导读:本文包含了类人胶原蛋白论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:胶原蛋白,凝胶,瘢痕,敷料,粗大,屏障,毛孔。
类人胶原蛋白论文文献综述
郭亚媛[1]（2019）在《重组人胶原蛋白水凝胶复合成纤维细胞修复皮肤缺损的实验研究》一文中研究指出研究背景:修复由外界创伤、糖尿病溃疡、皮肤癌切除等引起的大面积全层皮肤缺损是临床上面临的巨大挑战。目前,组织工程皮肤已成为修复大面积全层皮肤缺损的重要方法之一。组织工程皮肤是将种子细胞接种在生物支架上形成的一种皮肤替代物。理想的组织工程皮肤一方面需要给伤口提供屏障以避免伤口感染和液体流失,另一方面还能促进细胞分泌各种生长因子以利于皮肤再生。组织工程皮肤所涉及的材料是现在研究的热点,主要分为合成材料和天然材料。合成材料的机械强度高,柔韧性好且易加工,但是降解过程中所产生的降解产物会在体内堆积,且排出体外的过程比较缓慢。而天然材料的降解产物易于代谢,具有良好的生物相容性,如胶原蛋白己广泛应用于组织工程皮肤(如Dermagraft,Transcyte和Apligraf)。但是,现有的胶原蛋白组织工程产品中的胶原多提取于动物组织,具有潜在的病原风险和批次间性质不稳定的缺点。重组胶原蛋白则可以在保持天然胶原良好生物相容性的基础上,克服动物胶原潜在病原性和批次间不稳定的缺点。方法和结果:本研究采用谷氨酰胺转移酶(Transglutaminase,TG)交联重组人胶原蛋白(Recombinant human collagen,rHC),同时加入小鼠成纤维细胞,制备出富含成纤维细胞的重组人胶原蛋白水凝胶(rHC/TG-cell水凝胶),用于小鼠皮肤缺损修复研究。首先,通过细胞增殖,细胞迁移和实时定量PCR(RT-PCR)以评估rHC的生物活性。结果表明:重组人胶原蛋白具有良好的细胞相容性并且可以刺激成纤维细胞分泌各种促进伤口愈合的生长因子。然后,通过使用扫描电子显微镜(Scanning electron microscope,SEM)和流变仪检测了 rHC/TG水凝胶的理化性质。结果表明:rHC/TG水凝胶具有多孔结构、适宜的机械强度,能够复合细胞并能使细胞保持活力。最后,通过建立小鼠皮肤缺损模型评估rHC/TG-cell水凝胶对皮肤缺损修复的影响。结果表明:rHC/TG-cell水凝胶对皮肤缺损修复有促进作用,能够使缺损处的皮肤在短时间内再生。结论:重组人胶原蛋白与谷氨酰胺转移酶交联获得的rHC/TG水凝胶能够负载成纤维细胞,并能为细胞提供湿润、适宜的环境,促进成纤维细胞分泌细胞生长所需的生长因子,进而促进伤口愈合。这为rHC/TG-cell水凝胶进一步用于临床奠定了基础。(本文来源于《西北大学》期刊2019-06-01）
刘彤[2]（2019）在《重组人胶原蛋白水凝胶和人工真皮分别作为微粒皮移植覆盖物修复全层皮肤缺损的实验研究》一文中研究指出研究背景烧伤和创伤导致的大面积全层皮肤缺损,会引起一系列危及生命的严重后果,因此,快速修复缺损创面至关重要。目前,自体刃厚皮肤移植仍是修复烧伤导致的大面积皮肤缺损的标准治疗方法。大面积烧伤患者自体皮源缺乏,往往需要通过将刃厚皮处理成微粒皮来扩大植皮的扩展比例,但这是以牺牲创面愈合质量为代价的。胶原蛋白是细胞外基质的重要组成成分,与合成材料相比,在促进创面愈合方面具有更优良的生物特性。目前,胶原蛋白大多是从动物结缔组织提取而来,存在一定的病毒隐患,且成本高产量低。将人类胶原蛋白基因导入基因工程菌,通过基因工程技术获取的重组人胶原蛋白安全性高,成本低,能大规模产业化生产。此外,重组胶原蛋白增加了亲水基团,水溶性提高,可制备出胶原蛋白浓度较高的水凝胶。而水凝胶材料的保水性能又能为创面提供湿润的愈合环境,从而加快创面愈合速度,改善愈合质量。由于具备优良的生物特性,胶原蛋白也是制备人工真皮的主要材料。人工真皮主要用来充当真皮修复过程中引导细胞迁移增殖和胶原排列的支架,帮助完成真皮的重构和血管化,可加快创面愈合速度,改善创面愈合后皮肤弹性、柔软性及机械耐磨性。但目前人工真皮用于全层创面修复需要经过2次手术,增加了病人的痛苦和负担。本研究首先以重组人胶原蛋白为原料制备水凝胶并进行相关性能检测,并选用以猪肌腱胶原蛋白为原料的皮耐克作为人工真皮的代表,然后将该水凝胶和人工真皮皮耐克两种胶原材料分别作为微粒皮移植覆盖物用于修复大鼠全层皮肤缺损创面,并进行创面愈合速度和愈合质量的疗效评价。目的本研究拟制备以重组人胶原蛋白为原料的水凝胶,选用以猪肌腱胶原蛋白为原料的皮耐克作为人工真皮的代表,探索该水凝胶和人工真皮皮耐克分别作为微粒皮移植覆盖物修复全层皮肤缺损创面的治疗效果,为临床修复全层皮肤缺损创面提供参考。方法1.重组人胶原蛋白水凝胶的制备及表征1.1以DMEM/F12培养基配制浓度为10%的胶原蛋白溶液,通过海藻酸盐与Ca2+反应交联得到胶原蛋白水凝胶;1.2观察胶原蛋白溶液成胶后的状态;扫描电镜观察水凝胶微观结构;1.3对水凝胶体外溶胀和降解性能进行检测;1.4将水凝胶包埋在大鼠皮下,观察体内降解速度。2.重组人胶原蛋白水凝胶对部分创面愈合相关细胞的影响2.1CCK-8法评价水凝胶浸提液对Ha Ca T细胞、人成纤维细胞、HUVEC3种细胞的毒性;2.2细胞划痕实验和Transwell实验评价水凝胶浸提液对3种细胞迁移能力的影响。3.重组人胶原蛋白水凝胶与人工真皮皮耐克作为微粒皮覆盖物修复大鼠全层皮肤缺损创面的疗效评价3.1创面愈合速度制备SD大鼠全层皮肤缺损创面模型,移植微粒皮后分别以胶原蛋白水凝胶、人工真皮皮耐克、凡士林纱布作为覆盖物修复创面,以凡士林纱布组作为对照,比较创面愈合速度。3.2创面愈合质量3.2.1创面真皮层形成术后第7天,14天,21天,35天进行创面取材。HE和Masson染色比较各组创面真皮层形成情况,并与正常皮肤组织比较;3.2.2创面基底膜形成Ⅳ型胶原蛋白免疫组化染色比较各组创面基底膜形成情况,并与正常皮肤组织比较;3.2.3创面胶原蛋白沉积通过苦味酸天狼猩红染色、RT-q PCR、WB检测术后第35天创面上皮化后各组胶原蛋白沉积情况,并与正常皮肤组织比较;3.2.4创面TGFβ1、TGFβ3、α-SMA的表达通过免疫组化染色、RT-q PCR、WB检测术后第35天创面上皮化后各组TGFβ1、TGFβ3、α-SMA的表达情况。3.3促进创面愈合的机制研究3.3.1创面细胞增殖速度Ki67免疫组化染色比较各组创面细胞增殖情况,并与正常皮肤组织比较;3.3.2创面毛细血管新生CD31免疫组化染色比较各组创面毛细血管新生情况;3.3.3创面VEGF的表达通过免疫组化染色、RT-q PCR、WB检测早期各组创面VEGF表达情况。3.4 HE和Masson染色观察胶原蛋白水凝胶和人工真皮皮耐克分别作为微粒皮覆盖物时促进全层创面修复的过程。结果1.重组人胶原蛋白水凝胶的制备及表征成功制备出浓度为10%的胶原蛋白水凝胶;电镜下可观察到多孔海绵状结构;在60min达到溶胀平衡,最大溶胀度为1800%;在体外5-6天时降解速度最快,7天降解完全;在体内5天降解约40%,10天降解约80%,15天降解完全。2.重组人胶原蛋白水凝胶对部分创面愈合相关细胞的影响水凝胶浸提液对3种细胞毒性作用均较小,可促进Ha Ca T细胞增殖,成纤维细胞存活率在90%以上,HUVEC存活率在70%以上;细胞划痕实验和Transwell实验均证实水凝胶浸提液可促进3种细胞的迁移。3.重组人胶原蛋白水凝胶与人工真皮皮耐克作为微粒皮覆盖物修复大鼠全层皮肤缺损创面的疗效评价3.1创面愈合速度术后7天、14天、21天水凝胶和皮耐克覆盖微粒皮组创面愈合率均高于凡士林纱布组,差异有统计学意义,水凝胶组与皮耐克组无差异。3.2创面愈合质量3.2.1创面真皮层形成术后21天,水凝胶和皮耐克覆盖微粒皮组均有真皮组织形成,第35天真皮组织较为成熟,与正常皮肤相近,而凡士林纱布组第35天为致密胶原沉积的瘢痕组织;3.2.2创面基底膜形成术后21天,水凝胶和皮耐克覆盖微粒皮组均有连续的Ⅳ型胶原蛋白阳性基底膜样结构形成,第35天基底膜逐渐连续,而凡士林纱布组第35天仍无基底膜形成;3.2.3创面胶原蛋白沉积苦味酸天狼猩红染色、RT-q PCR、WB证实术后35天,水凝胶和皮耐克覆盖微粒皮组创面胶原沉积均少于凡士林纱布组,差异有统计学意义,水凝胶组与皮耐克组无差异;3.2.4创面TGFβ1、TGFβ3、α-SMA的表达免疫组化染色、RT-q PCR、WB证实术后35天,水凝胶和皮耐克覆盖微粒皮组创面TGFβ1、α-SMA表达水平均低于凡士林纱布组,TGFβ3表达水平均高于凡士林纱布组,差异有统计学意义。3.3促进创面愈合的机制研究3.3.1创面细胞增殖速度术后7天、14天、21天水凝胶和皮耐克覆盖微粒皮组创面Ki67阳性(提示高增殖活性)细胞数量均高于凡士林纱布组,差异有统计学意义,水凝胶组与皮耐克组无差异;3.3.2创面毛细血管新生术后7天,皮耐克覆盖微粒皮组创面CD31阳性新生毛细血管数量高于水凝胶组和凡士林纱布组,差异有统计学意义;3.3.3创面VEGF的表达免疫组化染色、RT-q PCR、WB证实皮耐克覆盖微粒皮组术后7天创面VEGF表达水平高于水凝胶组和凡士林纱布组,差异有统计学意义。3.4通过对术后7天、14天、21天、35天创面HE和Masson染色的动态观察证实,水凝胶和皮耐克覆盖微粒皮组促进创面愈合的速度较凡士林纱布组快。结论综合本课题全部研究,我们得到如下结论:1、成功制备出重组人胶原蛋白水凝胶,具有较好的吸水保水性能和合适的降解速率,且上述性能均可以通过调节原料成分比例和交联程度进行调整,制备过程简单,成本低;2、将水凝胶浸提液作用于Ha Ca T细胞、成纤维细胞、HUVEC,证明其对上述3种细胞的毒性作用均不明显,还可促进Ha Ca T细胞增殖和上述3种细胞迁移;3、将胶原蛋白水凝胶和人工真皮皮耐克分别作为微粒皮移植覆盖物修复大鼠全层皮肤缺损创面,以凡士林纱布作为对照,证明二者均可以加快创面细胞增殖速度、促进早期创面毛细血管新生、促进早期创面VEGF的表达,从而促进创面愈合;促进真皮组织和基底膜形成,从而提高创面愈合质量;降低TGFβ1和α-SMA的表达水平,增高TGFβ3的表达水平,从而预防创面过度收缩和减轻瘢痕增生。并首次证明人工真皮皮耐克作为微粒皮覆盖物一步法修复全层皮肤缺损创面的可行性。综上所述,本研究制备的胶原蛋白水凝胶,以及将人工真皮皮耐克作为微粒皮覆盖物一步法修复全层皮肤缺损创面的治疗方法,都为临床全层皮肤缺损创面的修复提供了新的思路。(本文来源于《中国人民解放军海军军医大学》期刊2019-05-20）
张玉洁,刘瑜,陈阳美,邹道佩,蒲以欢[3]（2019）在《微针导入类人胶原蛋白联合Q开关1064nm激光治疗黄褐斑疗效观察》一文中研究指出目的:评价微针导入类人胶原蛋白联合Q开关1 064nm激光治疗黄褐斑的疗效。方法:选取门诊黄褐斑患者30例,随机分为两组。激光组:15例,单用Q开关1 064nm激光治疗,1次/月,共治疗6个月;联合组:15例,采用微针导入类人胶原蛋白联合Q开关1 064nm激光治疗,激光治疗1次/月,两次激光治疗中间接受1次微针治疗,两种治疗交替进行,共治疗6个月。结果:治疗结束后,联合组MASI评分下降更明显(P<0.05),联合组总有效率(73.3%)显着高于激光组(53.3%)(P<0.05),联合组的满意率(60.0%)显着高于激光组(33.3%),差异具有统计学意义(P<0.05)。所有患者未见明显不良反应。结论:微针导入类人胶原蛋白联合Q开关1 064nm激光治疗黄褐斑疗效优于单用Q开关1 064nm激光治疗,且能明显提高治疗效果和患者满意度。(本文来源于《中国美容医学》期刊2019年05期）
李雪莉,张春阳[4]（2019）在《微针联合类人胶原蛋白对面部毛孔粗大及皮肤屏障的影响》一文中研究指出目的 To investigate the short-term efficacy and safety about microneedles combined with human-like collagen on facial pore size and skin barrier function.方法 Microneedles can facilitate the external delivery of human-like collagen to the layer below the skin surface,well beyond the stratum corneum,the major skin barrier layer.This study last 10 days,recruit 9 cases,injection therapy wasconducted on day 1 and 7.结果 there were significant differences in facial pores,wrinkles,moisture content and satisfaction between the patients before treatment and after treatment(P<0.05).There was no statistically difference in transepidermal water lose,erythema,and melasma(P>0.05).结论 Microneedles combined with human-like collagen can improve the facial pores,are safe and have no damage to skin barrier.(本文来源于《2019全国中西医结合皮肤性病学术年会论文汇编》期刊2019-03-28）
顾兰秋,吴波,雷雯霓[5]（2019）在《类人胶原蛋白敷料联合中药冷喷治疗颜面再发性皮炎疗效观察》一文中研究指出目的观察类人胶原蛋白敷料联合中药冷喷治疗颜面再发性皮炎的疗效。方法治疗组60例给予类人胶原蛋白敷料每周3次,同时口服皮肤病血毒丸20丸bid,同时采用中药冷喷一天一次;对照组60例,外用0.2%甲硝唑涂擦1日2次,同时口服皮肤病血毒丸20丸bid,1个月为1疗程,1个疗程后评价疗效。结果治疗组和对照组总有效率分别为75.00%和53.33%。结论类人胶原蛋白能抑制和缓解各种原因引起的皮肤炎症反应,促进创面愈合与皮肤的修复,缩短病程,减轻炎症后色素沉着与瘢痕形成的风险。皮肤病血毒丸具有清血解毒,消肿止痒的功效,中药洗剂具有抗菌,消炎,收敛,止痒,止痛的功效,并具有清热凉血,祛风除湿,扶正固本,驱邪之功效。负离子冷喷的低温刺激,可以引起血管收缩,血流减少,有利于水肿和炎症消退。在治疗过程中无明显不良反应发生。提示类人胶原蛋白敷料联合中药冷喷治疗颜面再发性皮炎具有一定优势,临床效果显着,不良反应少、复发率,值得临床推广。(本文来源于《2019全国中西医结合皮肤性病学术年会论文汇编》期刊2019-03-28）
张春阳,李云飞,宋静卉,吴华娟,邓丽娜[6]（2019）在《类人胶原蛋白疤痕修复硅凝胶(可痕TM)治疗增生性瘢痕的研究》一文中研究指出目的评价类人胶原蛋白疤痕修复硅凝胶(可痕~(TM))治疗增生性瘢痕的有效性和安全性。方法选取河南省人民医院门诊符合入选/排除标准的增生性瘢痕患者30例,随机数字表法分为对照组和试验组,对照组采用芭克硅胶软膏,试验组采用类人胶原蛋白疤痕修复硅凝胶(可痕~(TM)),持续应用3月,停止应用产品后3月继续观察效果,整个研究共6月;应用产品后的1月、2月、3月、6月来院随访检查,数码相机拍照,对瘢痕硬度、色泽、柔软度、血管分布进行检测;患者对瘢痕自觉症状进行视觉模拟评分;记录用药期间不良反应和不良事件。结果治疗后瘢痕色泽、柔软度、厚度与治疗前对比,差异具有统计学意义(P<0.05);治疗前后对照组与试验组之间瘢痕色泽、柔软度、厚度对比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论类人胶原蛋白疤痕修复硅凝胶(可痕~(TM))治疗增生性瘢痕有效、安全,且治疗效果与芭克硅胶软膏无差异。(本文来源于《医药论坛杂志》期刊2019年03期）
余丽,刘旭倩[7]（2019）在《类人胶原蛋白在骨组织再生修复中的应用进展》一文中研究指出随着骨退行性疾病发病率的升高,在骨再生修复中对于生物相容性良好的人造骨的应用需求也迅速增加。胶原蛋白作为支架材料为组织工程种子细胞的生长和增殖提供了生长环境,然而,胶原蛋白在骨再生修复中的应用还存在许多缺陷,经过改良后获得的类人胶原蛋白克服了胶原蛋白产生免疫反应、病毒传播风险等缺点,因其具有良好的生物相容性、水溶性、可加工性、低免疫原性、无病毒传播风险等,逐渐成为骨再生修复的理想生物支架材料之一,为组织工程新型支架材料的研究和开发提供了新方法、新方向。(本文来源于《新乡医学院学报》期刊2019年03期）
张春阳,宋静卉,李雪莉,陈红,李云飞[8]（2018）在《微针联合类人胶原蛋白对面部毛孔粗大及皮肤屏障的影响》一文中研究指出目的探讨微针联合类人胶原蛋白对面部毛孔粗大的短期疗效、安全性及其对皮肤屏障功能的影响。方法招募符合入选/排除标准的健康志愿者9例,微针注射类人胶原蛋白修复敷料,注射结束即刻冷敷类人胶原蛋白辅料面膜,8小时后使用类人胶原蛋白安护舒缓喷雾,24小时后涂抹R型类人胶原蛋白修复辅料。本研究为期10天,2次治疗(第1、7天),4次VISIA-CR检测及CK无创皮肤生理功能测试(第1、3、7、10天),观察面部毛孔粗大的改变并测定皮肤屏障功能相关指标,进行治疗前后患者满意度调查。结果治疗前患者面部毛孔、皱纹、水分、患者满意度与治疗后相比,差异具有统计学意义(P<0.05);治疗前经皮水分流失、色斑、红斑与治疗后对比,差异无统计学意义(P> 0.05)。结论微针联合类人胶原蛋白治疗对面部毛孔粗大有改善作用,安全,且对皮肤屏障无损伤。(本文来源于《中国医疗美容》期刊2018年12期）
杨光强,牟宽厚,郭爱琴,王丽娟,赵恩兵[9]（2018）在《地氯雷他定干混悬剂联合外用糠酸莫米松乳膏及类人胶原蛋白修复敷料治疗特应性皮炎 35 例疗效研究》一文中研究指出目的:探讨地氯雷他定干混悬剂联合外用糠酸莫米松乳膏及类人胶原蛋白修复敷料治疗特应性皮炎(AD)的临床效果,观察联合方案对AD复发的影响。方法:选取68例特应性皮炎患者,随机分为治疗组(35例)和对照组(33例),治疗组采用口服地氯雷他定干混悬剂联合外用糠酸莫米松乳膏及类人胶原蛋白修复敷料治疗,对照组采用口服地氯雷他定干混悬剂和外用糠酸莫米松乳膏治疗。观察两组治疗前后的皮损消退和瘙痒改善情况以及病情复发之间的差异。结果:经过1～8周治疗,在治疗AD的治愈率和总有效率上治疗组明显高于对照组(P<0.05),随访两月病情出现复发的例数治疗组3例(占8.6%),对照组16例(占48.5%),治疗组明显低于对照组,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:口服地氯雷他定干混悬剂联合外用糠酸莫米松乳膏及类人胶原蛋白修复敷料对特应性皮炎的临床疗效显着且病情控制后不易出现复发,类人胶原蛋白修复敷料为外用医学保湿剂,长期使用安全性高。(本文来源于《陕西医学杂志》期刊2018年11期）
王怀湘,李建明,郑金光,白晓东[10]（2018）在《类人胶原蛋白敷料联合超脉冲CO_2点阵激光治疗凹陷性痤疮瘢痕的疗效和安全性》一文中研究指出目的评价类人胶原蛋白敷料联合超脉冲CO_2点阵激光治疗面部凹陷性痤疮瘢痕的疗效和安全性。方法选择2015-05至2016-12就诊的面部痤疮凹陷性瘢痕患者76例,随机分为对照组和治疗组,各38例。对照组采用超脉冲CO_2点阵激光,间隔3个月治疗1次,共4次。治疗组在点阵激光术后给予类人胶原蛋白敷料外用。采用ECCA评估法评价皮损,对比两组患者的瘢痕评分、急性炎性反应红斑和疼痛持续时间、结痂时间、痂皮完全脱落时间、误工期、不良反应等。结果两组患者治疗后ECCA评分均比治疗前明显下降,治疗组比对照组下降更明显(P<0.05);治疗组术后红斑持续时间(1.25±0.62)d,疼痛持续时间(1.46±0.77)d,均明显短于对照组,差异有统计学意义(t=-2.483,P=0.015;t=-3.219,P=0.002);两组术后结痂时间对比,差异无统计学意义(t=-0.439,P=0.066),但治疗组痂皮完全脱落时间、误工期均短于对照组,差异有统计学意义(t=-3.049,P=0.003;t=-2.197,P=0.031);治疗组患者主观感受和舒适程度评价优于对照组,差异有统计学意义(Z=-2.197,P=0.028),治疗组患者满意率(68.42%)高于对照组(44.74%),差异有统计学意义(χ~2=4.338,P=0.037);治疗组色素沉着发生率5.26%,低于对照组的21.05%,差异有统计学意义(χ~2=4.145,P=0.042),两组患者均未出现水泡、感染和增生性瘢痕等不良反应。结论联合外用类人胶原蛋白敷料可明显提高超脉冲CO_2点阵激光术后痤疮凹陷性瘢痕患者的治疗效果,缩短急性期红斑持续时间和疼痛持续时间,促进愈合,缩短误工期,减少不良反应,改善患者术后不良感受,提高生活质量。(本文来源于《武警医学》期刊2018年07期）
类人胶原蛋白论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
研究背景烧伤和创伤导致的大面积全层皮肤缺损,会引起一系列危及生命的严重后果,因此,快速修复缺损创面至关重要。目前,自体刃厚皮肤移植仍是修复烧伤导致的大面积皮肤缺损的标准治疗方法。大面积烧伤患者自体皮源缺乏,往往需要通过将刃厚皮处理成微粒皮来扩大植皮的扩展比例,但这是以牺牲创面愈合质量为代价的。胶原蛋白是细胞外基质的重要组成成分,与合成材料相比,在促进创面愈合方面具有更优良的生物特性。目前,胶原蛋白大多是从动物结缔组织提取而来,存在一定的病毒隐患,且成本高产量低。将人类胶原蛋白基因导入基因工程菌,通过基因工程技术获取的重组人胶原蛋白安全性高,成本低,能大规模产业化生产。此外,重组胶原蛋白增加了亲水基团,水溶性提高,可制备出胶原蛋白浓度较高的水凝胶。而水凝胶材料的保水性能又能为创面提供湿润的愈合环境,从而加快创面愈合速度,改善愈合质量。由于具备优良的生物特性,胶原蛋白也是制备人工真皮的主要材料。人工真皮主要用来充当真皮修复过程中引导细胞迁移增殖和胶原排列的支架,帮助完成真皮的重构和血管化,可加快创面愈合速度,改善创面愈合后皮肤弹性、柔软性及机械耐磨性。但目前人工真皮用于全层创面修复需要经过2次手术,增加了病人的痛苦和负担。本研究首先以重组人胶原蛋白为原料制备水凝胶并进行相关性能检测,并选用以猪肌腱胶原蛋白为原料的皮耐克作为人工真皮的代表,然后将该水凝胶和人工真皮皮耐克两种胶原材料分别作为微粒皮移植覆盖物用于修复大鼠全层皮肤缺损创面,并进行创面愈合速度和愈合质量的疗效评价。目的本研究拟制备以重组人胶原蛋白为原料的水凝胶,选用以猪肌腱胶原蛋白为原料的皮耐克作为人工真皮的代表,探索该水凝胶和人工真皮皮耐克分别作为微粒皮移植覆盖物修复全层皮肤缺损创面的治疗效果,为临床修复全层皮肤缺损创面提供参考。方法1.重组人胶原蛋白水凝胶的制备及表征1.1以DMEM/F12培养基配制浓度为10%的胶原蛋白溶液,通过海藻酸盐与Ca2+反应交联得到胶原蛋白水凝胶;1.2观察胶原蛋白溶液成胶后的状态;扫描电镜观察水凝胶微观结构;1.3对水凝胶体外溶胀和降解性能进行检测;1.4将水凝胶包埋在大鼠皮下,观察体内降解速度。2.重组人胶原蛋白水凝胶对部分创面愈合相关细胞的影响2.1CCK-8法评价水凝胶浸提液对Ha Ca T细胞、人成纤维细胞、HUVEC3种细胞的毒性;2.2细胞划痕实验和Transwell实验评价水凝胶浸提液对3种细胞迁移能力的影响。3.重组人胶原蛋白水凝胶与人工真皮皮耐克作为微粒皮覆盖物修复大鼠全层皮肤缺损创面的疗效评价3.1创面愈合速度制备SD大鼠全层皮肤缺损创面模型,移植微粒皮后分别以胶原蛋白水凝胶、人工真皮皮耐克、凡士林纱布作为覆盖物修复创面,以凡士林纱布组作为对照,比较创面愈合速度。3.2创面愈合质量3.2.1创面真皮层形成术后第7天,14天,21天,35天进行创面取材。HE和Masson染色比较各组创面真皮层形成情况,并与正常皮肤组织比较;3.2.2创面基底膜形成Ⅳ型胶原蛋白免疫组化染色比较各组创面基底膜形成情况,并与正常皮肤组织比较;3.2.3创面胶原蛋白沉积通过苦味酸天狼猩红染色、RT-q PCR、WB检测术后第35天创面上皮化后各组胶原蛋白沉积情况,并与正常皮肤组织比较;3.2.4创面TGFβ1、TGFβ3、α-SMA的表达通过免疫组化染色、RT-q PCR、WB检测术后第35天创面上皮化后各组TGFβ1、TGFβ3、α-SMA的表达情况。3.3促进创面愈合的机制研究3.3.1创面细胞增殖速度Ki67免疫组化染色比较各组创面细胞增殖情况,并与正常皮肤组织比较;3.3.2创面毛细血管新生CD31免疫组化染色比较各组创面毛细血管新生情况;3.3.3创面VEGF的表达通过免疫组化染色、RT-q PCR、WB检测早期各组创面VEGF表达情况。3.4 HE和Masson染色观察胶原蛋白水凝胶和人工真皮皮耐克分别作为微粒皮覆盖物时促进全层创面修复的过程。结果1.重组人胶原蛋白水凝胶的制备及表征成功制备出浓度为10%的胶原蛋白水凝胶;电镜下可观察到多孔海绵状结构;在60min达到溶胀平衡,最大溶胀度为1800%;在体外5-6天时降解速度最快,7天降解完全;在体内5天降解约40%,10天降解约80%,15天降解完全。2.重组人胶原蛋白水凝胶对部分创面愈合相关细胞的影响水凝胶浸提液对3种细胞毒性作用均较小,可促进Ha Ca T细胞增殖,成纤维细胞存活率在90%以上,HUVEC存活率在70%以上;细胞划痕实验和Transwell实验均证实水凝胶浸提液可促进3种细胞的迁移。3.重组人胶原蛋白水凝胶与人工真皮皮耐克作为微粒皮覆盖物修复大鼠全层皮肤缺损创面的疗效评价3.1创面愈合速度术后7天、14天、21天水凝胶和皮耐克覆盖微粒皮组创面愈合率均高于凡士林纱布组,差异有统计学意义,水凝胶组与皮耐克组无差异。3.2创面愈合质量3.2.1创面真皮层形成术后21天,水凝胶和皮耐克覆盖微粒皮组均有真皮组织形成,第35天真皮组织较为成熟,与正常皮肤相近,而凡士林纱布组第35天为致密胶原沉积的瘢痕组织;3.2.2创面基底膜形成术后21天,水凝胶和皮耐克覆盖微粒皮组均有连续的Ⅳ型胶原蛋白阳性基底膜样结构形成,第35天基底膜逐渐连续,而凡士林纱布组第35天仍无基底膜形成;3.2.3创面胶原蛋白沉积苦味酸天狼猩红染色、RT-q PCR、WB证实术后35天,水凝胶和皮耐克覆盖微粒皮组创面胶原沉积均少于凡士林纱布组,差异有统计学意义,水凝胶组与皮耐克组无差异;3.2.4创面TGFβ1、TGFβ3、α-SMA的表达免疫组化染色、RT-q PCR、WB证实术后35天,水凝胶和皮耐克覆盖微粒皮组创面TGFβ1、α-SMA表达水平均低于凡士林纱布组,TGFβ3表达水平均高于凡士林纱布组,差异有统计学意义。3.3促进创面愈合的机制研究3.3.1创面细胞增殖速度术后7天、14天、21天水凝胶和皮耐克覆盖微粒皮组创面Ki67阳性(提示高增殖活性)细胞数量均高于凡士林纱布组,差异有统计学意义,水凝胶组与皮耐克组无差异;3.3.2创面毛细血管新生术后7天,皮耐克覆盖微粒皮组创面CD31阳性新生毛细血管数量高于水凝胶组和凡士林纱布组,差异有统计学意义;3.3.3创面VEGF的表达免疫组化染色、RT-q PCR、WB证实皮耐克覆盖微粒皮组术后7天创面VEGF表达水平高于水凝胶组和凡士林纱布组,差异有统计学意义。3.4通过对术后7天、14天、21天、35天创面HE和Masson染色的动态观察证实,水凝胶和皮耐克覆盖微粒皮组促进创面愈合的速度较凡士林纱布组快。结论综合本课题全部研究,我们得到如下结论:1、成功制备出重组人胶原蛋白水凝胶,具有较好的吸水保水性能和合适的降解速率,且上述性能均可以通过调节原料成分比例和交联程度进行调整,制备过程简单,成本低;2、将水凝胶浸提液作用于Ha Ca T细胞、成纤维细胞、HUVEC,证明其对上述3种细胞的毒性作用均不明显,还可促进Ha Ca T细胞增殖和上述3种细胞迁移;3、将胶原蛋白水凝胶和人工真皮皮耐克分别作为微粒皮移植覆盖物修复大鼠全层皮肤缺损创面,以凡士林纱布作为对照,证明二者均可以加快创面细胞增殖速度、促进早期创面毛细血管新生、促进早期创面VEGF的表达,从而促进创面愈合;促进真皮组织和基底膜形成,从而提高创面愈合质量;降低TGFβ1和α-SMA的表达水平,增高TGFβ3的表达水平,从而预防创面过度收缩和减轻瘢痕增生。并首次证明人工真皮皮耐克作为微粒皮覆盖物一步法修复全层皮肤缺损创面的可行性。综上所述,本研究制备的胶原蛋白水凝胶,以及将人工真皮皮耐克作为微粒皮覆盖物一步法修复全层皮肤缺损创面的治疗方法,都为临床全层皮肤缺损创面的修复提供了新的思路。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
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