郭宏伟[1]2004年在《鹿出血性肠炎疫苗研制及产气荚膜梭菌α毒素基因序列分析》文中研究表明本实验从山西绛县、阳泉、昔阳、灵石、太谷等地的共12 个鹿场采集病死鹿的肝、脾、肾、肠系膜淋巴结、病变小肠及其内容物或发病期间的血便,进行了病原菌的分离鉴定。从28 例鹿出血性肠炎病例中分离出22 株A 型产气荚膜杆菌,证明A 型产气荚膜梭菌是引起山西省鹿出血性肠炎的主要病原菌。从22 株分离菌中选取毒力最强的一株,定名为J5,进行最佳产毒条件的测定。结果显示:用肉肝胃酶消化汤,在35℃、7h 厌氧培养产毒效果最佳,其毒力可达100MLD/ml。在此最佳产毒条件下,进行培养,然后取培养液,用终浓度0.3%的甲醛进行灭活,5d 后在灭活检验合格的菌液中加入终浓度10%的氢氧化铝胶,2-8℃静置10d,弃总量1/2的上清液后摇匀,分装,无菌检验、安全检验、效力检验均合格。表明针对山西地方株的鹿出血性肠炎灭活单价苗研制成功。由于A型产气荚膜梭菌产生的主要毒力因子为α毒素,所以本试验进一步构建了α毒素基因的重组质粒,然后对α毒素基因进行克隆和核苷酸序列测定,经分析,结果与α毒素基因标准序列相一致,从而为进一步研制基因工程苗奠定了基础。
赵立峰[2]2005年在《鹿出血性肠炎疫苗研制及魏氏梭菌β毒素基因序列分析》文中研究表明鹿出血性肠炎是一种发病急,病程短,死亡率极高的,以胃肠道严重出血为主要特征的疾病。由于该病病原具有多样性,是几种病原菌或同一病原菌的不同血清型的协同作用,且其发病后治疗效果并不理想,所以前期疫苗预防成为最直接有效的方法。本试验分析了山西某些鹿场的各种病原菌及其血清型,主要是由产气荚膜梭菌引起的。本试验根据山西鹿出血性肠炎的流行情况制备多价灭活苗。对山西省内不同地区鹿场发生的32例出血性肠炎的病料进行分离鉴定。分别从各型中筛选出毒力最强的菌株,命名为T5-A和J28-C,并测定其最佳产毒条件。将T5-A和J28-C在此条件下培养,取培养液,用终浓度0.5%、0.7%、0.9%的甲醛分组灭活,5d后灭活检验,合格的菌液按A:C为1:1的比例混合,加入终浓度10%的铝胶佐剂,2-8℃静置10d,弃总量1/2的上清液,摇匀分装。对该苗进行安全检验、免疫效力试验,并对3,6,9个月血清中抗体消长规律进行研究。同时建立了产气荚膜梭菌的毒力测定替代试验方法。结果显示:用厌氧肉肝胃酶消化汤,35℃ 7h培养产毒效果最佳;0.5%甲醛安全性较好;家兔最小免疫剂量为2ml:C型产气荚膜梭菌的抗体滴度下降较慢,9个月达到75%的保护率,而A型产气荚膜梭菌的抗体滴度下降稍快,6个月时达75%的保护率。实验室部分为鹿田间试验奠定基础。C型产气荚膜梭菌产生的主要毒力因子为β毒素,所以本试验进一步构建了β毒素基因的重组质粒,然后对β毒素基因进行克隆和核苷酸序列测定,经分析,结果与β毒素基因标准序列相一致,从而为将来研制α-β融合蛋白基因工程苗奠定了基础。
参考文献：
[1]. 鹿出血性肠炎疫苗研制及产气荚膜梭菌α毒素基因序列分析[D]. 郭宏伟. 山西农业大学. 2004
[2]. 鹿出血性肠炎疫苗研制及魏氏梭菌β毒素基因序列分析[D]. 赵立峰. 山西农业大学. 2005