导的大鼠ASM细胞增殖的信号转导途径 在本研究中，MTT法和免疫组化图像分析结果显示:预先30min加入U一0126明显抑制了10pg.L一1 TGF一pl诱导的ASMC增殖。预先30min加入LY294002对ASMC增殖有抑制作用，但统计学上无差别。说明TGF一日1可能主要用过MAPK途径诱导ASMC增殖，ERKI/2是关键的信号分子。MTT法及免疫组化和图像分析第四军医大学博士学位论文结果表明，不同浓度TGF一pl诱导的ASMC磷酸化ERKI/2的表达不同，随着TGF一旦1浓度增加，ASMC磷酸化ERKI/2的染色越深。IOpg·L一‘TGF一p It匕zpg·L一‘TGF一pz诱导的磷酸化ERKI/2明显增高，100 p 9 .L一‘TGF一pl比10 pg·L一‘TGF一pl诱导的磷酸化ERKI/2增高，但不显着。说明在一定浓度范围内，TGF一pl诱导的磷酸化ERKI/2表达有剂量一效应关系，浓度越高磷酸化ERKI/2表达越多，ASMC增殖就越明显。我们分别在30min、60min、24h和48h检测TGF一pl诱导的ASMC phospho一ERKI/2的表达，均明显高于对照组。图像分析灰度值在不同时间点上无明显差异，说明TGF一pl能持续诱导ASMC表达phospho一ERKI/2，这对于TGF-已1诱导的ASMC增殖是至关重要的 结论: 1.TGF一pl增加了体外培养的ASMC中S期和GZ期细胞占总细胞数的百分比。 2.TGF一pl对气道平滑肌的增殖有明显的促进作用。 3.TGF一pl主要通过MAPK途径诱导ASMC增殖，ERK 1/2是关键的信号转导分子。 4.在一定浓度范围内，TGF一pl诱导的phospho一ERK一/2表达有剂量一效应关系，TGF一pl浓度越高phospho一ERKI/2表达越多，ASMC增殖越明显。 5.TGF一pl能诱导ASMC的phospho一ERKI/2持续表达，这对于ASMC增殖是至关重要的。
杨恩彬[2]2013年在《益气活血中药对哮喘小鼠气道重建影响的实验研究》文中研究指明[目的]本研究选取益气活血中药（黄芪多糖和叁七总皂苷）干预哮喘小鼠模型的气道重建。通过观察对哮喘小鼠气道壁结构改变、支气管周围炎症细胞浸润程度、以及TGF-β1和Ⅲ型胶原表达的影响，探讨益气活血中药对哮喘小鼠气道重建的阻断作用及可能的作用机制，并比较两种药物单独或联合使用效果有无差异。为临床用药提供新的思路和实验依据。[方法]BALB/C小鼠60只，随机分为6组。除正常组外各组用鸡卵清蛋白（OVA）腹腔致敏3次，雾化激发4周建立哮喘模型。地塞米松组和药物干预组（益气活血中药合用及单独使用，共3组）于雾化前30分钟按组分别腹腔注射不同药物。正常组用生理盐水代替OVA和干预药物。取材后常规石蜡包埋肺组织、HE染色。测定并计算出气道壁总面积、气道壁厚度，用气道基底膜周径（Pbm）为分母标准化。半定量评定支气管周围炎症细胞浸润程度。用免疫组化技术检测转化生长因子-β1（TGF-β1）和Ⅲ型胶原的定位及表达水平（用吸光度A表示）。比较各组小鼠气道炎症和重建的程度。[结果]行为学观察：致敏小鼠雾化激发后出现呼吸加快、打喷嚏、口周发绀、烦躁不安等表现。哮喘模型组最明显，药物干预组较模型组要轻。病理学观察：HE染色切片显示哮喘模型组支气管发生明显改变：气道壁增厚，上皮坏死脱落，平滑肌层和基底膜层增厚，有大量炎性细胞浸润。地塞米松组病理改变程度较轻。叁七总皂苷组和其他药物干预组表现介于模型组和地塞米松组之间。正常对照组无明显病理改变。图象分析显示哮喘模型组气管壁总面积/Pbm、气管壁厚度/Pbm、支气管周围炎症细胞浸润程度均较正常组明显增加（P＜0.01），药物干预组（D～F组）与正常对照组和哮喘模型组比较均有差异（P＜0.05）。免疫组化检测：TGF-β1主要表达在气道黏膜上皮层。Ⅲ型胶原主要分布于气道黏膜下层和黏膜上皮细胞之间。图象分析显示哮喘模型组TGF-β1和Ⅲ型胶原吸光度（A）均较正常组明显增加（P＜0.01），地塞米松组和药物干预组（C～F组）与正常对照组和哮喘模型组比较均有差异（P＜0.05）。[结论]1.黄芪多糖和叁七总皂苷能减轻哮喘小鼠的气道炎症，并且联合用药的效果比两种药物单独使用更加明显。2.黄芪多糖和叁七总皂苷能减轻哮喘小鼠的气道重建程度，联合用药与两种药物单独使用的效果无区别。3.黄芪多糖和叁七总皂苷能够抑制哮喘小鼠的TGF-β1和Ⅲ型胶原的表达。提示这两种药可能是通过减少TGF-β1的表达和/或Ⅲ型胶原的合成，从而抑制气道重建。
陈洪谦[3]2007年在《椒目油防治哮喘气道重建机制的研究》文中进行了进一步梳理目的与意义哮喘气道重建(remodeling)又称气道重塑或重构,是支气管哮喘(哮喘)一大重要病理特征。气道重建主要表现为气道平滑肌增生、基底膜增厚、腺体增生及上皮下纤维增殖、胶原沉积等,从而造成气道管壁增厚、管腔狭窄。气道重建可导致气流不可逆阻塞和持续性气道高反应性,并能成为顽固性哮喘反复发作的病理学基础,研究它有利于哮喘的早期防治和阻止哮喘病情的进一步恶化。目前评价任何一个防治哮喘的药物不仅要看它的平喘作用,而且还要看它能否具有防治气道重建的作用。中药椒目治疗支气管哮喘历史悠久,疗效显着,目前国内许多单位相继开展了椒目治疗哮喘研究,取得丰硕成果[1-2],国内大量的文献报道以及我们自己的研究成果,无论从分子生物学的角度或是从临床的角度都说明了椒目能有效治疗哮喘。但是椒目能否有效地防止哮喘气道重建(气道重塑或重构),目前还未见到文献报道。本实验研究选择与气道重建密切相关的几种因素通过复制大鼠哮喘气道重建模型,初步揭示椒目防治哮喘气道重建的机制,为更好的应用椒目防治哮喘提供理论依据。研究内容:1.探讨椒目油对哮喘大鼠气道重建模型Ⅲ型、V型胶原的影响。2.探讨椒目油对哮喘大鼠气道重建模型中TGF-β1表达的影响。3.探讨椒目油对哮喘大鼠气道重建模型气道平滑肌PCNA表达的影响。材料与方法:健康SD大鼠30只,体重200-250g,将30只SD大鼠随机分为3组:哮喘组(10只),椒目油治疗组(10只),正常对照组(10只)。参考文献[3]用l% OVA和1%氢氧化铝溶液0.5 ml大鼠腹腔注射,第8 d重复注射1次,至15d开始吸入1% OVA溶液激发5 min。l% OVA溶液需要每天配制,雾化时将大鼠置于特制塑料容器内雾化吸人。治疗组在雾化激发前1h给予椒目油和熟精油的混合物(按1:1混合),以3mL/kg灌胃,对照组以生理盐水代替OVA致敏和雾化。3组大鼠在激发3个月后处死,经右主支气管注入10%中性甲醛溶液至肺适度膨胀,将右肺连同右主支气管剪下放入10%中性甲醛固定一周。从右侧下肺叶开口处以水平位取材,制成石蜡切片,行HE染色作病理观察。以磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗作为空白对照,用ABC法,组织切片按序以PB漂洗,30%羊血清,一抗、二抗孵育后浸入ABC液中1 h,取出经PBS、Tris-HC1缓冲液漂洗,再以DAB显色,苏木精复染,常规脱水,透明、封盖。每例标本取2张切片,每张切片随机选取小支气管5支,应用计算机灰度分析测定粘膜下层吸光度确定Ⅲ型、V型胶原以及TGF-β1的含量。实验数据用?x±s表示,应用SPSS 11.0软件进行t检验分析,p<0.05为差别有统计学意义。结果:1肺组织HE染色哮喘气道重建组大鼠肺组织切片HE染色可见支气管上皮细胞肿胀、脱落,管壁增厚,管腔变窄,管壁内及管周有大量炎性细胞浸润,以EOS和淋巴细胞为主;椒目油治疗组大鼠的肺组织可见支气管上皮细胞的炎症反应较哮喘组为轻,支气管壁及管腔内的炎症细胞也大为减少;对照组大鼠的肺组织则无上述改变。而且可观察到哮喘组大鼠气道壁厚度较对照组明显增加,椒目油治疗组大鼠气道壁厚度较哮喘气道重建组明显降低。2镜下观察免疫组化切片的变化Ⅲ型、V型胶原染色呈棕黄色,Ⅲ型胶原主要在气道壁粘膜下层表达,V型胶原表达主要位于基底膜上;测定Ⅲ型、V型胶原阳性表达的计算机灰度分析:哮喘气道重建组明显高于对照组;椒目油治疗组低于哮喘气道重建组(P均<0.05)而略高于对照组( p<0.05)。TGF-β1主要表达在气道粘膜上皮层,经ABC染色成棕黄色。灰度分析结果显示:哮喘气道重建组明显高于对照组;椒目油治疗组低于哮喘气道重建组(P均<0.05)略高于对照组( p<0.05)。PCNA免疫组化染色呈棕黑色圆形颗粒,位于上皮下基底膜、平滑肌细胞及外周成纤维细胞。哮喘气道重建组阳性表达明显高于对照组;椒目油治疗组明显低于哮喘气道重建组;略高于对照组。结论:1、椒目油可以降低哮喘大鼠气道重建气道壁炎症反应及气道壁厚度。2、椒目油可降低哮喘大鼠气道重建气道壁Ⅲ、V型胶原的含量。3、椒目油可降低哮喘大鼠气道重建气道壁TGF-β1在气道壁的表达。4、椒目油可以降低PCNA在大鼠哮喘重建模型气道壁表达。以上四点说明椒目不仅可以有效地治疗哮喘,而且可以有效地防治气道重建。
佚名[4]2003年在《中华结核和呼吸杂志2003年第26卷主题词索引》文中提出说明 :(1)本索引主题词按汉语拼音字母顺序排列 ;(2 )冠有阿拉伯数字、西文字母、西文姓氏的主题词 ,按其后的汉字拼音排序 ,在汉字相同的情况下 ,按数字、英文字母、希文字母顺序先后排列 ;(3)为了集中同一性质的主题词 ,采用倒装词 ,如角膜移植
谢敏[5]2007年在《ERK1/2信号通道在哮喘支气管平滑肌表型转化、迁移和分泌调控中作用的研究》文中进行了进一步梳理支气管哮喘是一种世界范围内广泛发病的常见病、多发病,其发病机制至今尚未完全阐明。近年的研究发现,气道重建是慢性持续性哮喘和重度哮喘患者难以得到有效治疗的重要原因之一,相关机制正成为目前国内外的研究热点。气道平滑肌细胞作为气道重建中的主要分子,参与了气道重建的始动及发展整个过程。它作为结构细胞不仅通过自身的肥大与增生直接参与气道壁的增厚,而且通过表型转化、迁移功能的改变以及分泌炎症因子和细胞外基质等促进气道重建的发展。然而有关哮喘支气管平滑肌表型转化、迁移功能和分泌功能改变的发生机制目前仍不明确。细胞外信号调节激酶属于有丝分裂原激活蛋白激酶家族,它是细胞内重要的信号传递分子,参与细胞生长、发育、增殖、分化等多种生理病理过程,它有多种亚型,在平滑肌中主要有ERK1、ERK2(ERK1/2)两种,有研究表明它在哮喘气道慢性炎症和气道高反应性中起到了重要的调控作用,但是有关ERK信号通道在哮喘支气管平滑肌表型转化、迁移和分泌功能改变中作用的研究国内外尚少见报道。本研究旨在通过大鼠慢性哮喘模型和哮喘血清被动致敏人支气管平滑肌细胞探讨ERK1/2信号通道在哮喘支气管平滑肌细胞表型转化、迁移和分泌功能改变中的调控作用,为进一步阐明哮喘气道重建的发病机制提供实验依据。方法:应用卵清蛋白雾化和激发的方法制备大鼠慢性哮喘模型,应用哮喘患者血清被动致敏人支气管平滑肌细胞,气道病理切片检测气道改变,免疫组织化学、免疫荧光细胞化学、western blot和RT-PCR等方法检测总ERK1/2、磷酸化ERK1/2和平滑肌标志蛋白(alpha-actin和骨桥蛋白)在支气管平滑肌细胞中的表达,透射电镜下观察支气管平滑肌细胞超微结构的改变,平面迁移实验和跨膜迁移实验检测支气管平滑肌细胞迁移能力的改变,ELISA方法检测支气管平滑肌细胞分泌功能的变化。同时,还运用了ERK1/2信号通道的激动剂表皮生长因子、抑制剂PD98059和ERK1/2反义寡核苷酸对ERK1/2信号通道进行了干预。结果:1.在慢性哮喘模型大鼠气道中ERK1/2的活性和在蛋白质和核酸水平上的表达均明显增强(P<0.01),且P-ERK的表达与气道管壁厚度显着正相关。2.慢性哮喘模型大鼠支气管平滑肌细胞超微结构出现大量合成细胞器,同时平滑肌收缩标志蛋白(alpha-actin)的表达下降,合成型标志蛋白(osteopontin)的表达上升(P<0.01)。ERK1/2信号通道激动剂表皮生长因子(epidermal growth factor, EGF)促进了这一转变,而抑制剂PD98059部分抑制了平滑肌细胞表型的转化。3.慢性哮喘模型大鼠支气管平滑肌细胞的平面迁移和跨膜迁移能力都较正常对照大鼠有明显增强,10μmol/L的PD98059即明显抑制慢性哮喘支气管平滑肌细胞的迁移,而EGF有显着的促进作用,ERK1/2反义寡核苷酸转染能够有效抑制细胞的迁移能力(P<0.01)。4.慢性哮喘大鼠支气管平滑肌细胞较正常对照分泌转化生长因子、血管内皮生长因子、结缔组织生长因子、RANTES、嗜酸细胞活化趋化因子、纤维结合蛋白和Ⅰ型胶原蛋白的水平均有明显升高(P<0.01)。EGF能够促进正常大鼠BSMC和慢性哮喘大鼠的分泌,但慢性哮喘组的水平要显着高于正常对照,而PD98059降低了慢性哮喘大鼠支气管平滑肌细胞的分泌水平(P<0.01),ERK1/2反义寡核苷酸能够有效的抑制慢性哮喘大鼠支气管平滑肌细胞的分泌(P<0.01)。5.经鼻吸入ERK1/2反义寡核苷酸下调ERK1/2在慢性哮喘气道平滑肌的表达,并抑制了慢性哮喘模型大鼠气道壁的增厚,阻止了支气管平滑肌细胞的表型转化(P<0.01)。6.哮喘血清被动致敏的人支气管平滑肌细胞向合成细胞型进一步转化,EGF促进了被动致敏平滑肌细胞的表型转化,PD98059降低合成型标志蛋白的表达,升高收缩型标志蛋白的水平(P<0.05)。ERK1/2反义寡核苷酸能够有效抑制被动致敏人支气管平滑肌细胞的表型转化(P<0.05)。7.哮喘血清被动致敏的人支气管平滑肌细胞的迁移能力较正常血清对照有明显增强,EGF促进了被动致敏平滑肌细胞的迁移,而PD98059抑制了细胞的迁移能力(P<0.05),ERK1/2反义寡核苷酸转染能够有效的抑制被动致敏人支气管平滑肌细胞的迁移能力的增强(P<0.05)。8.哮喘血清被动致敏的人支气管平滑肌细胞分泌生长因子、炎性因子和细胞外基质的能力较正常血清对照细胞有明显增强,EGF促进了被动致敏平滑肌细胞的分泌,而PD98059降低细胞的分泌水平(P<0.05),ERK1/2反义寡核苷酸转染能够有效的抑制被动致敏人支气管平滑肌细胞的分泌能力(P<0.05)。结论:ERK1/2信号通道参与了慢性哮喘模型大鼠支气管平滑肌细胞和哮喘患者血清被动致敏人支气管平滑肌细胞表型转化、迁移和分泌功能变化的调控,提示ERK信号通道在慢性哮喘气道重建发病机制中可能具有重要作用。
张晗睿[6]2006年在《加味叁拗汤治疗哮喘作用机理的实验研究》文中认为支气管哮喘是由多种细胞(如嗜酸粒细胞、肥大细胞、T淋巴细胞、中性粒细胞、气道上皮细胞等)和细胞组分参与的气道慢性炎症性疾病。尽管西医学对哮喘病发病机制和治疗方面的研究取得了较大进展,但其发病率在世界范围内仍有增高的趋势。因此,对哮喘病发病机理的深入研究和寻找有效的治疗方法具有非常重要的意义。中医药治疗哮喘具有悠久的历史和自身特色。传统的中药复方具有多靶点、多环节的作用特点,能影响哮喘病的诸多病理过程从而起到治疗作用。借助现代生物医学手段明确中药对哮喘的治疗作用并探讨其作用机理有助于从单味中药及中药复方中发现疗效可靠的哮喘新药。加味叁拗汤(MX)是导师王庆国教授在古方叁拗汤的基础上加味而成的。该方兼顾哮喘病气郁、痰凝、瘀阻的病机特点,在临床中能有效控制哮喘发作期症状,对哮喘缓解期治疗也起到一定的作用,具有一定的临床基础。本课题主要从MX的镇咳、祛痰、抗炎作用,MX的平喘作用及支气管解痉作用,MX抗气道炎症的作用叁个方面进行实验研究,从而明确MX的治疗作用并部分阐明其作用机理。1目的观察MX的镇咳、祛痰、抗炎作用。明确MX的平喘作用及其对离体气管平滑肌的解痉作用。探讨MX对气道炎症的影响及MX抗气道炎症的作用机理。2方法以咳嗽潜伏期及咳嗽次数、酚红排泌量、耳肿胀度为指标,观察MX对小鼠氨水引咳模型、小鼠气管酚红排泌法模型、小鼠二甲苯致耳肿胀模型的影响,从而明确MX的镇咳、祛痰和抗炎作用。制备卵蛋白(OVA)致敏豚鼠哮喘模型,观察MX的平喘作用;制备豚鼠离体气管螺旋条,分别观察MX对磷酸组胺和氯化乙酰胆碱所致豚鼠气管平滑肌收缩的拮抗作用,MX对OVA刺激所导致的OVA致敏豚鼠气管平滑肌收缩的舒张作用和MX对正常及哮喘豚鼠静息状态下气管平滑肌的松弛作用。制备OVA致敏大鼠哮喘模型,观察MX对外周血嗜酸性粒细胞(EOS)计数、肺泡支气管灌洗液(BALF)中炎症细胞总数、分类计数和肺功能的影响。采用放免法观察MX对大鼠血浆和BALF中ET-1的影响;采用ELISA法观察MX对大鼠血清IL-4、IFN-γ和IL-5的影响。3结果3.1 MX的镇咳、祛痰、抗炎作用3.1.1 MX对浓氨水致小鼠咳嗽反应的影响MX和阳性药咳必清均能延长浓氨水致小鼠咳嗽的咳嗽潜伏期。与生理盐水组相比,
盛瑜[7]2009年在《苦参总生物碱对大鼠气道平滑肌细胞增殖的影响》文中认为本课题通过正交实验法对苦参有效成分的提取条件进行了优化筛选,采用所确定的最佳提取条件得到苦参提取物,通过颜色鉴别试验、薄层层析法(TLC)证明提取物为苦参中的生物碱类化合物,并且其中的两种组分分别为苦参碱和氧化苦参碱。本实验采用酶消化法和组织贴块法在体外培养大鼠气道平滑肌细胞(Airway smoothmuscle cells,ASMCs),并以细胞成活率和细胞增殖活性为指标,筛选出相对稳定的ASMCs分离、培养技术。本实验通过大鼠灌胃的方法,获得含苦参总生物碱代谢物的血清,并首次将其作用于大鼠气道平滑肌细胞的增殖模型中,通过观察给药后细胞增殖活性来探讨苦参总生物碱防治哮喘病的机制。实验结果表明:高剂量的苦参总生物碱可明显抑制内皮素-1(ET-1)致敏的ASMCs增殖,中、低剂量对其作用不明显,但也在一定程度上起到了抑制作用。因此,我们认为,苦参总生物碱具有抑制ASMCs增殖的作用,这为苦参治疗哮喘病提供了理论依据,即苦参总生物碱可通过抑制ASMCs的增殖来阻止气道重建,从而起到预防和治疗哮喘病的作用。本实验为研究苦参总生物碱的活性作用提供了一定的参考依据,并为进一步探讨其防治哮喘病的机制提供了理论基础。
孙文静[8]2013年在《转化生长因子β_1对支气管哮喘患者肺成纤维细胞的作用研究》文中研究表明目的通过观察转化生长因子β1(TGF-β1)对支气管哮喘患者肺成纤维细胞增殖和分泌的影响,探讨二者在支气管哮喘气道重塑中的作用和关系。方法采用组织块贴壁法和酶消化法,分离和原代培养支气管哮喘患者肺成纤维细胞,免疫荧光法进行鉴定。Oμg/L TGF-β1浓度(对照组)、1μg/L TGF-β1浓度(A组)、TGF-β1浓度(B组)、10μg/LTGF-β1浓度(C组)分别作用肺成纤维细胞48h, MTT法测定成纤维细胞增殖水平,Westrn blot检测a-SMA蛋白的表达,RT-PCR法分别测定在以上不同TGF-β1浓度作用48h下,肺成纤维细胞Ⅰ型胶原(Collagen)和Ⅲ型胶原(CollagenⅢ)的mRNA表达水平。结果组织块贴壁法成功地培养出了肺成纤维细胞,酶消化法未能成功。组织块接种第6d时有少量细胞于其周围爬出,呈长梭形或者叁角形,约25d细胞铺满瓶底,用自然纯化和差速贴壁法纯化细胞,胰酶消化法传代培养,并且可以进行冻存与复苏。免疫荧光法鉴定原代培养出的细胞,成纤维细胞因表达波形蛋白而染成绿色,证明该实验研究的细胞为肺成纤维细胞。MTT法检测结果示：不同浓度的TGF-β1,均可刺激哮喘患者肺成纤维细胞增殖,呈浓度依赖性(P<0.05)。Weternblot结果显示：不同浓度的TGF-β1作用下,成纤维细胞可表达α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),其表达水平与TGF-β1呈明显的浓度依赖关系(P<0.05)。RT-PCR法检测结果示：在不同浓度的TGF-β1诱导下,成纤维细胞Collagen Ⅰ mRNA和CollagenⅢ mRNA的表达水平表达上调,均随着TGF-β1的浓度增高而增高,呈浓度依赖性(P<0.05)。结论组织块贴壁法是一种较为可靠的肺成纤维细胞分离和原代培养方法。在支气管哮喘发病机制中,TGF-β1可促进肺成纤维细胞的增殖,诱导其向肌成纤维细胞转化而被激活,合成和分泌Collagen Ⅰ和CollagenⅢ,从而引起支气管哮喘患者气道粘膜下纤维化,胶原沉积,由此导致了支气管哮喘患者的气道重塑。
黄妙毅[9]2007年在《丙酸氟替卡松对哮喘小鼠气道重塑及TGF-β_1表达的影响》文中指出支气管哮喘(哮喘)是一种慢性气道炎症性疾病。近年来越来越多的证据表明,哮喘除了存在气道炎症和非特异性气道高反应性外,亦存在气道重塑(AWR)。它是哮喘一重要病理特征,能导致气流的不可逆性阻塞和气道的持续性高反应,可能是顽固性哮喘反复发作的病理基础。其发生机制复杂,涉及到多种细胞,细胞因子以及炎性介质,现普遍认为气道重塑是炎症所造成组织损伤后不完全或过度修复所致。有效地控制哮喘气道炎症及防止气道重塑的发生是哮喘防治的关键。吸入性糖皮质激素是目前控制哮喘最为有效的抗炎药物,其是否能防治气道重塑,尚未定论。其中丙酸氟替卡松是一种新型的脂溶性糖皮质激素,与糖皮质激素受体(GR)具有高亲和力,口服生物利用度低于1%,抗炎能力是布地奈德和二丙酸倍氯米松的12倍和20倍,目前被广泛使用,它是否有防治气道重塑的作用,目前研究较少。本研究利用哮喘小鼠气道重塑模型,观察早期应用丙酸氟替卡松后,气道壁管壁厚度、平滑肌厚度及TGF-β1表达的变化,了解其对气道重塑的影响和可能的作用机制。方法:⑴建立哮喘小鼠气道重塑模型。⑵将30只BALB/c小鼠随机分为哮喘气道重塑组(A组)、正常对照组(B组)、丙酸氟替卡松治疗组(C组)3组,每组l0只。制备小鼠肺组织病理切片,HE染色观察各组气道结构改变情况,采用医学图像分析软件测定支气管管壁厚度(WAt/Pbm)、支气管平滑肌厚度(WAm/Pbm);肺组织石蜡切片行TGF-β1免疫组化染色后计算机图像分析测定其灰度值。结果:1.OVA激发4周后,气道壁粘膜下层增宽,气道上皮细胞脱落,杯状细胞增多,气道平滑肌明显增厚.2.(1)光镜下可见A组小支气管上皮细胞脱落、管壁炎症细胞浸润、杯状细胞增生、平滑肌增厚,而C组上述改变较A组明显减轻。(2)与B组比较,A组支气管管壁厚度(17.43±1.10)μm2/μm和平滑肌厚度(6.58±1.16)μm2/μm显着增加(P<0.01);与A组比较,C组显着降低支气管管壁厚度(14.06±1.20)μm2/μm和平滑肌厚度(4.41±1.00)μm2/μm。3.与B组比较,A组TGF-β1的灰度值(66.18±1.53)显着降低,(P<0.01);与A组比较,C组丙酸氟替卡松干预后TGF-βl的灰度值(72.05±1.65)显着增高。结论:(1) OVA激发4周后,小鼠气道出现了气道重塑。(2)吸入丙酸氟替卡松能预防哮喘小鼠气道重塑,但作用是不完全的,仅能部分抑制气道结构的改变。⑶TGF-β1参与了气道重塑过程,丙酸氟替卡松可能是通过下调TGF-β1的表达干预了气道重塑。
杨帆[10]2014年在《小青龙汤对哮喘大鼠肺组织中TGF-β1、Smad3蛋白表达的影响》文中指出目的：探讨小青龙汤对哮喘大鼠肺组织中TGF-β1、Smad3蛋白表达的影响。方法：将24只SPF级SD雄性大鼠随机分为叁组：正常对照组(A)、支气管哮喘组(B)、小青龙汤组(C),每组8只。以卵清白蛋白(OVA)致敏与激发建立哮喘大鼠气道重塑模型。小青龙汤干预支气管哮喘大鼠后,HE染色观察各组气道壁嗜酸性粒细胞等炎症细胞浸润及气道平滑肌增生情况；应用图像分析技术测定各组肺内支气管Wat、Wam、 Pbm等气道重塑指标并计算Wat/Pbm、 Wam/Pbm各值用来代表支气管管壁厚度和平滑肌厚度；免疫组化法检测各组肺组织中TGF-β1、Smad3蛋白的表达,并应用图像分析软件计算各蛋白的MOD值,半定量分析肺组织中TGF-β1、Smad3蛋白的表达情况。结果：哮喘模型组、小青龙汤组大鼠测得的Wat/Pbm、Wam/Pbm值较正常对照组明显增加(均P<0.01),小青龙汤组与哮喘模型组相比Wat/Pbm、Wam/Pbm值明显降低(P<0.01)；免疫组化显示哮喘模型组和小青龙汤组TGF-β1及Smad3蛋白的表达明显高于正常对照组(P<0.01),哮喘模型组TGF-β1及Smad3蛋白的表达高于小青龙汤组(P<0.01)。结论：小青龙汤可能通过影响支气管哮喘大鼠肺组织中TGF-β1、Smad3蛋白表达来拮抗气道重塑,从而起到治疗作用,也成为小青龙汤治疗支气管哮喘的作用机制之
参考文献：
[1]. 转化生长因子β1对哮喘气道重建的研究[D]. 刘阿茹. 第四军医大学. 2004
[2]. 益气活血中药对哮喘小鼠气道重建影响的实验研究[D]. 杨恩彬. 云南中医学院. 2013
[3]. 椒目油防治哮喘气道重建机制的研究[D]. 陈洪谦. 第四军医大学. 2007
[4]. 中华结核和呼吸杂志2003年第26卷主题词索引[J]. 佚名. 中华结核和呼吸杂志. 2003
[5]. ERK1/2信号通道在哮喘支气管平滑肌表型转化、迁移和分泌调控中作用的研究[D]. 谢敏. 华中科技大学. 2007
[6]. 加味叁拗汤治疗哮喘作用机理的实验研究[D]. 张晗睿. 北京中医药大学. 2006
[7]. 苦参总生物碱对大鼠气道平滑肌细胞增殖的影响[D]. 盛瑜. 吉林大学. 2009
[8]. 转化生长因子β_1对支气管哮喘患者肺成纤维细胞的作用研究[D]. 孙文静. 青岛大学. 2013
[9]. 丙酸氟替卡松对哮喘小鼠气道重塑及TGF-β_1表达的影响[D]. 黄妙毅. 第四军医大学. 2007
[10]. 小青龙汤对哮喘大鼠肺组织中TGF-β1、Smad3蛋白表达的影响[D]. 杨帆. 桂林医学院. 2014
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