论文摘要
目的:构建多拷贝产谷氨酰胺转胺酶（MTG）的菌株,旨在提高野生谷氨酰胺转胺酶活性。方法:基于毕赤酵母核糖体DNA序列（rD NA）,构建不同拷贝数的重组毕赤酵母菌株pro/rD NA-mtg;实时荧光定量PCR （qPCR）技术测定4株重组毕赤酵母菌株,mtg基因在毕赤酵母基因组中的拷贝数为2.21,3.36, 5.72和7.62（命名:mtg-2c、mtg-3c、mtg-6c、mtg-8c）;在摇瓶水平研究了基因拷贝数对重组毕赤酵母产谷氨酰胺转胺酶的影响。结果:在相同培养条件下,mtg-3 c发酵产酶能力高于mtg-2c、mtg-6c和mtg-8c;对mtg-3c发酵上清经镍柱亲和层析纯化,Western blot鉴定纯化产物为MTG,在34-43 kDa处有两条特异性蛋白带,大小分别为38kDa和40kDa左右。纯化MTG的酶活达到3.17U/ml,是野生纯化酶活的1.75倍（野生纯化酶活1.81U/ml）。比酶活（26.3U/mg）与野生酶比活力（25.4U/mg）相当。结论:mtg-3c最适合pro和mtg的共表达,显著地提高了野生谷氨酰胺转胺酶的酶活。
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文章来源
类型: 国内会议
作者: 宋小平,宋卓芸,邵长胜,余银,张宇婷,管利
关键词: 基因拷贝数,毕赤酵母,谷氨酰胺转胺酶,共表达
来源: 中国生物工程学会第十三届学术年会暨2019年全国生物技术大会 2019-11-09
年度: 2019
分类: 基础科学
专业: 生物学
单位: 安徽医学高等专科学校药学系安徽省重组蛋白药物工程技术研究中心合肥市第一中学
分类号: Q936
DOI: 10.26914/c.cnkihy.2019.026896
页码: 488-501
总页数: 14
文件大小: 846k
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