导读:本文包含了细胞扩增论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:细胞,造血干细胞,肝细胞,分子,免疫性,内皮,心肌炎。
细胞扩增论文文献综述
傅恭博[1]（2019）在《人原代肝细胞来源的肝前体样细胞扩增、分化及疾病模拟》一文中研究指出研究背景及目的肝细胞肝癌(Hepatocellular Carcinoma,HCC)是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一,我国每年肝细胞肝癌死亡人数占到全球肝细胞肝癌死亡人数的将近一半。肝细胞肝癌的发生发展错综复杂,具体机制有待进一步研究。我国乙肝患者基数庞大,绝大多数肝细胞肝癌患者携带乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)感染标志。目前而言,肝移植是治疗肝细胞肝癌引起的终末期肝病(End Stage Liver Disease,ESLD)较为有效的手段。尽管器官捐献的数量在逐年上升,但供体数量仍然远远不能满足患者需求。随着生命医学领域的长足进步,肝再生(Liver regeneration)研究不断深入,一方面帮助人们进一步理解肝细胞肝癌的发生发展机制,另一方面帮助人们进一步完善终末期肝病的治疗手段。虽然肝脏在人体内具有极强的再生能力,然而原代肝细胞(Primary hepatocytes,PHCs)却无法在体外长期功能维持与数量扩增,这导致基于肝细胞的细胞治疗和疾病模拟无法顺利开展。寻找肝细胞源成为了亟待解决的问题,科学家们尝试采取多种途径体外获得肝样细胞(Hepatocyte-like cells)。惠利健教授团队等通过异位表达肝脏特异性转录因子(Hepatic specific transcription factors),将成纤维细胞直接转分化为诱导肝样细胞(induced Hepatocyte-like cells,iHeps)或诱导肝前体样细胞(induced Hepatic stem-like cells,iHepSCs),为体外肝细胞的获取提供了一种便捷的方式。然而,该过程涉及外源基因导入,其应用受到遗传变异、致瘤性等限制。为了规避基因插入导致的风险,基于小分子诱导的化学重编程技术(Chemical reprogramming technology)因其在控制细胞命运方面的效率性和安全性,近年来引起了人们的广泛关注。国内外科学家已经实现单纯小分子条件下重编程成纤维细胞为多能干细胞或神经元样细胞,并有文章报道了化学重编程的动态分子机制。消化系统方面,化学重编程也取得了一定的成绩,王韫芳教授团队报道了一种在基质细胞存在条件下逆转胃上皮细胞为诱导内胚层祖细胞(induced Endodermal progenitor cells,iEndoPCs)的方法,上述祖细胞可进一步分化为肝样细胞、胰腺内分泌样细胞和肠上皮样细胞。近期,Ochiya教授团队和本课题组几乎同时报道了一类小分子逆转鼠原代肝细胞为肝前体样细胞的方法,可在体外实现肝细胞大量扩增,并且这种肝细胞来源的肝前体样细胞(Hepatocyte-derived liver progenitor-like cells,HepLPCs)极易肝向分化,为体外肝细胞获取提供了一种全新的思路。尽管如此,目前尚没有针对人原代肝细胞体外扩增与分化的系统研究。综合上述问题,本研究在鼠原代肝细胞成功逆转与扩增前提下,拟进一步研究人原代肝细胞的体外培养体系。本研究的开展将拓宽体外肝细胞来源,为肝病体外模拟及治疗提供新策略,对肝脏再生医学发展和肝癌治疗探索具有重要的科学意义。研究方法1.获取经手术切除的血管瘤旁正常组织分离人原代肝细胞,通过Percoll密度梯度离心和流式细胞仪分选,排除肝脏前体细胞污染;小分子条件培养基体外培养人原代肝细胞,荧光定量PCR等手段研究人原代肝细胞的体外转化;实时成像技术拍摄人原代肝细胞向肝前体样细胞转化过程,记录细胞分裂次数,计算转化效率。2.克隆形成实验观察小分子条件培养基中各个小分子对人原代肝细胞向肝前体样细胞转化的影响;不同时间点细胞计数,绘制HepLPCs的生长曲线,计算倍增时间,EdU实验检测细胞增殖能力;核型分析实验检测不同供者来源的HepLPCs核型稳定性。3.构建肝细胞特异性启动子TBG启动的TBG-EGFP-T2A-puro慢病毒系统,谱系示踪实验观察绿色荧光标记的肝细胞在小分子条件培养基中的转化;记录不同供者来源的HepLPCs传代情况,核型分析实验检测不同代数核型稳定性。4.CCK-8、免疫荧光、荧光定量PCR以及Western Blot等实验研究常用表观遗传调节剂对人原代肝细胞向肝前体样细胞转化的影响;SIRT1选择性抑制剂和SIRT1干扰实验验证SIRT1相关信号通路在上述转化中的作用。5.转录组测序、荧光定量PCR、免疫荧光以及流式细胞技术等分析HepLPCs的表型特征。6.肝向成熟培养基分化HepLPCs,荧光定量PCR、流式细胞技术以及转录组测序等检测肝向分化情况;糖原储存、白蛋白分泌、氨清除以及药物代谢等实验检测肝向分化后的细胞功能;借助FAH基因缺陷联合免疫缺陷小鼠,研究肝向分化后的HepLPCs体内移植修复肝脏及治疗肝衰竭能力。7.HepLPCs低粘附成球培养叁维肝向分化后,荧光定量PCR、Western Blot以及免疫荧光等检测HBV感染相关宿主基因表达及翻译情况;HBV病毒感染3D-HepLPCs-Hep细胞球,检测HBV-DNA、HBsAg、HBeAg分泌情况及cccDNA。8.分离HBV感染患者原代肝细胞,小分子条件培养基体外培养,观察HBV感染情况。9.构建靶向cccDNA的CRISPR/CAS9腺病毒,联合恩替卡韦,借助HBV感染的3D-HepLPCs-Hep细胞球模型,进行抗病毒研究。研究结果1.经Percoll密度梯度离心,流式细胞仪分选去除CD24阳性和EpCAM阳性的细胞,获得ASGPR1阳性的人原代肝细胞;人原代肝细胞在小分子条件培养基中肝系标志物逐渐下降,前体相关标志物逐渐升高,大约10天后呈现克隆化生长;细胞培养第2天到第8天实时成像结果显示,约50%的细胞在小分子条件培养基作用下分裂大于2次,实现高效转化。2.各个小分子从条件培养基中依次删减后,克隆形成效率随之降低,说明各因子对转化均有正向影响;HepLPCs倍增时间约为25小时,部分供者来源的细胞在第10代仍然保持旺盛的增殖能力;核型分析结果显示,不同供者来源的HepLPCs具有高度的核型稳定性。3.TBG启动绿色荧光标记的肝细胞在小分子条件培养基中向肝前体样细胞转化并扩增,表面标志物变化情况与上文分选纯化的细胞相似;HepLPCs传代次数存在个体差异,多数集中在10到20代之间,10代以内不同代数间核型具有高度稳定性。4.尼克酰胺促进转化过程中细胞衰老和凋亡,部分通过抑制SIRT1相关信号通路从而影响转化效率;SIRT1选择性抑制剂和SIRT1干扰实验结果均显示,SIRT1抑制影响转化效率,并且在传代过程中整体撤除7个小分子会影响SIRT1相关信号通路进而出现细胞凋亡。5.HepLPCs表达谱水平介于原代肝细胞和胎肝细胞之间,既表达部分肝前体样标志物又表达部分肝系标志物。6.HepLPCs可在1周左右快速肝向分化,聚类结果显示HepLPCs-Hep的肝功能相关基因集接近原代肝细胞,如ABC转运蛋白、胆汁分泌、细胞色素P450等;功能学实验表明,HepLPCs-Hep的糖原储存、白蛋白分泌、氨清除以及药物代谢等能力靠近原代肝细胞;HepLPCs-Hep体内细胞移植后,可重建肝脏并显着缓解模型小鼠肝衰竭状况。7.HepLPCs在低粘附板中形成细胞球,肝向分化后HBV受体基因NTCP显着上调,为后续HBV感染提供基础;3D-HepLPCs-Hep细胞球可被HBV感染,能分泌HBV-DNA、HBsAg、HBeAg,细胞内形成可被检测的cccDNA。8.HBV感染患者来源的原代肝细胞可被小分子条件培养基转化并扩增,扩增状态中存在原有HBV丢失,部分患者来源的HepLPCs叁维肝向分化后HBV可再激活。9.CRISPR/CAS9可靶向切割cccDNA,单独使用或者联合恩替卡韦使用都能很好的治疗HBV感染。研究结论本研究在前期工作基础上体外运用小分子条件培养基诱导人原代肝细胞向肝前体样细胞转化并扩增,这种肝细胞来源的肝前体样细胞——HepLPCs增殖迅速且核型稳定。随后鉴定这种体外肝细胞命运转变与SIRT1相关,并且详细描述了HepLPCs的表型特征,建立了HepLPCs的快速肝向分化体系。应用方面,肝向分化后的HepLPCs移植入FAH基因缺陷联合免疫缺陷小鼠体内,可重建其病变肝脏并显着改善肝衰竭症状。HepLPCs叁维肝向分化后还可用于HBV感染与抗病毒研究,验证了CRISPR技术靶向切割cccDNA在HBV感染治疗中的作用。本研究拓宽了体外肝细胞来源,为肝病体外模拟及治疗提供了新策略,对肝脏再生医学发展和肝癌治疗探索具有重要的科学意义。(本文来源于《中国人民解放军海军军医大学》期刊2019-05-01）
王鸣[2]（2019）在《骨髓微环境中内皮细胞对造血干细胞扩增的调控研究》一文中研究指出造血干细胞(Hematopoietic stem cells,HSCs)是造血系统中具有自我更新和分化成所有成熟血液谱系能力的一类群细胞,它们对于维持机体的造血内稳态以及免疫功能尤为重要。HSCs移植已经被认为是治疗部分造血系统恶性肿瘤、骨髓和造血障碍以及免疫缺陷的有效疗法,但是在临床上仍存在局限,比如骨髓移植以及外周血HSCs移植的配型困难、供体不足以及免疫排斥反应等。而脐带血HSCs移植虽然克服了这些困难,但单个脐带中的HSCs的数量有限,不足以满足病人的造血重建需求。HSCs的体外扩增是解决这一困难的最直接而有效办法。但由于缺乏良好的培养体系,目前HSCs的体外扩增还远远不能达到临床要求。目前已有研究证明主动脉-性腺-中肾(aorta–gonad–mesonephros,AGM)区以及卵黄囊动脉附近的内皮细胞可以支持HSCs的体外扩增,而其他成体组织分离的内皮细胞没有这种能力。经过不断尝试,我们确定无血清共培养体系,将卵黄囊内皮细胞与LSK(Lin~-Sca1~+ckit~+)细胞共培养九天后,与单独培养LSK细胞的对照组相比较,共培养后的LSK细胞及HSCs(Lin~-Sca1~+ckit~+CD150~+CD48~-)扩增数量明显高于对照组,LSK细胞数量由3x10~3个九天后可扩增到约1.3x10~5个,扩增约43倍,而对照组由3x10~3个九天后扩增到约6.7x10~3个,扩增约2倍;共培养后九天后,HSCs的数量可扩增到约为3x10~3个,而对照组HSCs数量只有约100个,与共培养实验组差异明显。我们收集共培养九天后的所有细胞进行了竞争性骨髓移植实验,移植后第1、2、3、4个月分析嵌合率和谱系分化,结果发现体外扩增的HSCs具有更强的造血重建能力,且偏向淋巴系细胞分化。以上实验说明卵黄囊内皮细胞可促进HSCs的有效扩增。我们通过接触型共培养和非接触型共培养(Transwell)实验初步证明卵黄囊内皮细胞通过膜型因子与分泌型因子共同调控HSCs的体外扩增,其中膜型因子可能起更重要的作用,具体因子及调控机制我们还将深入研究。Notch信号通路已被多次证明与HSCs自我更新、增殖等密切相关。我们构建了不同活化程度Notch信号的卵黄囊内皮细胞系,在体外共培养实验中,我们发现内皮细胞中Notch信号通路无论是活化还是抑制状态都不能扩增LSK细胞,推测可能是我们的培养体系中缺少了微环境基质细胞的作用或CXCL12、IL11等细胞因子的作用。本研究为进一步揭示骨髓微环境内细胞信号对HSCs的调控提供了科学依据,为解决HSCs体外扩增难题提供了新的思路。(本文来源于《上海师范大学》期刊2019-05-01）
陈蓉,吕宏祥,龚祥梅,许化溪,苏兆亮[3]（2018）在《PGE2调控EAM小鼠B10细胞扩增的机制研究》一文中研究指出研究背景:经历炎症发生、炎症消退、心肌功能重塑的过程。B10细胞是一群以IL-10产生为主要特征的调节性B细胞(regulatory B cells, Breg),具有负向免疫调节功能。本研究研究发现,在实验性自身免疫性心肌炎(experimental autoimmune myocarditis, EAM)疾病条件下,脾脏和心脏组织内B10细胞比例增加,通过分泌IL-10发挥抑制炎症的作用。预实验研究提示EAM模型鼠体内PGE2的表达增加,实验表明PGE2促进B10细胞的体外扩增。因此,明确PGE2对B10细胞的数量和功能的影响以及在EAM小鼠炎症消退过程中调控作用;对研究炎症疾病发生及转归具有重要作用。研究目的 :本研究旨在探讨阐明PGE2促进B10细胞扩增,促进IL-10分泌的机制研究。研究方法 :体外PGE2处理经磁珠分选B细胞,LPS和PMA、ionomycin、Monensin联合刺激最后5h,anti-IL-10流式抗体检测B10的比例,WB检测PGE2调控B细胞向B10分化中重要转录因子的改变;PGE2处理由磁珠分选得到的B10细胞,CFSE检测B10的增殖,并且在促Th17分化的培养条件下与na?ve T细胞共培养,流式检测Th17细胞的分化情况。体内通过使用WT小鼠以及CD19-CRE小鼠和EPs~(flox/flox)小鼠进一步明确PGE2对B10细胞以及在EAM小鼠炎症消退过程中的调控作用。研究结果 :(1)EAM模型鼠脾脏和心脏组织中B10比例增加,同时PGE2的含量增高。(2)PGE2通过调控IL-10重要转录因子AP-1,促进B10分泌IL-10,调控B10的抑制功能。(3)B10细胞能够有效地抑制EAM小鼠Th17细胞的分化,缓解心肌的纤维化,B10细胞的敲除EAM心肌损伤加重。研究结论 :PGE2是B10调控器官炎症损伤到受损组织修复的关键卡控点。(本文来源于《第十叁届全国免疫学学术大会摘要汇编》期刊2018-11-07）
杨鹏[4]（2018）在《p18小分子抑制剂促进造血干细胞扩增》一文中研究指出造血干细胞(Hematopoietic Stem Cell,HSC)独特的自我更新和分化能力,使其在治疗多种致死性疾病中发挥了重要的作用。然而,造血干细胞的来源非常有限,这极大的阻碍了其广泛的治疗用途。虽然,现有的一些病毒介导的方法,可以用于干细胞扩增,但是这些方法,都存在很大的致癌风险。我们急需寻找新型扩增方法和药物,它必须能够增加干细胞的自我更新,而不诱发癌症或者患癌风险。我们的竞争性骨髓抑制实验证实,p18基因敲除后,可以显着地增加造血干细胞的自我更新,这为开发新型的造血干细胞扩增药物提供了新的靶点。我们利用反向计算化学基因组学技术,构建了p18蛋白与小分子的对接口袋,并用于虚拟筛选,得到了一系列结构新颖的化合物;鹅卵石样区域形成细胞实验,证实了化合物对造血干细胞的扩增能力,其中,化合物11的ED50为3.61uM;以化合物11为先导物,进行了系统的化学修饰和构效关系研究,得到了活性更好的水溶性衍生物#40,ED50为5nM;我们进一步证实了#40对造血干细胞的扩增活性和靶点专一性;同时,体外实验也表明,化合物#40的毒性较低。在此研究中,我们证实了p18蛋白对造血干细胞扩增的重要调节作用,发现了p18蛋白的第一个小分子抑制剂,为开发新型的造血干细胞扩增药物提供了一个很好的起点。(本文来源于《第十四届中国药学会青年药学论坛报告集》期刊2018-07-03）
罗霞,付小哲,李宁求,林强,黄志斌[5]（2018）在《基于CPB细胞扩增体系的鳜弹状病毒增殖条件的优化》一文中研究指出为获知鳜弹状病毒(Siniperca chuatsi rhabdovirus,SCRV)QY株在体外培养细胞中最适增殖条件,以鳜脑细胞系(Chinese perch brain cell line,CPB)为增殖体系,采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,q RT-PCR)技术所测病毒拷贝数为判断指标,比较同步接毒和异步接毒2种接种方式以及病毒接种量、血清浓度等培养条件对病毒增殖的影响,确定SCRV-QY株在CPB细胞中的最适增殖条件。结果显示,单位体积病毒增殖量方面,异步接毒法优于同步接毒法,以感染复数(multiplicity of infection,MOI)为10将病毒接种长满单层的CPB细胞中,28°C吸附1.5 h,用含2%胎牛血清的L15培养液于28°C培养时,病毒增殖量最高,为5.59×10~(10)拷贝/mL;而从单位成本所获病毒量考虑,同步接毒法筛选出的4种增殖条件单位成本所获的病毒产量优于异步接毒法,其中当MOI=0.03、胎牛血清终浓度为6%时,同步接种对数生长中期的CPB细胞,28°C恒温培养70 h后收获病毒液,单位成本所获病毒量最高,为4.88×10~(13)个拷贝/元。综上所述,本研究以病毒增殖量和培养基成本作为考量,优化SCRV-QY株的增殖条件,可为SCRV疫苗低成本、规模化生产提供理论依据。(本文来源于《水产学报》期刊2018年09期）
李新洋,杨霈瑶,杨乃波[6]（2018）在《从单个B细胞扩增全人源抗体重链和轻链基因方法的建立》一文中研究指出目的建立从单个B细胞扩增天然配对的B细胞受体(BCR)重链和轻链基因的方法。方法以用于亚洲人全基因组测序的"炎黄(YH)"细胞的永生化细胞系为材料,运用流式细胞术得到CD19+的单个B细胞,在单管里对单细胞进行裂解,获得总RNA,逆转录生成c DNA,两步巢式PCR扩增来源于同一个B细胞的天然配对的抗体重链和轻链,获得单个B细胞的全人源抗体的可变区序列信息。结果建立了稳定的单细胞BCR扩增方法,抗体基因扩增成功率高达80%以上。运用此方法,流式细胞术分选的单个B细胞在-80℃冻存2周以内仍能成功扩增;同一管里扩增产物经TA克隆和Sanger测序验证,既包含同一个B细胞的抗体重链基因,也包含其轻链基因,即含有天然抗体配对信息。自主设计和整理了一套行之有效的单细胞BCR引物。结论成功建立从单个B细胞扩增全人源抗体重链和轻链基因的方法。(本文来源于《细胞与分子免疫学杂志》期刊2018年04期）
杨宜球[7]（2018）在《小分子造血干细胞扩增剂的研究进展》一文中研究指出造血干/祖细胞(HSCs)的体外扩增一直是干细胞领域的研究热点,目前有很多的方法在体外对HSCs进行扩增,取得了一定了成果。本文主要从目前已发现的对HSCs具有扩增效应的小分子化合物以及可能的作用的信号通道进行综述,为深入研究HSCs的扩增机制以及寻找新型的对HSCs具有扩增效应的小分子化合物提供参考。(本文来源于《医学研究杂志》期刊2018年04期）
周腾飞,向代民,丁劲[8]（2017）在《Shp2激活β-catenin促进肝癌干细胞扩增并可预测肝癌化疗效果》一文中研究指出【据《Hepatology》2017年5月报道】题:Shp2通过激活β-catenin促进肝癌干细胞扩增并可预测肝癌患者的化疗效果(作者Xiang DM等)已有研究报道Shp2(Src-homology 2 domain–containing phosphatase 2)在胚胎干细胞和成体干细胞的干性维持和自我更新中发挥重要的作用,但其在肿瘤干细胞中的作用目前并不清楚。来自上海东方肝胆外科医院的Xiang等研究发现Shp2在化疗抵抗的肝癌和复发患者的肝癌中均呈高表达。在流式分选的EpCAM~+或CD133~+肝癌干细胞和经低黏附成球培养富集的患者原代肝癌干细胞中,Shp2的表达也显着升高。研究还发现,Shp2(本文来源于《临床肝胆病杂志》期刊2017年07期）
李良喆[9]（2017）在《细胞扩增生物反应器控制系统的研究》一文中研究指出目的:近年来,随着科学技术的发展,动物细胞培养技术被广泛应用于生物医药产品的工业生产中,如蛋白质药物研发、干细胞移植、疫苗生产、人造组织器官等领域。例如造血干细胞移植可长期重建造血和免疫,它适用于治疗造血干、祖细胞或相关基因有缺陷的疾病,如白血病、重度免疫缺损、自身免疫病等,是一种重要的生物治疗或细胞治疗方法。但往往人体本身可提供的造血干细胞不足,这就迫切需要在体外对这些干细胞进行大规模扩增。生物反应器的提出就为造血干细胞的体外扩增提供了一种非常有效的方法。细胞的培养扩增过程是极其复杂的生物化学反应过程,其代谢必须在适宜的周围环境中才能有效进行。国外已经有比较成熟的生物反应器,但国内还没有商品化的动物细胞生物反应器。本文对波浪式生物反应器的控制系统进行研究,旨在完成一套基于波浪式生物反应器的细胞培养条件的控制系统,使其能更好的应用在细胞的扩增培养上,进而推动我国生物反应器行业向前发展。方法:通过对当前生物反应器培养条件的控制方法和控制系统进行分析和讨论,提出适合波浪式生物反应器培养系统的控制方法。控制系统的设计主要可以分为叁部分:培养条件控制方法的设计、控制系统软/硬件部分设计、仿真及实际实验验证部分。关于控制方法的设计,根据温度控制要求及温度控制大滞后的特点,设计出Fuzzy-PID控制算法;根据PH控制要求及PH过程强烈非线性的特性,对分段式变增益PID进行改进,设计出四区段变增益PID控制算法;根据溶解氧浓度非定值控制的特点,设计出TP-PID的控制算法。关于控制系统软/硬件部分的设计,采用单片机为主控芯片,结合MPLAB、MATLAB等实现上、下位机的连接与配合。实验部分,在仿真实验的基础上进一步通过实际实验验证控制算法的效果以及控制系统的性能。内容:本文研究工作主要包括以下几个方面:(1)生物反应器控制系统分类及参数控制方法调研、控制系统控制方案设计。通过大量查阅文献并与相关行业人士接触,调研生物反应器细胞培养的最新进展情况。分析各类控制方法和控制系统的优缺点,从而为文章控制系统的选择和控制方法的提出提供研发的现实意义与应用前景。设计系统整体控制方案,通过比较硬件元器件的性能以及满足应用的情况,选出最佳的系统方案。(2)控制系统硬件设计与实现。系统硬件设计主要包括下位机执行部件的选择、上位机主控部件的选择以及上、下位机之间的集成。下位机硬件部分由主控芯片、检测器件、执行器件、传输线等几部分组成。主控芯片选择dspic30f6014a单片机为控制系统下位机的核心,该芯片将核心处理层及整个外围电路层如输入/输出端口、内存、定时器、计数器等全部都集成在一块芯片上,实现了实验数据的一整套的接收、计算、存储、发送功能;检测器件根据需要控制的T、PH、DO叁个培养条件分别选择Pt100、在线PH仪、在线溶解氧仪;执行器件根据控制原理选择电热毯、蠕动泵、电磁阀等。上位机主控部件根据需要选择集显示、控制、存储等功能于一体的DGUS屏,实现对控制系统的整体监控。上、下位机集成主要由它们之间的通讯线连接及统一的通讯协议实现。(3)控制系统控制算法设计与实现。本文主要设计完成了叁个控制算法,即针对温度控制的Fuzzy-PID控制算法、针对PH控制的四区段变增益PID控制算法和针对溶解氧浓度控制的TP-PID控制算法。其中,Fuzzy-PID控制算法并非采用传统的并联使用的模式,而是将两种方法整合到一起,以检测信号作为模糊控制的输入,以模糊控制的输出作为PID控制的输入,最后以PID控制的输出作为系统控制信号的输出;四区段变增益PID控制是在分段式变增益PID的基础上根据生物反应器的实际情况进行改进得到的,充分考虑了PH控制的强烈的非线性特性;溶解氧浓度控制算法的设计考虑只需将其控制在某一范围内即可,主要是参考传统控制的模式。(4)人机交互界面设计及触控配置完成。上位机人机交互界面选用DGUS屏,型号为DWT80600T080_06WT,使用Microsoft Visio Premium 2010进行图片制作,需要显示的图片主要包括系统初始化部分、主界面部分、数据输入界面部分等。触控配置使用DGUS配置工具V49,将制作好的图片导入配置工具,按照显示屏操作要求在相应区域位置添加文本显示、按键返回、RTC显示等配置操作,并设置好相应配置的变量地址、文本长度、按键值、案件效果等。将配置好触控功能的显示图片导入到DGUS屏里就完成了人机交互界面的设计。(5)仿真实验加实际实验验证算法可靠性及控制系统性能。为验证控制算法的可靠性,首先使用MATLAB软件中的Simulink软件包设计Fuzzy-PID的温度控制仿真实验和分段式变增益PID的PH控制仿真实验,两个仿真实验均以控制时间和控制精度作为控制算法性能可靠的判断依据。仿真实验验证算法可靠性之后设计实际实验进行验证。使用MPLAB软件按照算法设计编写叁种控制算法的程序并将其导入单片机进行实际实验,验证标准依然是控制的时间和稳定后的控制精度。结果:本文根据细胞培养的要求,完成了波浪式生物反应器控制系统中T、PH、DO叁个培养条件控制算法的设计,完成了控制系统硬件选择,完成了控制系统电路设计,完成了上、下位机通讯设计,完成了人机交互界面的选择和设计,完成了单片机对应程序的编写,最后在仿真实验基础上设计实际实验完成了算法可靠性的验证工作。发表了两篇论文。结论:本文介绍了各类生物反应器控制系统及控制方法,具体分析了各控制系统的优缺点,提出采用单片机作为主控芯片对波浪式生物反应器控制系统进行研究,并根据要调节的培养条件的特性设计出不同的控制方法。在实际实验进行控制时,温度控制精度可达到±0.1℃,PH控制精度可达到±0.05,溶解氧浓度精度可达到±6%。表明本文所研制的控制系统能够稳定可靠的运行且控制效果良好,说明控制系统能很好地维持细胞生长需要的适宜的环境,满足细胞培养过程的控制要求。本文的创新点在于根据不同被控条件设计出相应的控制方法,如针对温度控设计了模糊PID控制、针对PH控制设计了四区段变增益PID控制;使用dsPIC30f6014a型号单片机作为主控芯片,不仅降低了研发成本,还提高了系统灵活性,缩短了开发周期;使用DGUS屏作为人机交互界面,实现了对控制界面的搭配式设计;将系统进行模块化设计,最后集合到一起,降低了故障的影响率。(本文来源于《中国人民解放军军事医学科学院》期刊2017-05-27）
邹畅,赵盼,周文斌,付凡,韩香华[10]（2017）在《肿瘤特异性γ δ T细胞扩增体系的建立及其抗肿瘤活性研究》一文中研究指出目的:建立一种体外诱导肿瘤细胞特异性γδ T细胞的培养体系。方法:从人外周血中分离单个核细胞(PBMCs),用不同浓度的磷酸抗原(IPP)与rhIL-2联合刺激γδ T细胞增殖,观察并收集细胞,采用流式细胞仪检测刺激后CD3~+Vγ9~+的γδ T细胞数量以及比例,并计算其扩增效率。结果:经15天扩增培养后,高浓度组10μg/ml的IPP联合500IU/ml rhIL-2刺激得到的γδ T细胞的扩增效率最高,且扩增培养至第9天的γδ T细胞对肿瘤细胞有一定的杀伤活性。结论:适宜浓度磷酸抗原(IPP)联合rhIL-2能有效体外诱导具有较强抗肿瘤活性γδ T细胞的扩增。(本文来源于《现代肿瘤医学》期刊2017年10期）
细胞扩增论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
造血干细胞(Hematopoietic stem cells,HSCs)是造血系统中具有自我更新和分化成所有成熟血液谱系能力的一类群细胞,它们对于维持机体的造血内稳态以及免疫功能尤为重要。HSCs移植已经被认为是治疗部分造血系统恶性肿瘤、骨髓和造血障碍以及免疫缺陷的有效疗法,但是在临床上仍存在局限,比如骨髓移植以及外周血HSCs移植的配型困难、供体不足以及免疫排斥反应等。而脐带血HSCs移植虽然克服了这些困难,但单个脐带中的HSCs的数量有限,不足以满足病人的造血重建需求。HSCs的体外扩增是解决这一困难的最直接而有效办法。但由于缺乏良好的培养体系,目前HSCs的体外扩增还远远不能达到临床要求。目前已有研究证明主动脉-性腺-中肾(aorta–gonad–mesonephros,AGM)区以及卵黄囊动脉附近的内皮细胞可以支持HSCs的体外扩增,而其他成体组织分离的内皮细胞没有这种能力。经过不断尝试,我们确定无血清共培养体系,将卵黄囊内皮细胞与LSK(Lin~-Sca1~+ckit~+)细胞共培养九天后,与单独培养LSK细胞的对照组相比较,共培养后的LSK细胞及HSCs(Lin~-Sca1~+ckit~+CD150~+CD48~-)扩增数量明显高于对照组,LSK细胞数量由3x10~3个九天后可扩增到约1.3x10~5个,扩增约43倍,而对照组由3x10~3个九天后扩增到约6.7x10~3个,扩增约2倍;共培养后九天后,HSCs的数量可扩增到约为3x10~3个,而对照组HSCs数量只有约100个,与共培养实验组差异明显。我们收集共培养九天后的所有细胞进行了竞争性骨髓移植实验,移植后第1、2、3、4个月分析嵌合率和谱系分化,结果发现体外扩增的HSCs具有更强的造血重建能力,且偏向淋巴系细胞分化。以上实验说明卵黄囊内皮细胞可促进HSCs的有效扩增。我们通过接触型共培养和非接触型共培养(Transwell)实验初步证明卵黄囊内皮细胞通过膜型因子与分泌型因子共同调控HSCs的体外扩增,其中膜型因子可能起更重要的作用,具体因子及调控机制我们还将深入研究。Notch信号通路已被多次证明与HSCs自我更新、增殖等密切相关。我们构建了不同活化程度Notch信号的卵黄囊内皮细胞系,在体外共培养实验中,我们发现内皮细胞中Notch信号通路无论是活化还是抑制状态都不能扩增LSK细胞,推测可能是我们的培养体系中缺少了微环境基质细胞的作用或CXCL12、IL11等细胞因子的作用。本研究为进一步揭示骨髓微环境内细胞信号对HSCs的调控提供了科学依据,为解决HSCs体外扩增难题提供了新的思路。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
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