2014—2017年河南省副猪嗜血杆菌分离菌株的PCR鉴定及分型

论文摘要

为了解河南省猪场副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis, HPS）病的血清型流行情况,本研究于2014—2017年从河南省不同县市采集813份发病猪的肺、关节液等病料样品进行流行病学调查。首先通过TSA培养基分离病原,然后采用PCR法进行分子鉴定及分型鉴定。选取3个不同血清型分离株作为代表毒株进行外膜蛋白OMP基因的扩增及序列分析。结果显示HPS总分离率为7.75%（63/813）,不同年份的分离率为5.49%（13/237）～11.31%（19/168）,血清4型、5型、14型、不可分型（NT）的分离率分别为38.10%（24/63）、33.33%（21/63）、7.94%（5/63）、20.63%（13/63）,血清4型、5型为优势血清型,其次是14型和不可分型的菌株。三个代表毒株与国内外毒株核苷酸相似性为98.6%～99.9%,氨基酸相似性为99.0%～100.0%。遗传进化树分析表明,Henan-HPS-ZK5和Henan-HPS-KF4、Henan-HPS-LY14分别处于两个分支,其中代表血清4型和14型的毒株Henan-HPS-KF4和Henan-HPS-LY14位于同一亚支,而血清5型的毒株Henan-HPS-ZK5与前两者距离较远。OMP氨基酸序列分析显示,Henan-HPS-ZK5第57位发生了T57（Thr）→A57（Ala）的突变;血清4型、9型和14型HPS第89位、115位、233位和239位氨基酸分别为Gln（Q）、Glu（E）、Arg（R）和Gly（G）,而其他血清型均为Arg（R）、Lys（K）、Gly（G）和Arg（R）（未定型菌株除外）。本研究数据在一定程度上反映了河南省HPS病发病情况及血清型流行情况,从而为河南地区HPS病的疫苗研发、控制提供了科学客观的参考依据。

论文目录

1 材料与方法

1.1 样品采集

1.2 主要试剂

1.3 病原的分离纯化

1.4 引物设计与合成

1.5 分离菌株基因组DNA的提取

1.6 分离菌株16S rDNA鉴定

1.7 副猪嗜血杆菌的分子分型鉴定

1.8 OMP基因的PCR扩增及测序

1.9 OMP基因序列同源性比较及进化树分析

2 结果

2.1 病原的分离纯化

2.2 分离菌株的16S rDNA鉴定

2.3 分离菌株的分子分型鉴定

2.4 HPS OMP基因的扩增及测序

2.5 基于HPS OMP基因序列相似性及进化树分析

2.6 HPS OMP氨基酸序列分析

3 讨论

4 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 邱静静,丁轲,余祖华,贾艳艳,张春杰,汪洋,赵战勤

关键词: 副猪嗜血杆菌,分型,序列分析,外膜蛋白

来源: 畜牧兽医学报 2019年08期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 洛阳市活载体生物材料与动物疫病防控重点实验室,河南科技大学宏翔生物饲料实验室

基金: “十三五”国家重点研发计划项目(2016YFD0500700)

分类号: S852.61

页码: 1649-1657

总页数: 9

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2014—2017年河南省副猪嗜血杆菌分离菌株的PCR鉴定及分型

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