导读:本文包含了轴突运输论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:轴突,蛋白,突触,神经,线粒体,病毒,弥漫性。
轴突运输论文文献综述
杨菁,张从利[1]（2018）在《突触可塑性和轴突运输在痛觉过敏中的作用》一文中研究指出目的:从突触可塑性和轴突运输探究坐骨神经损伤大鼠模型痛觉过敏的机制。方法:采用坐骨神经慢性压迫性损伤(chronic compression injury,CCI)诱导大鼠外周神经性疼痛,检测CCI后大鼠机械性痛觉过敏、冷触诱发痛以及热痛觉过敏的指标。实时定量PCR检测CCI后14 d及21 d的大鼠同侧L4-6背根神经节中GAP-43、NCAM、PSD-95、Syp、kinesin和dynein的表达。结果:CCI术后14 d大鼠的机械性痛觉过敏、冷触诱发痛以及热痛觉过敏指标均降低(P均<0. 01)。CCI组术后14 d GAP-43和NCAM的表达增加(P均<0. 01),PSD-95、Syp、kinesin和dynein的表达均降低(P <0. 05)。术后21 d GAP-43和NCAM的表达均下降(P <0. 01,P <0. 05),PSD-95、Syp、kinesin和dynein的表达均增加(P <0. 05)。结论:坐骨神经损伤14 d内,主要以修复神经元结构为主。而损伤14 d后,兴奋的传递以及轴突运输启动。(本文来源于《川北医学院学报》期刊2018年05期）
康清梅[2]（2017）在《Curcumin通过增强Rab7表达促进自噬体的轴突运输》一文中研究指出目的:阿尔茨海默病(AD)是一种起病隐匿的中枢神经系统退行性变性疾病。自噬作为一种真核细胞内重要的蛋白质降解途径,与AD的发生发展密切相关。自噬体大量堆积在轴突末端不能与溶酶体结合不仅影响了Aβ的代谢,更容易引起自噬应激导致神经细胞死亡。Rab7是一种小GTP酶,在自噬体的成熟以及自噬体与溶酶体的融合中都发挥着重要作用。研究表明,curcumin(姜黄素)作为一种多酚类植物化合物,在AD中起神经保护作用,但其作用机制尚有待进一步研究。本研究拟通过体外研究的方法,首先验证curcumin减少Aβ的沉积以及对AD的神经保护作用;再观察curcumin对自噬及自噬流的影响;紧接着进一步研究其对自噬体轴突运输的作用;最后探讨其作用机制是否与Rab7的表达有关。本研究选择一个新的视角探讨curcumin对AD的作用机制,为AD的治疗提供新的靶点、新的思路。方法:首先将细胞分为4组:WT组(N2a/WT细胞)、Control组(N2a/APP695swe细胞)、Sham组(经5μM DMSO溶液处理24h的N2a/APP695swe细胞)、Curcumin组(经5μM curcumin溶液处理24h的N2a/APP695swe细胞)。流式细胞术用于检测各组细胞凋亡率和线粒体膜电位的变化。ELISA实验用于检测各组细胞上清液中Aβ的表达。通过透射电镜和激光共聚焦显微镜进一步观察各组细胞中自噬体及自噬溶酶体数量的变化,并运用Western Blot检测LC3II、SQSTM1、Beclin1、Atg7、Atg16L1、Dynein、KIF3B以及Rab7的表达。q RT-PCR用于检测Rab7在分子水平的表达。然后进一步在N2a/APP695swe细胞中转染pc DNA3.1、pc DNA3.1-Rab7、NC-si RNA、Rab7-si RNA后,将细胞分为5组:Control组、pc DNA3.1组、pc DNA3.1-Rab7组、NC-si RNA组、Rab7-si RNA组,再次用流式细胞术检测各组中细胞凋亡率和线粒体膜电位的变化,ELISA检测各组中Aβ的表达,透射电镜和激光共聚焦显微镜观察各组细胞中自噬体及自噬溶酶体数量的变化,Western Blot检测LC3II、SQSTM1、Dynein、KIF3B蛋白的表达情况。结果:与Control组相比,经curcumin处理细胞24h后,细胞凋亡率明显降低(P=0.000),线粒体膜电位升高(P=0.000),细胞上清液中Aβ的含量减少(P=0.000);透射电镜和激光共聚焦显微镜均显示自噬体增加,且自噬溶酶体数量也增加;Western Blot检测发现LC3II、Beclin1、Atg7、Atg16L1、Dynein以及Rab7的表达均增多(P=0.000;P=0.000;P=0.000;P=0.003;P=0.000;P=0.000),而SQSTM1和KIF3B的表达降低(P=0.000;P=0.000);q RT-PCR结果显示Rab7在m RNA水平表达也有所增加(P=0.000)。在N2a/APP695swe细胞中转染Rab7过表达载体后,与Control组相比,细胞凋亡率降低(P=0.000),线粒体膜电位增加(P=0.000),细胞上清液中Aβ的含量减少(P=0.000);透射电镜和激光共聚焦显微镜结果显示自噬体和自噬溶酶体数量也增加;Western Blot结果表明虽然LC3II的表达无明显差异(P=0.865),但SQSTM1表达明显减少(P=0.000),Dynein和KIF3B的表达有所增加(P=0.000;P=0.000)。在N2a/APP695swe细胞中转染Rab7干扰RNA后,其结果与转染Rab7过表达载体相反。结论:Curcumin可以降低N2a/APP695swe细胞凋亡率、升高线粒体膜电位、减少Aβ的产生、并增强自噬体的轴突运输从而促进自噬及自噬流,其机制可能与调节Rab7的表达有关。(本文来源于《重庆医科大学》期刊2017-05-01）
徐旸[3]（2015）在《在位活体成像研究线粒体动态运输与斑马鱼轴突再生的关系》一文中研究指出线粒体在神经元中扮演关键的角色,它不仅能够供应能量,平衡氧化还原反应,而且还可以调节钙离子的稳定。考虑到神经元具有复杂的结构与多变的形态,所以线粒体在神经元中合理的空间分布及运动变化对于神经元功能的发挥极为重要。到目前为止,仍然没有一个能够在脊椎动物脊髓内部活体成像线粒体动态变化的模型。为了解决这个问题,我们创建了一套新型模型,利用斑马鱼M-cell(毛特纳细胞)活体研究其内部线粒体的动态运输。联合单细胞电转与GAL4-UAS系统,我们把聚焦点放在了 M-cell轴突内的线粒体上。首先,为了证明该模型适合研究线粒体动态运输,我们使用nocodazole处理幼鱼检验到nocodazole能够阻碍轴突内线粒体的迁移。此外,通过轴突毁损,我们发现M-cell轴突具有再生能力,这一现象为我们提供了良好机遇去研究线粒体动态运输与轴突再生之间的关系。从我们初步的实验结果分析,轴突损伤后能够引起线粒体运输的变化,同时在那些再生能力旺盛的轴突内伴随有线粒体运动比例的增加。最后,我们尝试在基因组同个位点下,将原有转基因斑马鱼品系的EGFP转变为可以表达mito-DsRed2或者DsRed2荧光蛋白的转基因品系。综上可见,我们创立的方法能够十分有效地在活体状态下,通过成像观测中枢神经系统中再生轴突内部线粒体的动态运输过程。(本文来源于《中国科学技术大学》期刊2015-10-01）
解渊,储佺兵[4]（2015）在《逆向轴突运输障碍与肌萎缩侧索硬化》一文中研究指出肌萎缩侧索硬化(ALS)是运动神经元变性疾病,特异性损害运动神经细胞。典型临床表现包括肌肉无力、强直以及萎缩,自然病程约2~5年。大部分患者为散发病例,10%的患者属于家族遗传性。迄今为止还没有治疗肌萎缩侧索硬化的有效方法。ALS具体发病机制尚不明确。神经营养因子等经逆向轴突运输由神经末梢输送到神经元胞体,维持神经细胞的存活及功能。在ALS患者及动物模型中都发现了逆向轴(本文来源于《临床神经病学杂志》期刊2015年02期）
邹丽芳,黄安,梁尚栋[5]（2015）在《神经轴突中信号转导内体运输的研究方法》一文中研究指出神经元之间的信息交流及其生长发育与轴突运输密切相关。轴突运输中信号分子通过激活相关受体形成配体-受体复合物,在细胞内吞作用下进入内体,形成神经元轴突中的胞内吞细胞器。胞内吞细胞器从轴突运输至胞体,这种细胞器称为信号转导内体。内体运输受损影响神经元的生存,了解轴突及内体运输这一过程的研究方法将有助于寻找相关疾病的病因和防治方法。该文就神经元轴突及内体运输的研究方法进行综述。(本文来源于《中国药理学通报》期刊2015年03期）
尹贻鑫[6]（2013）在《伪狂犬病毒沿神经元细胞轴突运输的初步研究》一文中研究指出伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)属于α疱疹病毒亚科,具有嗜神经性,能够侵染宿主后在外周神经系统建立潜伏感染,使宿主终生带毒。PRV病毒粒子由内到外分为双链DNA、衣壳、被膜蛋白、囊膜蛋白四层,其中被膜蛋白又分为内层被膜蛋白和外层被膜蛋白,内层被膜蛋白一般与核衣壳连接,外层被膜蛋白一般与膜蛋白的胞浆区相连接。病毒侵入神经元的过程与侵染大多数培养的传代细胞的过程很相似。首先,在外周神经系统的轴突末端病毒的囊膜蛋白与细胞膜融合,然后核衣壳沿着轴突微管逆行运输到细胞体的细胞核。同时内层被膜蛋白(UL36、 UL37)和US3也能随核衣壳逆行运输至细胞核。但是,病毒粒子由神经元细胞体沿轴突顺行运输至轴突远端的机制存在很大争议,一些学者认为病毒在神经元细胞体完成组装形成成熟病毒粒子沿轴突运输至轴突末端释放,另一部分学者认为病毒的核衣壳和囊膜蛋白分别沿轴突运输至轴突末端,然后在轴突末端完成组装释放。最近发现在海马神经元的轴突起始段(axon initial segment, AIS)的胞浆中存在一个由肌动蛋白和锚定蛋白G构成的“分子筛”(the cytoplasmic filter),像滤网一样阻止一些大分子物质(70KD)在轴突和胞体之间的扩散,但可允许小分子物质(10KD)和某些依赖特定马达蛋白转运的膜蛋白通过,膜蛋白的转运与马达蛋白的驱动力强弱和膜蛋白-马达蛋白复合体的运输效能有关。那么PRV沿轴突逆行运输过程中,病毒蛋白进入细胞体是否也受到神经元“分子筛”的影响?根据以上研究背景,本试验首先构建PRV gB-RFP、PRV VP16-EGFP、PRV EGFP-VP1/2、PRV EGFP-VP26四个重组示踪病毒,观察示踪病毒在轴突中的运输情况。然后在微流体系统(microfluidic chamber system)中体外原代培养鸡胚的脊髓背根神经节细胞,在轴突端接种示踪病毒共聚焦显微镜下观察病毒进入细胞体的情况。主要工作包括：1.示踪病毒的构建计划在PRV的囊膜蛋白gB(UL27)、外层被膜蛋白VP16(UL48)、内层被膜蛋白VP1/2(UL36)、衣壳蛋白VP26(UL35)的C端或N端插入荧光标记基因EGFP或RFP构建构建PRV gB-RFP、PRV VP16-EGFP、PRV EGFP-VP1/2、PRV EGFP-VP26重组示踪病毒。首先以PRV Ea株的野毒基因组为模板分别扩增UL27、UL48、UL36、 UL35基因的上下游同源臂,同时分别以pEGFP-C1和pRFP-C1质粒为模板扩增EGFP和RFP,依次连入pcDNA3.1中构建重组转移质粒。然后与PRV的野毒基因组通过脂质体共转染的方法获得重组病毒,通过几轮筛选和纯化获得纯的示踪病毒。然后通过空斑大小和一步法生长曲线比较几种重组毒与野毒的增殖特性,发现示踪病毒所形成的空斑要明显小于野毒形成的,但是增殖曲线没有区别。2.鸡胚脊髓背根神经节细胞的原代培养选取8-12日龄的鸡胚,在解剖显微镜下获取脊髓背根神经节(DRG),直接接种在DMEM无血清培养液(NGF2.5S,20ng/mL)中进行外植体培养,培养7-10天左右进行观察。同样方法在获得脊髓背根神经节后用0.125%的胰酶消化成单个的细胞,先接种在种植培养液中,24h后更换成饲养培养液,在第3天用阿糖胞苷处理抑制非神经细胞的增殖,作用48h后更换新鲜饲养培养液,培养7-10天左右进行观察。通过间接免疫荧光验证所培养的细胞确实是鸡胚脊髓背根神经节细胞。接种重组示踪病毒观察病毒在神经细胞轴突中运输的情况,发现病毒的蛋白沿轴突运输,其运输方向是双向的,并且呈跳跃式运输。3.微流体系统的建立利用微流体系统(microfluidic chamber system)进行原代培养鸡胚脊髓背根神经节细胞,神经元细胞种植在一个隔间(S室)中,轴突通过细微纹沟延伸到另一隔间(N室)中。DRG细胞在S室中培养5天后即可通过细微纹管进入N室。在N室中接种示踪病毒PRV VP16-EGFP2h后,在激光共聚焦显微镜下观察荧光标记蛋白是否进入细胞体,发现在N室和细微纹管中的轴突中可以很明显的观察到VP16-EGFP的移动,但是不能通过进入S室的细胞体中。(本文来源于《华中农业大学》期刊2013-06-01）
丁鸭锁,鲁晓杰[7]（2011）在《驱动蛋白在弥漫性轴突损伤后表达情况的改变及与轴突运输障碍的相关性分析》一文中研究指出目的神经元的轴突运输离不开微管和分子马达。驱动蛋白是轴突正向运输的主要运输马达,其在弥漫性轴突损伤(DAI)后的表达情况是否改变尚无报道。本实验主要研究驱动蛋白在DAI后表达情况并将这种变化和轴突运输障碍进行相关性研究。方法通过重物坠落法建立大鼠弥漫性轴突损伤模型,分为对照组及DAI后30 min;3 h;12h;24 h;72h和7d组,每组12只SD大鼠。采用Western Blot法测定kinesin蛋白的定量表达,以免疫组化方法对kinesin进行定位研究;用透射电镜观察肿胀轴突的变化情况;对APP蛋白也是采用Western Blot和免疫组化的方法分别进行定量和定位研究。(本文来源于《2011中华医学会神经外科学学术会议论文汇编》期刊2011-10-13）
于胜波,宫瑾,迟彦艳,张健飞,郑楠[8]（2011）在《Aβ引起大鼠海马自噬体异常及其轴突运输障碍》一文中研究指出本文通过SD大鼠海马内给药,电镜观察,探讨Aβ和神经元自噬异常关系。在Aβ大鼠海马中,神经元旁和附近可见结构异常的突触终末内含有单层膜或双层膜包裹的囊泡状结构(囊泡体),囊泡内含有电子密度高低不等的无定形结构。树突内也存在电子密度多样、大小不一的囊泡体,并可见胞浆成分被双层膜包裹的初始状态,囊泡状体还可以取代树突的正常成分而聚集在树突内。轴索出现了不同程度的肿胀,髓鞘变薄,肿胀部位的正常结构消失,囊泡状体聚集,囊泡内结构从清亮到致密不等,囊泡膜单层或双层。本文观察到的大鼠海马内的单层或双层膜包裹的电子密度呈异质性的囊泡体从形态上可以认定为自噬体。自噬体是胞浆某一区域或是细胞器被双层膜包裹而成的囊泡体,双层膜囊泡进一步演变成单层膜囊泡标志自噬体成熟。自噬体的识别有其经典的形态学标准:直径大于0.5μm,双层被膜,腔内结构呈异质性。本实验观察到,自噬体形成初始时切面最大径在0.6～0.9μm之间。在本实验中,自噬体出现在Aβ注射点附近,主要位于突触终末、轴突和树突内,神经元胞体内未见到。另外,溶酶体主要位于神经元的胞体的细胞核周围,可以推测,在外源性Aβ的作用下自噬体主要产生在代谢旺盛、易受影响的突触终末内,并沿着神经突起向胞体运输,但由于自噬体产生过多或者运输障碍使其积聚在突起的某个部位,随后产生营养不良性病变。(本文来源于《中国解剖学会2011年年会论文文摘汇编》期刊2011-08-08）
沈建英,徐子辉,贺军,李和[9]（2009）在《HAP1促进神经细丝和致密核心大囊泡的轴突运输》一文中研究指出亨廷顿蛋白相关蛋白1(huntingtin-associated protein 1,HAP1)参与细胞内的物质运输,但具体作用及机制不明确。在本实验中,通过荧光漂白恢复实验观察到,在N2a细胞中,HAP1促进神经细丝(neurofilamensNFs)的轴突运输;在PC12细胞中,HAP1促进致密核心大囊泡(large dense cored vesicles LDCVs)的轴突运输,但对类突触小囊泡(Synaptic vesicle-like microvesicle SLMVs)的轴突运输没有作用。免疫共沉淀研究发现,HAP1与糖原合成酶3β(Glycogen synthase 3 betaGSK-3β)具有相互作用。HAP1过表达时N2a和PC12细胞中丝氨9/21位点磷酸化的GSK-3β(p-GSK-3β,即失活的GSK-3β)显着增加,磷酸化的神经细丝重链(p-NFH)显着减少,而在沉默HAP1后则相反。GSK-3β是一种广泛表达的丝氨酸/苏氨酸蛋白酶,能磷酸化驱动蛋白轻链(kinesinlightchains KLCs)并抑制驱动蛋白介导的轴突运输。驱动蛋白是一种重要的动力蛋白,介导神经元内沿微管进行的顺向轴突运输。驱动蛋白磷酸化时,其与被运输物质间的结合力减弱,被运输物质易与驱动蛋白分离,导致顺向快速运输受阻。我们的研究结果显示HAP1可能通过抑制GSK-3β的活性,减少KLCs的磷酸化,增强驱动蛋白与NFs和LDCVs间的结合力,从而促进其在神经元轴突中的运输。(本文来源于《Proceedings of the 8th Biennial Conference of the Chinese Society for Neuroscience》期刊2009-11-07）
王玥[10]（2008）在《锌离子在交感干的轴突运输以及锌缺乏对交感干结构影响的研究》一文中研究指出前言锌是人体内重要的微量元素之一,是正常生长发育、基因表达、蛋白质代谢、免疫功能等过程中所必需的元素。近年来,人们对锌与神经系统生长发育以及功能调节之间的关系进行了广泛的研究,发现锌缺乏可以引起神经系统多种疾病的发生。在中枢神经系统中,大部分锌离子与蛋白质结合并维持蛋白质分子的叁级结构,小部分的锌离子以游离方式存在于含锌神经元(zinc-enriched neuron,ZEN)轴突终末的突触小泡中。在突触活动中锌离子与谷氨酸、γ-氨基丁酸(gamma-aminobutyric acid,GABA)等神经递质共同释放到突触间隙,参与学习和记忆的形成、神经系统发育以及运动和感觉功能的调节。锌离子也存在于周围神经系统中,有文献报道几乎所有的颈上神经节(superior cervical ganglia,SCG)神经元中均有锌离子分布,电镜观察游离锌离子主要聚集在颈上神经节交感节后神经元核周的高尔基复合体和囊泡内,锌离子可能参与了神经元内某些含锌蛋白质的合成与组装,并维持某些蛋白质的叁级结构。在脊神经节以及坐骨神经中锌离子也有广泛分布。然而,锌离子在周围神经系统神经元内的聚集转运机制以及功能尚不清楚。本研究对锌离子在交感干内的轴突运输以及锌缺乏对交感干神经纤维结构的影响进行了详细的研究。材料与方法1、Wistar大鼠,体重约150g,雌雄不限,随机分成3组。(1)第一组进行单侧交感干钳夹手术,对侧未做手术作为对照,分别使其术后存活2、4、6小时,在此期间注射硒化钠,然后灌流取材,采用金属自显影(AMG)的方法观察锌离子在交感干中的轴突运输情况。(2)第二组采用与上述同样的手术方法,灌流取材后应用AMG电镜的方法观察锌离子在交感干中的分布情况。(3)第叁组大鼠钳夹单侧交感干,在靠近钳夹点的上方注射硒化钠,同样另一侧未钳夹作为对照,24h后灌流取下两侧颈上神经节进行AMG染色,观察交感干中锌离子的逆行运输。2、生后3周的CD-1小鼠随机分为正常组和缺锌组(ZnD)组,分别给予正常饲料和缺锌饲料喂养,5周后灌流取交感干,应用常规电镜技术观察交感干的结构改变,并在光镜下比较有髓神经纤维和无髓神经纤维的数量变化,应用t检验比较两组数据之间的差异。实验结果1、交感干钳夹后,AMG实验结果中可以看到在两个钳夹点的远端和近端有AMG阳性颗粒的蓄积,此颗粒主要位于靠近钳夹点处,但是在两个钳夹点之间没有阳性颗粒的存在,并且AMG阳性颗粒随着手术后大鼠存活时间的延长而增多。2、AMG电镜结果显示在无髓神经纤维中有锌离子的AMG阳性反应产物。3、在交感干逆行运输的AMG实验结果中,光镜下观察颈上神经节中仅有约5%的神经元有锌离子阳性反应产物,弥散分布于神经元的胞质内,细胞核周围染色较深,细胞核未见阳性反应,一些神经元突起内可见点线状的AMG阳性颗粒。4、锌缺乏后导致小鼠交感干超微结构的改变,表现为髓鞘变性、排列不规则、界限不清楚,神经纤维束膜萎陷,神经轴突的横截面积减小,形态异常的神经纤维数量增多。光镜下观察,缺锌小鼠交感干有髓神经纤维的数量减少,无髓神经纤维增多。讨论有文献报道,坐骨神经钳夹后通过AMG染色方法观察到AMG阳性反应颗粒存在于钳夹点两端,说明坐骨神经钳夹点的远侧端和近侧端有锌离子的蓄积,提示在坐骨神经中存在锌离子的轴突运输,电镜下观察缺锌情况下的坐骨神经超微结构,发现有髓神经纤维的数量和表面积与正常饲养的动物相比都有所减少,髓鞘破坏变得不规则,并且发生变性,这些都证明锌可能对周围神经的相关功能具有一定的作用,因而我们推测交感干中也有锌离子的运输,并且对其结构的保持及功能的发挥起到关键性作用。应用AMG和AMG电镜技术,本实验证实了游离锌离子在交感干的轴突内进行轴突运输。研究发现,钳夹手术后,注射硒化钠,在钳夹点的两侧端均有不同程度的锌离子蓄积,并且有随着手术后存活时间的延长锌离子蓄积增多的现象,提示大多数或全部交感节后含锌神经元胞体内的锌离子可能通过顺行运输到达轴突终末并参与某些生理功能的调节,而且也有锌离子由轴突终末向胞体逆行运输。应用AMG技术检测交感干注射硒酸钠24h后,锌离子在颈上神经节中含锌神经元的表达,光镜下结果显示,颈上神经节中约有5%神经元有AMG阳性反应产物,此结果进一步证实了锌离子在交感干中进行逆行的轴突运输。结论1、交感干存在着锌离子的顺行和逆行运输,在手术后的大鼠交感干的染色切片中可以看到均匀的AMG阳性反应。2、缺锌后交感干结构和数量的变化说明锌离子可能对周围神经纤维结构的保持及功能的发挥起到重要的作用。(本文来源于《中国医科大学》期刊2008-04-01）
轴突运输论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:阿尔茨海默病(AD)是一种起病隐匿的中枢神经系统退行性变性疾病。自噬作为一种真核细胞内重要的蛋白质降解途径,与AD的发生发展密切相关。自噬体大量堆积在轴突末端不能与溶酶体结合不仅影响了Aβ的代谢,更容易引起自噬应激导致神经细胞死亡。Rab7是一种小GTP酶,在自噬体的成熟以及自噬体与溶酶体的融合中都发挥着重要作用。研究表明,curcumin(姜黄素)作为一种多酚类植物化合物,在AD中起神经保护作用,但其作用机制尚有待进一步研究。本研究拟通过体外研究的方法,首先验证curcumin减少Aβ的沉积以及对AD的神经保护作用;再观察curcumin对自噬及自噬流的影响;紧接着进一步研究其对自噬体轴突运输的作用;最后探讨其作用机制是否与Rab7的表达有关。本研究选择一个新的视角探讨curcumin对AD的作用机制,为AD的治疗提供新的靶点、新的思路。方法:首先将细胞分为4组:WT组(N2a/WT细胞)、Control组(N2a/APP695swe细胞)、Sham组(经5μM DMSO溶液处理24h的N2a/APP695swe细胞)、Curcumin组(经5μM curcumin溶液处理24h的N2a/APP695swe细胞)。流式细胞术用于检测各组细胞凋亡率和线粒体膜电位的变化。ELISA实验用于检测各组细胞上清液中Aβ的表达。通过透射电镜和激光共聚焦显微镜进一步观察各组细胞中自噬体及自噬溶酶体数量的变化,并运用Western Blot检测LC3II、SQSTM1、Beclin1、Atg7、Atg16L1、Dynein、KIF3B以及Rab7的表达。q RT-PCR用于检测Rab7在分子水平的表达。然后进一步在N2a/APP695swe细胞中转染pc DNA3.1、pc DNA3.1-Rab7、NC-si RNA、Rab7-si RNA后,将细胞分为5组:Control组、pc DNA3.1组、pc DNA3.1-Rab7组、NC-si RNA组、Rab7-si RNA组,再次用流式细胞术检测各组中细胞凋亡率和线粒体膜电位的变化,ELISA检测各组中Aβ的表达,透射电镜和激光共聚焦显微镜观察各组细胞中自噬体及自噬溶酶体数量的变化,Western Blot检测LC3II、SQSTM1、Dynein、KIF3B蛋白的表达情况。结果:与Control组相比,经curcumin处理细胞24h后,细胞凋亡率明显降低(P=0.000),线粒体膜电位升高(P=0.000),细胞上清液中Aβ的含量减少(P=0.000);透射电镜和激光共聚焦显微镜均显示自噬体增加,且自噬溶酶体数量也增加;Western Blot检测发现LC3II、Beclin1、Atg7、Atg16L1、Dynein以及Rab7的表达均增多(P=0.000;P=0.000;P=0.000;P=0.003;P=0.000;P=0.000),而SQSTM1和KIF3B的表达降低(P=0.000;P=0.000);q RT-PCR结果显示Rab7在m RNA水平表达也有所增加(P=0.000)。在N2a/APP695swe细胞中转染Rab7过表达载体后,与Control组相比,细胞凋亡率降低(P=0.000),线粒体膜电位增加(P=0.000),细胞上清液中Aβ的含量减少(P=0.000);透射电镜和激光共聚焦显微镜结果显示自噬体和自噬溶酶体数量也增加;Western Blot结果表明虽然LC3II的表达无明显差异(P=0.865),但SQSTM1表达明显减少(P=0.000),Dynein和KIF3B的表达有所增加(P=0.000;P=0.000)。在N2a/APP695swe细胞中转染Rab7干扰RNA后,其结果与转染Rab7过表达载体相反。结论:Curcumin可以降低N2a/APP695swe细胞凋亡率、升高线粒体膜电位、减少Aβ的产生、并增强自噬体的轴突运输从而促进自噬及自噬流,其机制可能与调节Rab7的表达有关。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
轴突运输论文参考文献
[1].杨菁,张从利.突触可塑性和轴突运输在痛觉过敏中的作用[J].川北医学院学报.2018
[2].康清梅.Curcumin通过增强Rab7表达促进自噬体的轴突运输[D].重庆医科大学.2017
[3].徐旸.在位活体成像研究线粒体动态运输与斑马鱼轴突再生的关系[D].中国科学技术大学.2015
[4].解渊,储佺兵.逆向轴突运输障碍与肌萎缩侧索硬化[J].临床神经病学杂志.2015
[5].邹丽芳,黄安,梁尚栋.神经轴突中信号转导内体运输的研究方法[J].中国药理学通报.2015
[6].尹贻鑫.伪狂犬病毒沿神经元细胞轴突运输的初步研究[D].华中农业大学.2013
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